CENTRO DE CIENCIAS BASICAS

PRACTICA No. 7

“PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE

ENTEROBACTERIAS”

LICENCIATURA EN BIOTECNOLOGÍA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

5° SEMESTRE

INTEGRANTES:

JOSÉ EMMANUEL CHÁVEZ ANDRADE

FRANCISC EDUARDO MOSQUEDA ESPARZA

HÉCTOR EMANUEL VELARDE FEMAT

EFRAIN DE JESÚS SUÁREZ MERCADO

03/12/2019
 Resultados:

Ilustración 1: resultados del Ilustración 2: resultados del Ilustración 3: resultados del

medio TSI negativo medio citrato de carbono medio LIA negativo
positivo

Ilustración 4: resultados del Ilustración 5: resultados del

medio MIO negativo medio urea negativo
Ilustración 6: Resultados Ilustración 7: resultados Ilustración 8: resultados negativo
positivos del medio Urea positivos del medio MIO (verde) y positivo(azul) del medio
de citrato

Ilustración 9: Resultados Ilustración 10:

del medio TSI positivo (izq) Resultados positivos del
medio LIA
 Discusión:

Se hizo uso de la bacteria salmonela ssp. para la inoculación la cual duró 24 horas
a 37 grados en la incubadora.

En el medio MIO (Movilidad- Indol- Ornitina), ilustración 5, es un medio de cultivo

ampliamente utilizado para la diferenciación de bacilos Gram negativos entericos,
sobre la base de la producción de Indol, la actividad de la enzima Ornitina
decarboxilasa y la capacidad demotilidad (Médica, 2016). La prueba de indol y
ornitina dieron en negativo puesto que en la parte superior del medio debería haber
un anillo color magenta que era el positivo para indol asimismo para el interior del
tubo debería tener una coloración similar. Sin embargo, en ambos se mantuvo en
un tono amarillento, mientras que para la movilidad a pesar de que fue casi
imperceptible se pudo apreciar ligeramente en un costado.

Para el medio LIA ((Lisina – Hierro – Agar), ilustración 3, tanto en la prueba de

descaboxilación de lisina como en la desaminación y la producción de SH 2 se
obtuvieron resultados negativos. Según la información de laboratorios Britania la
interpretación para la descaboxilación de lisina se debió observar pico y fondo
violeta del medio, lo que significa que tiene una superficie y profundidad alcalina, la
desaminación tendría una coloración rojita producto de una profundidad ácida sin
embargo esto suele suceder con cepas del género Proteus y con algunas de
morganella ssp. mientras que para la producción de SH2 se debería apreciar el
ennegrecimiento del medio, especialmente entre la superficie y la profundidad
(BRITANIA, 2012).No se apreció nada de ello por lo que la prueba en este medio
fue completamente negativa, según las observaciones se cree que la inoculación
pudo haber sido el problema, la aguja de inoculación podría haber estado
demasiado caliente lo cual mató las bacterias evitando que se dieran resultados en
el medio.

En el medio TSI (Agar Triple Azúcar y Hierro), ilustración 1, es útil para para la
diferenciación de bacterias gram negativas mediante la utilización de citrato.
Tomando en cuenta la teoría según la empresa BD, el agar triple azúcar hierro
contiene tres carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa) los cuales se fermentan y
la producción resultante de ácido es detectada por el indicador rojo fenol. Para la
mayoría de las cepas de Salmonella producen colonias rosas con un centro negro
en este medio, mientras que las colonias de otros organismos son de color rojo o
amarillo y no muestran centros negros. (Health, 2014) En las observaciones solo
hay una coloración de tono negro en casi todo el medio, sin embargo, no representa
ninguna de las pruebas que deberían registrarse los cuales eran observar un pico
rojo u amarillo. Igualmente podemos deducir que la responsable de esto fue una
inoculación mal realizada.

En el siguiente medio, de Citrato de carbono, ilustración 2, también conocido como

medio de citrato de Simmons es utilizado para para la diferenciación de bacterias
gram negativas mediante la utilización de citrato. El metabolismo del citrato se realiza
en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa a través del ciclo del ácido
tricarboxilico que genera piruvato y oxalacetato, de manera que el medio vira a un
tono azulado cuando se registra una prueba positiva por el crecimiento bacteriano,
mientras que en ausencia de este se mantendría en una tonalidad verduzca oscuro
que era el tono original del medio. (Gil, 2017). En los resultados se pudo apreciar la
coloración azul en todo el medio lo que se traduce en una reacción positiva de
crecimiento de la inoculación de bacterias de Salmonela

Por ultimo en el medio de cultivo de urea, conocido como Christensen medio, es un

medio diferencial, no selectivo, en especial para las Enterobacterias según su
capacidad para producir Ureasa. El medio tiene como indicador de la producción de
acidez o alcalinidad el Rojo Fenol. Los microorganismos que poseen actividad
ureasa, actúan sobre la urea presente en el medio, formando Amoniaco y Dióxido de
Carbono, el Amoniaco alcaliniza el medio y el indicador hace que el medio vire de
anaranjado-amarillo a rosa fuerte. Mientras que si se mantiene del mismo tono
amarillo da como resultado una reacción en negativo. Según las observaciones
podemos constatar que no hubo una hidrolización adecuada pues no se registró
ningún cambio de color en el medio.
Según la tabla de resultados proporcionada para las enterobacterias de salmonella
todos los isotipos de esta tienen un rango de positividad en las pruebas que rayan
entre el 95-100%, con ciertas diferencias donde el porcentaje es de un 70%. Hay
algunas excepción en la prueba de H2S en el isotipo de s. choleraesuis y la de CIT
pues solo tienen un rango de positivo de 25 a 50%. Igualmente, en la prueba de
ARG tanto en el isotipo s. typhi y s. paratyphi solo llega a un 3 y 15%
respectivamente. En la prueba de UREA no se registró un buen resultado pues
solo en el isotipo s. entérica hubo 1% de positividad mientras que en el resto no se
obtuvo resultado alguno.

Conclusión:

Se logró identificar los resultados del microorganismo problema por medio de

tablas previamente proporcionadas utilizando medios de cultivo para la
identificación de enterobacterias, sin embargo, las pruebas no salieron como
deberían. Los resultados probablemente fueron afectados desde la inoculación, la
cual al parecer el pico o el haza fueron calentados demasiado que impidieron la
recolección de bacterias y por consecuencia no se inoculó nada. No se registró
ningún problema de contaminación o fuga por lo que esta problemática parece ser
la causante de resultados negativos. Sin embargo, se logró observar tanto en
investigación como en los resultados de equipos para comparar como debían ser
los resultados obtenidos y de ahí conocer la fundamentación de cada prueba en
los diferentes medios

Bibliografìia: