Guía de Laboratorio de Bioquímica y Microbiología PI721-A

Práctica N◦ 3

IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS

1.1 OBJETIVO:
Familiarizar al estudiante con algunas características generales de los lípidos mediante prue-
bas químicas cualitativas, el cual en base a estas observaciones se podrá identificar los lípidos
presentes en la muestra.

1.2 INTRODUCCIÓN:
A parte del agua, carbohidratos, proteínas, los seres vivos están compuestos por otras molécu-
las que, en menor proporción, desempeñan funciones muy importantes. Tienen composición
química compleja y muy diversos uno del otro, sin embargo, poseen características físicas
y biológicas comunes. Los lípidos son mezclas de ésteres de ácidos grasos, denominados
glicéridos. Son un conjunto de moléculas orgánicas, la mayoría biomoléculas compuestas
principalmente por C e H y en menor proporción de O, también pueden contener P, S y N,
que tienen como característica principal el ser hidrofóbicas insolubles en agua. Cuando se
agitan fuertemente la muestra lipídica en agua, éstas se dividen en pequeñas gotas formando
una emulsión de aspecto lechoso, que es inestable o transitorio, ya que desaparece cuando
está en reposo por reagrupación de sus gotas de la grasa en una capa, que por su menor
densidad se sitúa por encima del agua. Por el contrario, los lípidos son solubles en sol-
ventes orgánicos o no polares (éter, metanol, benceno, etc.). Su solubilidad en alcoholes
dependerá del tamaño del lípido, su ramificación y presencia de grupos polares.
Los lípidos son constituyentes esenciales de la célula y cumplen funciones diversas en los
organismos vivientes, tanto en el ser humano como en los animales y vegetales, siendo estas
(i) de reserva energética (triglicéridos), (ii) estructural (fosfolípidos de las bicapas) y (iii)
reguladora (esteroides). Es decir, sus componentes estructurales de la membrana celular,
son reservas que las células metabolizan para producir energía, sirven como cubiertas pro-
tectoras de los órganos, y algunas veces aparecen como hormonas y vitaminas. Debido a

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su gran heterogeneidad química, los lípidos se pueden clasificar dependiendo de su poder de

saponificación de la siguiente manera [1]:

a. Lípidos saponificables: Son aquellos que al someterlos a una hidrolisis alcalina (saponifi-
cación) se convierten en jabones. Estos a su vez se subdividen en:

• Lípidos Simples – Fosfolípidos

– Glicéridos o acilgliceroles – Fosfoionositidos
∗ Aceites
– Glicolípidos
∗ Grasas
– Ceras – Sulfolípidos

• Lípidos Complejos – Lipoproteínas

b. Lípidos insaponificables: Como su nombre lo indica, son aquellos que no tienen capacidad
de formar jabones.

• Prostaglandinas y Leucotrienos – Ácidos biliares

• Derivados del isopreno – Hormonas esteroideas
– Terpenos
∗ Masculinas
– Carotenos
∗ Femeninas
– Vitaminas A, E, K
• Esteroles y derivados ∗ Corticosuprarrenales

– Colesterol – Vitamina D

En esta práctica de laboratorio, se van a realizar una serie de pruebas químicas cualitativas
para identificar los lípidos en diversas muestras de origen vegetal y animal. Siendo estas
pruebas las siguientes:

Prueba de solubilidad: Es una propiedad característica de los lípidos. Siendo insolubles en

agua (formando una emulsión) y solubles en solventes orgánicos no polares o poco polares.

Prueba de saponificación: Es para identificar ácidos grasos. Consiste en la reacción química

de lípidos (grasas) con el hidróxido de sodio o potasio en caliente, formando glicerina y
ácidos grasos. A su vez, estos se combinan con los iones de Na o K del hidróxido para dar
jabones, que sería las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos. Estos compuestos tienen
la particularidad de ser anfipáticos, es decir tiene una parte polar y otra apolar (no polar),
con la cual puede interactuar con sustancias de propiedades distintas.

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1.3 PARTE EXPERIMENTAL:

1.3.1 MATERIALES • 01 pro-pipeta

• 10 tubos de ensayo 150 x 15 mm • 01 gradilla para tubos de ensayo

• 02 vasos de precipitado 50, 150 • 01 plancha eléctrica.

• 01 vaso de precipitado 600 ml • 01 pinza para tubos

• 01 luna de reloj • 01 gotero

• 01 pipeta graduada de 10 ml • 01 bagueta

• 01 pipeta graduada 5 ml • 01 piceta

1.3.2 REACTIVOS 1.3.3 MUESTRAS

• Acetona , Ëter • Aceite vegetal

• Alcohol etílico
• Mantequilla
• Cloroformo
• Manteca vegetal
• NaOH 20%
• Manteca animal
• CaCl2 10%

• NaCl 10% • Glicerina

• HCl 1N • Yema de huevo

1.3.4 PROCEDIMIENTO
Solubilidad de los lípidos

• Preparar 6 tubos de ensayo limpios y secos en una gradilla.

• Colocar en cada uno de ellos 1.0 ml de agua destilada, alcohol etílico, acetona, éter,
cloroformo y tetracloruro de carbono.

• Adicionar a cada solvente 3 gotas de la muestra: (i) mantequilla o (ii) manteca o (iii)
aceite o (iv) glicerina o (v) yema de huevo u otro que desee analizar.

• Observar sin agitar por 3 minutos. Luego, agitar fuertemente el tubo (teniendo
cuidado). Anotar las observaciones y la solubilidad clasificando cada sustancia como
soluble (S), parcialmente soluble (PS) o insoluble (I) en la Tabla 1. Determinar cuáles

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son los mejores solventes para disolver las muestras. Relacionar la solubilidad con la
polaridad de cada solvente.

• Luego, calentar todos los tubos con la muestra a 60 ◦ C. Anotar la solubilidad en la

Tabla 1.

Saponificación de los lípidos

• Preparar 4 tubos de ensayo. Colocar en todos los tubos de ensayo 3 ml de aceite y 3

ml de NaOH al 20%.

• Agitar vigorosamente y colocar los tubos en Baño María a ebullición por espacio de 30
o 60 minutos. Si no se observa nada, seguir calentando.

• Luego, dejar enfriar y anotar las observaciones en la Tabla 2 (debe observar tres capas).
Explicar que se ha formado en cada capa.

• Enseguida, en la solución saponificada formada en los tubos, agregar solo en tres tubos,
1 ml CaCl2 10%, NaCl 10% y HCl 1N respectivamente.

• Anotar las observaciones en la Tabla 2. Explicar que ha sucedido.

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1.4 ANÁLISIS Y OBSERVACIONES

Table 1.1: Solubilidad de los lípidos

Muestra Reactivo Observación

Adicionar en cada tubo: 1,0 ml de (i) Indicar muestra:
agua destilada, (ii) acetona, (iii) alco-
hol, (iv) cloroformo y (v) éter. Obser- • Soluble
3 gotas de
var sin agitar por 3 min. Luego, agitar • Parcialmente Soluble
muestra
y anotar sus observaciones. Enseguida,
calentar los tubos a 60 ◦ C y anotar sus • Insoluble
observaciones.
PRUEBA DE SOLUBILIDAD
Alcohol
Muestra H2 Odest Acetona Cloroformo Éter
etílico

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Table 1.2: Saponificación de los lípidos

Muestra Reactivo Observación

3 ml NaOH al 20%. Agitar vigorosa-
Obser1: Solución de jabón
mente con cuidado! Poner en baño
formada (identificar en que
maría por 30min a 1h. Dejar enfriar.
3 ml de muestra capa se forma).
Enseguida, en 3 tubos adicionar 1ml de
Obser2: Que pasa con la
CaCl2 10%, NaCl 10% y HCl 1N res-
solución saponificada.
pectivamente. Observar que ocurre.
PRUEBA DE SAPONIFICACIÓN
Muestra Observaciones Observación 1

Tubo 1-4:
Aceite + NaOH
en caliente

Prueba saponificada de la prueba anterior

Muestra Observaciones Observación 2

Tubo 2 + CaCl2
10%

Tubo 3 + NaCl
10%

Tubo 4 + HCl
1N

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