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TP 4: BIOENERGÉTICA Y CINÉTICA ENZIMÁTICA - EJERCITACIÓN ADICIONAL

1. a) Realice los gráficos correspondientes a nivel energético vs coordenada de


reacción para las reacciones:
i: L→M ii: Y→Z,
Para la confección de los mismos, tenga en cuenta que:
GºL = 4.8 Kcal/mol, GºM=2.1 Kcal/mol, GºY= 5.6 Kcal/mol, GºZ= 4.4 Kcal/mol
y que el estado activado para que se produzcan ambas reacciones se alcanza a una
energía de 7,0 Kcal/mol.
b) Calcule el ∆Gº y la Ea para ambas reacciones e indique ambos parámetros en el
gráfico.
c) ¿Que puede decir respcto a la espontaneidad de las reacciones en condiciones
estándar?
d) ¿Cuál de las reacciones ocurrirá a mayor velocidad?
e) Si se agrega un catalizador enzimático específico tanto para la reacción i como para
la ii, ¿Qué ocurrirá con el ∆Gº y con la Ea de cada reacción? Indíquelo en el gráfico.
f) Si se desea acoplar la reacción A→B cuyo ∆Gº= 2 Kcal/mol ¿cuál de las dos
reacciones anteriores sería la indicada para que tal reacción ocurra? Justifique.

2. La sacarosa puede ser clivada por dos mecanismos diferentes:

I. Sacarosa + H2O → glucosa + fructosa G ’ = - 7 kcal/mol


II. Sacarosa + Pi → glucosa -1-fosfato + fructosa

a) Estime el G’ de la reacción ii sabiendo que la reacción

glucosa -1-P + H2O → glucosa + Pi tiene un G’ = –5 Kcal/mol

b) Si el objetivo del clivaje fuera obtener fructosa, ¿Cuál de los dos procesos (i-
hidrólisis o ii-fosforólisis) es más ventajoso desde el punto de vista del ahorro
energético?
c) ¿Cuál de las dos reacciones cree Ud. que será más beneficiosa si fuera acoplada
a un proceso endergónico? ¿Necesita información adicional para tener el 100% de
certeza en su respuesta?

3. La Hidroxiacil-CoA deshidrogenasa es una enzima involucrada en uno de los


pasos de la β-oxidación, la oxidación del 3-hidroxiacil-coA a 3-cetoacil-coA.

Represente en forma general un gráfico de velocidad de reacción vs concentración


de L-3-Hidroxiacil-CoA, indicando Km y Vmáx:
¿Cómo se modificarán los parámetros mencionados anteriormente si
a) se aumenta la concentración de enzima?
b) si se agrega un inhibidor competitivo?

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c) si se agrega un inhibidor no competitivo específico de la enzima? Justifique y
represéntelo gráficamente

4. La proteína “E” es una enzima obtenida de lisosomas de riñón de mono. La misma


está constituida por una cadena polipeptídica de 120 aminoácidos a la cual se
encuentra unido un decasacárido lineal constituido por restos alternantes de D-.
glucosa y D- galactosa unidos entre sí a través de un enlace O-glicosídico (1→4).
a) i- Clasifique a la proteína E según:
- forma: ……………………………. - composición: ……………….…………….……
ii- Esquematice la unión de D-glucosa y D-galactosa tal como se encuentran en el
oligosacárido.
iii- Respecto a su estructura secundaria indique: principal interacción que la estabiliza
y grupos entre los que se establece dicha interacción.
iv- Al desnaturalizar completamente la proteína E la misma pierde la/s estructura/s
(PRIMARIA / SECUNDARIA / TERCIARIA / CUATERNARIA). (Tache lo que no
corresponda).
b) En los lisosomas, esta enzima (E) cataliza la reacción A+ → B siendo su pH y T
óptimos igual a 5 y 37°C, respectivamente. La concentración de E en los lisosomas es
4 mM y, en las condiciones óptimas, los parámetros cinéticos que la caracterizan en
estas organelas son: Km = 0,1 µM y Vmáx = 200 mM/min.
Partiendo de una solución 2 mM de la proteína E, procede a realizar distintos
experimentos:
i- Toma alícuotas de 1 ml, las coloca en cuatro tubos (P, X, Y y Z) y ajusta la
temperatura y el pH de cada uno de ellos a los valores indicados en la tabla. Luego
adiciona la cantidad necesaria de sustrato A+ para alcanzar en cada tubo la
concentración referida en la tabla. Finalmente registra la velocidad inicial de
producción de B (Vo).
En la última fila, señale los valores de Vo que espera encontrar en las distintas
condiciones (enciérrelos con un círculo).
Tubo P X Y Z
T °C 37°C 5°C 37°C 97°C
pH 5 5 7 7
[A+] 0,1µM SATURANTE SATURANTE SATURANTE
Vo
(mM B/min) 50 / 100 / 200 30 / 100 / 200 40 / 100 / 200 20 / 40 / 100
- +
ii- Incuba en presencia de (X / Y / Z), un inhibidor competitivo de E1, observando que
el Km de esta enzima será (MAYOR / IGUAL / MENOR) a 0,1 M y su Vmáx será
(IGUAL/ MENOR/ MAYOR) a 100 mM/min. (Tache lo que no corresponda)

5. En el citosol de la mayoría de las células de rata, Z- es sintetizado a partir de V+ a


través de una vía metabólica constituida por 4 reacciones secuenciales. Los valores
correspondientes a Ea y G° de las reacciones no catalizadas se indican en la tabla:

V+ W X Y Z-
Ea (kJ/mol) 3 2 1 10
a)G° que la reacción-15
(kJ/mol)
Sabiendo un G° = 45+0,01
Z- → V+ tiene---------- kJ/mol ¿Cuál -30
es el G°W → X?
b) ¿Qué puede decir respecto a la espontaneidad de la reacción W → X?
c) ¿Cuál de las reacciones condiciona la velocidad de producción de Z - en la vía sin
catalizar?
d) ¿Cuáles de estas reacciones son reversibles en condiciones celulares?

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e) ¿Cuál es el valor de Ea de la reacción Z- →Y?
f) Si la vía metabólica tiene lugar en condiciones estándar ¿qué sucederá con el
desorden del universo?
g) EH es la enzima que cataliza la primera reacción de esta vía (V + → W) en células
de hígado y los parámetros cinéticos que la caracterizan son: Km = 0,4 mM y Vmáx =
300 mM/min. En las siguientes afirmaciones, tache lo que no corresponda:
i- La reacción V+ → W catalizada por EH posee un G° de (-17 / -13 / -15 / 15) kJ/mol
y una Ea de (1 / 3 / 5) kJ/mol.
ii- (Asp / His / Val / Ser / Cys / Lys / Glu) son dos aminoácidos que esperaría encontrar
en la región del sitio activo de EH.
iii- La isoenzima renal (ER), que es menos efectiva que EH en la catálisis tanto a bajas
como a altas [V+], posee un Km (MAYOR / IGUAL / MENOR) y una Vmáx (MAYOR /
IGUAL / MENOR) que EH.
iv- EH es una proteína (GLOBULAR/ FIBROSA) donde encontramos (UN ÚNICO
TIPO / DIVERSOS TIPOS) de estructura secundaria que puede estar estabilizada por
(ENLACES PEPTÍDICOS / FUERZAS DE VAN DER WAALS / PUENTES DE
HIDRÓGENO / PUENTES DISULFURO / INTERACCIONES HIDROFÓBICAS).
h) El producto final de la vía (Z-) puede unirse a EH en un sitio distinto del sitio activo
disminuyendo la afinidad de esta enzima por su sustrato sin inactivarla. Indique:
- Nombre específico de la regulación ejercida por Z-: ………………………………
- ¿Qué valores de Km y Vmáx sería posible encontrar para EH en condiciones en las
cuales se acumula Z-? Rta: Km = (0,6 / 0,4 / 0,2) mM y Vmáx (250 / 300 / 350) mM/min.
(Tache lo que no corresponda).

6. La enzima E es una proteína plasmática constituida por una cadena polipeptídica


alfa de 120 aminoácidos y otra beta de 130 aminoácidos a la cual se encuentra unido
un oligosacárido ramificado constituido por 5 restos de D-glucosa unidas entre sí a
través de enlaces O-glicosídicos (1→2) presentando en las ramificaciones el mismo
tipo de enlace encontrado en las ramificaciones del glucógeno.
a) i- Clasifique a la proteína E según su forma y composición.
ii- Esquematice la/s unión/es encontrada/s en el oligosacárido.
b) En el torrente sanguíneo E cataliza la reacción A →B cuyos valores de G y de
estado activado para la transformación sin catalizar son: G A →B = -3 Kcal/mol;
Estado activado (A#)= 9 Kcal/mol.
Sabiendo que GB = 1 Kcal/mol y que el estado activado del complejo Enzima-Sustrato
(ER#) es de 5 Kcal/mol. Construya el gráfico de G versus coordenada de reacción y
señale en el mismo GA y Ea A →B e indique con línea de puntos cómo se modificará el
gráfico por la presencia de la enzima E.
c) En el plasma humano la [E] = 1mM y, cuando las condiciones son óptimas (pH: 7 y
37°C), los parámetros cinéticos que caracterizan a esta enzima son: Km = 5 µM y
Vmáx = 200 mM/min.
i- En las condiciones óptimas ¿Cuál será la velocidad de producción de B cuando: [A]
sea de 5 µM y la [E] sea 3mM?
ii- A 5°C, la Vmáx será (MENOR / IGUAL) que 200 mM/min porque al disminuir la
temperatura (LA ENZIMA SE DESNATURALIZA / NO SE DESNATURALIZA /
DISMINUYE LA ENERGÍA CINÉTICA DE LOS REACTIVOS / LA ENERGÍA DE
ACTIVACIÓN NO CAMBIA). (Tache lo que no corresponda).
iii- ¿Cuál de los siguientes valores corresponde al valor del Km de esta enzima en
presencia de un inhibidor competitivo? Rta: (0,1 µM / 5 µM / 0,1 mM) (Tache lo que no
corresponda).

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7. En la figura de la derecha, hemos esquematizado una vía -
metabólica ramificada presente en citosol de hepatocitos de rata. A A
E1
través de esta vía, se generan dos productos finales diferentes: C y
D. Las enzimas E1, E2 y E3 son las encargadas de catalizar las B
E2 E3
reacciones de esta ruta como muestra el esquema.
C D
a) Sabiendo que:
- En condiciones basales E1 posee un Km = 0,01mM y una Vmáx =
200 mM/min
- La energía de activación (Ea) correspondiente a la reacción A -→B no catalizada es
3 Kcal/mol.
- E2 tiene mayor afinidad por B que E3 y la Vmáx de E3 es el doble de la alcanzada
con E2
- G°A-= 5 Kcal/mol; G°B = 6 Kcal/mol; G°C = 1 Kcal/mol; G°D = 2 Kcal/mol
- GA-= 7Kcal/mol; GB= 5Kcal/mol; GC= 2Kcal/mol; GD= 4Kcal/mol
i- Cuando se duplique la concentración de E1 en respuesta a estímulos externos los
valores de sus parámetros cinéticos serán: Km = (0,005 / 0,01 / 0,02) mM y Vmáx =
(100 / 200 / 400) mM/min. (Tache lo que no corresponda)
ii- En presencia de (X- / Y+ / Z), un inhibidor competitivo de E1, el Km de esta enzima
será (MAYOR / IGUAL / MENOR) a 0,01 mM y su Vmáx será (MAYOR / IGUAL /
MENOR) a 200 mM/min. (Tache lo que no corresponda)
iii- A bajas concentraciones de B, el producto final que se generará a mayor velocidad
será (C / D) y cuando las concentraciones de B sean altas será (C / D). (Tache lo que
no corresponda)
iv- La Keq para la reacción B → D es (MAYOR / IGUAL / MENOR) a 1. (Tache lo que
no corresponda)
v- En los hepatocitos de rata: la reacción A- → B es (ESPONTÁNEA / NO
ESPONTÁNEA) y la energía de activación de la reacción catalizada es (MAYOR /
IGUAL / MENOR) a 3 Kcal/mol (Tache lo que no corresponda)
vi En los hepatocitos de rata, la velocidad de la reacción B→A- será es (MAYOR /
IGUAL / MENOR) que la de A- → B dado que la Ea de B→A- será (MAYOR / IGUAL /
MENOR) a la Ea de A- → B. (Tache lo que no corresponda)
vii- Para la reacción global A-→C el ΔGA-→C es igual a ( -4 / -5 / +4 / +5 ) Kcal/mol.
(Tache lo que no corresponda)
b) La enzima E1 es una proteína (GLOBULAR / FIBROSA) que posee una única
cadena polipeptídica. Su estructura primaria se halla estabilizada por (ENLACES
PEPTÍDICOS / FUERZAS DE VAN DER WAALS / PUENTES DE HIDRÓGENO /
PUENTES DISULFURO / INTERACCIONES HIDROFÓBICAS), las 2 principales
fuerzas que estabilizan a su estructura secundaria son (ENLACES PEPTÍDICOS /
FUERZAS DE VAN DER WAALS / PUENTES DE HIDRÓGENO / PUENTES
DISULFURO / INTERACCIONES HIDROFÓBICAS) mientras que la estructura
terciaria puede estar estabilizada por (ENLACES PEPTÍDICOS / FUERZAS DE VAN
DER WAALS / PUENTES DE HIDRÓGENO / PUENTES DISULFURO /
INTERACCIONES HIDROFÓBICAS). (Tache lo que no corresponda)

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