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LABORATORIO DE GENÉTICA

PRÁCTICA No. 7

USO DE TRAMPAS PARA IDENTIFICAR GENES Y SUS


FUNCIONES EN PLANTAS
DOCENTE: Dra. GLORIA ANGÉLICA GONZÁLEZ HERNÁNDEZ

EQUIPO 6.

ALUMNOS:

MARINA HERNÁNDEZ BRENDA XIMENA

VILCHIS JASSO JAVIER ALEJANDRO

RUIZ ESTRADA CESAR ANTONIO

PERIODO: ENERO-JUNIO 2018

FECHA DE REALIZACION: 23/03/2018


FECHA DE ENTREGA: 25/04/2018
Practica# 13
Uso de trampas para identificar genes y sus funciones en plantas

Introducción
Las trampas génicas son una tecnología de mutagénesis insercional basada en el uso
de construcciones que se integran al azar en el genoma de un organismo etiquetando
genes con elementos reporteros. Sus ventajas con respecto a las técnicas clásicas de
mutagénesis son:
1) la identificación de genes se basa en la expresión de un gen reportero, la cual se
puede observar en tejidos y células específicas o en diferentes estados de desarrollo;
2) no se necesita un fenotipo mutante para la identificación del gen;
3) permite la identificación de genes que tienen funciones redundantes;
4) si la trampa génica interrumpe un gen, el patrón de expresión y el fenotipo observado
(si lo presenta) podrían sugerir la función de dicho gen.
La metodología de las trampas génicas no se considera exhaustiva ya que generar una
colección que incluya todos los genes de un organismo sería un proceso muy tardado y
costoso. Además, es posible que el etiquetado de algunos genes genere una mutación
deletérea o letal y no se pueda recuperar progenie de tal línea. Sin embargo, en algunos
estudios, esta metodología tiene probabilidades de detectar genes que pasan
desapercibidos con otros métodos; por ejemplo, las trampas génicas se usaron como
herramienta importante en la biología del desarrollo de plantas. Su contribución fue
importante en la generación de marcadores específicos de tejidos y células. Hasta ahora
hay poca investigación con esta herramienta acerca de los genes que responden a
patógenos y menos aún a geminivirus.
Los geminivirus son una familia de patógenos de plantas que causan grandes pérdidas
en cultivos importantes en. Los geminivirus, aunque no codifican para una ADN
polimerasa, pueden infectar y replicarse en el tejido diferenciado, donde la maquinaria
de replicación ya no está activa. Estos virus dependen de los factores celulares para
iniciar su ciclo infectivo y la expresión de algunos de los genes del hospedero se altera
de manera temporal o espacial.

Metodología:

• Tomar aproximadamente 100-120 semillas y colocarlas en un tubo eppendorff, agregar


200 ml de etanol absoluto mezclar y dejar sedimentar las semillas en el fondo del tubo
(dejar 3 minutos).
• Eliminar cuidadosamente el alcohol y repetir el lavado dos veces más. Eliminar la
mayor cantidad posible de etanol, utilizando papel absorbente y colocando el tubo boca
abajo teniendo cuidado de no tirar las semillas.
• Mantener el tubo abierto en la campana de flujo laminar hasta que todo el etanol se
haya evaporado.
• Esparcir las semillas homogéneamente en la placa de MS con kanamicina tratando de
que queden separadas.
• Cerrar las placas y cubrir con aluminio. Mantener 2 días a 4 ºC.
• Transferir a cámara de crecimiento 28 ºC con fotoperíodo luz- oscuridad 16- 8.
Mantener 5-6 días hasta que germinen y determinar el porcentaje de semillas sensibles
y resistentes.
Observaciones y resultados

520: Se presentan plantas


y semillas cloróticas, de
igual manera se vieron
las semillas que no
crecieron

350: A diferencia de la muestra


anterior existió un crecimiento
de gran tamaño en donde se
observaron una gran cantidad
de semillas sin crecimiento,
plantas y semillas cloróticas y
plantas sanas que germinaron.

540: este medio se contamino


debido a que las semillas
venían con esporas de hongos
impidiendo la observación de
los mismos.

Tabla 1. Cantidades totales del crecimiento de semillas de


Arabidopsia en medio con Kanamicina

Medio Semillas Semillas Semillas Total Total


sin crecer cloróticas sanas semillas
sin crecer
y
cloróticas
520 21 11 12 44 32
350 27 3 40 70 30
540 0 0 0 0 0

Cabe mencionar que el medio 540 se contamino y resulto imposible su visualización; en


base a los daros arrojados se puede confirmar resistencia al antibiótico kanamicina,
teniendo en el 520 un poco crecimiento de semillas sanas, mientras que en el 320 existió
un equilibrio pero también presentando resistencia de crecimiento.

Conclusión
Se determina que en el reino plantae existen mutaciones dando lugar a que se
modifiquen morfología, coloración, reforzando el tema de transposición la cual
claramente al estar en contacto con canamicina, se modificó obteniendo diferentes
coloraciones, morfologías y estructura en el DNA.

Cuestionario
¿Por qué son resistentes algunas de las plantas?
Porque presentan una mutación en su ADN, lo que les permite adquirir un nuevo
genotipo que les permite resistir a diferentes ambientes de crecimiento.

¿Qué proporciones de resistentes y sensibles encontraste entre las líneas


analizadas?
En el análisis de las plantas se encontró que la proporcionalidad de plantas resistentes
predominó sobre las sensibles, esto revelado por los resultados obtenidos en el conteo
y análisis.

¿Todas las líneas segregan en proporciones 3:1?


No

¿Alguna tiene distorsión de la segregación?, ¿A qué crees que se debe?


En la segregación si se encontraron distorsión.
Se cree que se debe a que el transposón que les da la resistencia al antibiótico no
estaba presente por lo que no había mutación dando como resultado la muerte de las
plantas al germinar en el medio con el antibiótico.

Bibliografía o referencias
https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=5387387
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-
31952015000600001

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