L ecci ó P lan: iffusion D• 

Fondo  
  Las partículas en células muestran de nuevo rápida y el movimiento hacia atrás, o•  browniano   movimiento,•  que también se conoce como•  difusión. • El movimiento de ida y vuelta

consiste en pasos al azar de una posición de partida, parecido a un paseo aleatorio. La difusión es más rápido a temperaturas más altas y para las partículas más pequeñas. Las

partículas muestran movimiento difusional no sólo en las células, sino también en agua y otros líquidos. Este plan de lección demuestra difusión en geles, que son redes de CROSS -

moléculas ligado en agua o en otros líquidos. Difusión en geles, así como en líquidos viscosos, es más lento que en agua. El citoplasma de las células es muy espesa y viscosa - que

fluye muy lentamente. La alta viscosidad del citoplasma provoca que las partículas en las células a difunden más lentamente que las partículas que se difunden en agua.• • 

  Este laboratorio muestra que la difusión de las moléculas se produce en geles. También muestra que las moléculas se difunden más rápidamente a mayor temperatura y

moléculas pequeñas se difunden más rápidamente que las grandes. Midiendo y trazando la distancia de difusión a través del tiempo, los estudiantes avanzados serán capaces

de demostrar que existe una relación lineal entre la distancia de difusión al cuadrado y tiempo de difusión.• • •  Objetivos y Grado• 

  Demostrar difusión en 2D y los efectos de la temperatura, el peso molecular ( MW), • y la distancia de difusión en tiempo de difusión. Apropiadas para el comienzo de las clases

avanzadas de ciencias de la escuela secundaria; véanse las notas para los estudiantes avanzados.• • •  materiales• 

• Agarosa o gelatina• • 
Jello (limón - con sabor para el color de la luz de fondo) también se puede utilizar• 

• Opcional: Azúcar• • 
La sacarosa es el mismo que el azúcar y se puede utilizar en lugar de azúcar• 

• El permanganato de potasio o azul de metileno  Colorante  

Colorantes de los alimentos se pueden utilizar en lugar, por ejemplo, FD & C Blue 2 / Indigo Blue (263 MW); otros colorantes de alimentos son más altos MW o mezclas de dos colorantes,

por ejemplo, McCormick Color Verde comida es una mezcla de FD & C Blue 1 (793 MW) y FD & C Yellow 5 (534 MW) - si se utiliza este colorante en un experimento de difusión, lo que

debería mostrar un halo de color amarillo alrededor de un punto de colorante verde con un color azul - centro verde• • 

• placas de Petri con tapas• 

Otros recipientes planos pequeños se pueden utilizar en lugar, por ejemplo, tapas, platos o cuencos poco profundos• 

• Pipetman con puntas o pipeta Pasteur• 

palillos de madera redondos se pueden utilizar en lugar de hacer un agujero en el gel y añadir el colorante al gel• • 
• Minutero• • 

• Guantes desechables, compresas gafas, guantes calientes /• • 

• • 

   

 
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• • • 

Preparación de Materiales• 
  1. Soluciones hacer de los colorantes en agua:• • •  Permanganato de potasio • (0,16•  sol • en 10•  ml • = 100•  mM)  

 Azul de metileno • (0,32•  sol • en 10•  ml • = 100•  mM)  

  Precaución: Use guantes desechables y gafas de desgaste cuando el pesado de polvos colorantes. • La concentración debe ser ~ 100 mM; la concentración exacta no es

crítica. Las soluciones pueden ser hechas, bien cerradas, y se mantuvieron a temperatura ambiente durante varios meses o más. colorantes alimentarios se pueden utilizar de la

botella.• 
  2. Añadir suficiente de agarosa o gelatina para un frasco o vaso de precipitados para formar una solución final de 1% de agarosa o 3% de gelatina en agua (1•  sol • en 100•  ml • = 1%).• • 

  Tendrá ~ 30 ml de solución para una placa de Petri estándar 100 x 15 mm o ~ 12 ml para una placa de Petri de 60 x 15 mm. El volumen se puede aumentar por lo

que es suficiente para verter 4--8 o más placas. • • 

 

3. Calentar cuidadosamente la mitad del agua en un horno de microondas o en una placa caliente hasta que esté caliente y casi hirviendo; añadir a la agarosa o gelatina en el matraz o vaso de

precipitados y se agita hasta que se disuelva.• • 

  PRECAUCIÓN: el uso derrames caliente almohadillas / manoplas, use gafas, y evitar!   Calentar el agua tomará 30--40 segundos en alta en un horno de microondas o unos pocos

minutos en una placa caliente; calentar hasta casi hirviendo.• • 

 

4. Añadir el resto del agua, que debe ser frío, y revolver o agitar para mezclar. Deja enfriar la disolución unos pocos minutos más, luego verter las placas a una
profundidad de ~ 0,8•  cm. • Ponga las tapas en las placas y dejar reposar a temperatura ambiente (de agarosa placas) o en un refrigerador (placas de gelatina) sin
moverse hasta que cuaje. Las placas de agarosa estará listo para usar en ~ 10 minutos y las placas de gelatina estarán listos en ~ 20--30 minutos.• 

Las placas se pueden hacer, bien envueltos, y se almacenaron en una bolsa de plástico en la noche a la mañana refrigerador, o más largo (hasta 4--6 semanas). Para Jello, siga las
instrucciones en el paquete y usar los volúmenes anteriores para cada placa de Petri. Tenga en cuenta que una taza (US) es ~ 237 ml; un paquete de gelatina hará ~ 16-17 estándar
- placas de tamaño. Para ~ 8 placas, disolver la mitad de un paquete (42,5 g) de Jello en medio una taza (118,5 ml) de, agua casi hirviendo caliente, agitar hasta disolver, a
continuación, añadir la mitad de una taza de agua fría, remolino para mezclar, y se vierte la platos.   Colocar las placas en un refrigerador durante 1--2 horas o más tiempo para ajustar.  
Para placas Jello más firmes, reducir el agua por medio, es decir, disolver un paquete de Jello en una taza de agua casi hirviendo, mezclar bien y verter las placas. Deje reposar ~
20--30 minutos en un refrigerador.   Llamamos a estas placas 2x Jello.• 

• •  Procedimiento• 

  1. Difusión de partículas o moléculas es debido al calor, o energía térmica, que excita las partículas o moléculas, haciendo que se muevan. Cuando se mueven,

chocan con otras partículas o moléculas - esto da como resultado de nuevo al azar y el movimiento hacia atrás. Podemos observar movimiento difusional el uso de

tintes - si añadimos una gota de tinte a una agarosa o placa de gelatina en una posición dada, se extenderá lentamente porque las moléculas de colorante se

mueven al azar de su posición de partida en el gel. Se puede ver este movimiento si lo hace lo siguiente:• 

  Tome una placa de Petri de agarosa (o gelatina o gelatina) que se ha sentado a temperatura ambiente durante 5--10 minutos. El uso de un cut-- off punta de pipeta o una pipeta

Pasteur de vidrio, hacer un pequeño agujero en la agarosa para cada tinte ( Figura 1). • También puede utilizar un palillo de madera redonda para hacer un agujero, pero el agujero

será más pequeño. La posición del orificio en la placa no es importante, pero debe ser lo suficientemente lejos del borde de la placa de modo de difusión de la mancha se puede

observar fácilmente.• 

 
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• • • 

Pipetear cuidadosamente una pequeña gota (2--10•  μ l) • de colorante solución en el orificio usando una pipeta Pipetman o Pasteur. Trate de no sobrecargar el agujero o usted será
observar el flujo del colorante sobre la superficie del gel, en lugar de difusión del colorante en el gel. También puede añadir el colorante al agujero empapando un palillo de madera
redonda en tinte durante unos minutos, a continuación, insertar el palillo de dientes en un agujero hecho con otro palillo de dientes. Asegúrese de que el colorante ha transferido en
el gel antes de retirar el palillo de dientes.• • 

  Luego cubra la placa de Petri y medir el diámetro de la mancha de colorante en diferentes momentos después de añadir el colorante, por ejemplo, 0, 5, 10,• 

30, 60, 150 minutos ( Las figuras 2 y 3). • El aumento en el tamaño de la mancha de colorante será fácil de ver incluso después de 5 o 10 minutos. Después de medir el diámetro de la

mancha de colorante, se divide por dos para encontrar el radio - el radio de la mancha de colorante en cada momento es la distancia las moléculas de colorante han difundido desde su

posición de partida. Mida justo hasta el borde de la mancha de colorante oscuro que contiene la mayoría de las moléculas de colorante.• 

  Las fotografías se toman en cada punto de tiempo utilizando un teléfono celular. Mediante la inclusión de una regla en la foto, se puede determinar con precisión la distancia de

difusión de las fotos - esto se hace mediante la medición del diámetro de la mancha de colorante en cada foto y dividiendo por la longitud de uno•  cm • de la regla en la foto para

obtener el diámetro real de la mancha de colorante; luego dividir el diámetro real por dos para encontrar el radio de la mancha de colorante en cada punto de tiempo.• 

  Son los tiempos necesarios para el permanganato de potasio y azul de metileno para difundir una distancia dada, por ejemplo, 0,5 cm, en agarosa (o gelatina o Jello) el

mismo o diferente para los dos colorantes? Si los tiempos son diferentes, los cuales tinte se difunde más rápido? Es el peso molecular del tinte más rápido mayor o menor

que el peso molecular del colorante más lento?• 

 2. Calentar una placa de Petri de agarosa (o gelatina o 2x Jello) colocándolo en una incubadora a 37 ° C • o sosteniéndolo entre sus manos durante 3--4 minutos y repetir el

experimento de difusión de colorante. Mantenga el plato de petri caliente entre los puntos de tiempo, colocándolo en una incubadora o sosteniéndolo en sus manos, manteniéndolo

en posición horizontal.• 
  Son los tiempos de difusión de los tintes de la misma o diferente en la cálida agarosa (o gelatina o 2x Jello) en comparación con la temperatura ambiente? Si los tiempos de

difusión son diferentes, son más rápido o más lento que a temperatura ambiente? Tenga en cuenta que se recomiendan placas 2x Jello para este experimento, debido a que son

más firmes que las placas normales Jello.• 

• 3. Enfriar una placa de Petri de agarosa (o gelatina o Jello) colocándolo en un refrigerador o en hielo y repetir el experimento difusión de colorante. Mantener el frío placa

de Petri entre los puntos de tiempo y asegúrese de que quede horizontal.• 

  Son los tiempos de difusión de los tintes de la misma o diferente en el frío de agarosa (o gelatina o Jello) en comparación con la temperatura ambiente? Si los tiempos

de difusión son diferentes, son más rápido o más lento que a temperatura ambiente?• 
• 4. experimento Opcional: make 1% de agarosa (o 3% de gelatina) placas que contienen% de azúcar 20 mediante la adición de 100•  ml • de caliente, casi hirviendo agua para 1•  sol • de

agarosa (o 3•  sol • de gelatina) + 20•  sol • azúcar en un frasco o vaso de precipitados, agitar hasta disolver, y luego verter las placas, como la hora de hacer placas sin azúcar. Repite el

experimento difusión de tinte a temperatura ambiente usando estas placas.• • 

  Son los tiempos de difusión de los tintes de la misma o diferente en agarosa (o gelatina) con 20% de azúcar como sin azúcar? Si los tiempos de difusión son

diferentes, son más o menos rápido en el gel que contiene azúcar?• 

• • • 

 
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• • • 

notas  
  1. movimiento por difusión de moléculas individuales o partículas consiste en los pasos de ida y vuelta al azar. Con el fin de obtener información sobre el movimiento de difusión

de una molécula dada, necesitamos medir y promediar los movimientos de muchas moléculas en el tiempo. En estos experimentos, cada punto de colorante se compone de

muchos millones de moléculas de colorante. Midiendo el aumento de tamaño de la mancha de colorante con el tiempo en estos experimentos, se puede obtener información

sobre el movimiento de difusión media de millones de moléculas a través del tiempo (véase Rob Phillips Group, 2005). El aumento de tamaño (o difusión) de la mancha de

colorante en el gel es causado por el movimiento difusional media de las moléculas de colorante, desde su posición de partida en el gel.• 

  Nota que las moléculas o partículas también se difunden en agua y otros líquidos, pero la difusión solo, sin los efectos de las corrientes de convección y de la gravedad, es muy

difícil de demostrar en líquidos (ver Elster, 2014). Esto se debe a corrientes de convección, que son movimientos de un líquido dentro de otro líquido, son creados por la simple

adición de una solución de colorante al líquido. Además de la formación de corrientes de convección, la mayor densidad de la solución de colorante en comparación con agua y

otros líquidos hace que poco a poco (o rápidamente) fregadero cuando se añade a estos líquidos. Estos movimientos del colorante en el líquido no son causados ​por la difusión.

Debido a que estos movimientos y sus efectos son grandes en comparación con el movimiento de difusión del colorante, es difícil medir el movimiento debido solamente a la

difusión mediante la adición de una solución de colorante a un líquido. En este plan de lección, utilizamos agarosa, placas de gelatina o gelatina porque las corrientes previene gel

de convección; también medimos difusión 2D del colorante en el gel para evitar los efectos de los movimientos debido a la gravedad.    

 2. La difusión es más rápido para moléculas pequeñas, por ejemplo, permanganato de potasio, que los más grandes, tales como azul de metileno ( Figura 4).  La tabla

da el peso molecular ( MW) • y las fórmulas moleculares para los dos colorantes:• 
 

  • • • • • •  MW     • • • • • • Fórmula• • 

Permanganato de potasio• •    158•  g / mol     KMnO 4 • •   

Azul de metileno•  320•  g / mol • • • •    do dieciséis H 18 Cl norte 3 S  

 

• 3. tiempos de difusión dependen de la temperatura - que son más rápidos en agarosa caliente (o gelatina o gelatina) que las placas a temperatura ambiente, y más

lento en placas frías.• 

• 4. Los geles son redes de CROSS - moléculas ligado en agua u otros líquidos - agarosa consiste en moléculas de azúcar largos y gelatina consiste en una proteína llamada

colágeno (ver Plan de la lección en la construcción de un modelo molecular de Jello). Adición de azúcar para el gel aumenta su viscosidad. tiempos de difusión son más lentos en

un gel viscoso que contiene% de azúcar 20, que en un gel sin azúcar. Jello contiene 1,6% de azúcar de gelatina y 15% - colorantes se difundirán más lentamente en placas de

Jello que en placas de gelatina 1,6% sin azúcar. tiempos de difusión son también más lento en líquidos viscosos, así como geles viscosos, en comparación con el agua. El

citoplasma de las células es muy viscoso - la viscosidad del citoplasma se piensa que es similar a glicerol o melaza. Las partículas grandes en el citoplasma, tales como

ribosomas o mitocondrias, requieren tiempos muy largos para difundir largas distancias (véase Howard, 2001 Ejemplo 4.3). 5.•  tema avanzado 1: • tiempos de difusión aumentan

con la distancia como la distancia al cuadrado. Esto significa que las partículas se difunden rápidamente distancias cortas, largas distancias, pero requieren mucho más tiempo. El

tiempo necesario para difundir una determinada distancia es la distancia al cuadrado - esto significa que si se tarda 2 horas se difunda 1•  cm, • a difusa doble de la distancia

requerirá 2•  hora • • x (2• 

cm) • cuadrado = 8•  hora, • o 4 veces el tiempo que se tardó en difundirse a 1•  cm • (Véase Howard, 2001).• 
 

 
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• • • 

La difusión en dos dimensiones, por ejemplo, dentro de la membrana celular, está dada por•  X 2 = 4DT, • • dónde•  X • es el desplazamiento en•  cm,   re • es el coeficiente de

difusión en•  cm 2 / s, • y•  t • es el tiempo en segundos (Berg, 1983). La relación entre la distancia de difusión y el tiempo se puede demostrar midiendo la distancia difundida por

las moléculas de colorante en el punto de colorante, o el radio de la mancha en cada punto de tiempo, elevar al cuadrado del radio, y el trazado de la radio - cuadrado frente al

tiempo de difusión•  ( Figura 5) . • Los puntos pueden estar en forma para una línea de•  - • esto demuestra que el tiempo de difusión está relacionada linealmente con la distancia

de difusión, o el radio, al cuadrado. La pendiente de la línea es igual a•  4D. • Dividiendo por 4 dará el valor para•  RE, • el coeficiente de difusión, para el colorante en 1% de

agarosa, 3% de gelatina o gelatina (como se muestra). 6.•  tema avanzado 2: • el coeficiente de difusión•  re • es una propiedad de moléculas o partículas en solución. Se puede

determinar por el Stokes - ecuación de Einstein,•  D = kT / 6 π R S η, dónde•  k  es la constante de Boltzmann, 1.381 x 10-- 23   J / K,   T • es la temperatura absoluta en•  K,   R S   es el

radio de Stokes (o radio hidrodinámico) de la molécula o partícula, y•  η es la viscosidad del líquido. Si se conocen radio de una molécula o partícula y la viscosidad del líquido

de Stokes,•  re  puede ser calculado a partir de la Stokes - Einstein ecuación.  

• • • 

 
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• • • 

Figuras• 
  Figura 1 • •  Hacer un agujero en la agarosa  

Izquierda, • utilizando un cut - off punta de pipeta (como se muestra) o

una pipeta Pasteur, hacer un pequeño agujero en la agarosa para el

colorante. Un palillo de madera redonda se puede utilizar para hacer

esto en su lugar. El agujero debe estar colocado lo suficientemente

lejos del borde de la placa de modo se puede observar fácilmente la

difusión de la mancha de colorante.• • 

  Correcto, • La flecha señala el agujero en la agarosa.• 

• • Figura 2 Difusión de azul de metileno en agarosa• • 

  • • • • • • • • • •  • • • • colorante azul de metileno se añadió al agujero en el gel de agarosa al 1%. Las fotos fueron tomadas aproximadamente el 5, 30 y 60 minutos después. El aumento

5 minutos• • • •      • • • 30 minutos•    • • • • • • • • • • • • • • •  • • • • •  60 min• • • • • • • • • • • • • 

en el tamaño de la mancha de colorante azul es causado por la difusión del colorante en la agarosa.• 

 
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• • • 

Figura 3 Difusión de azul de metileno en Jello  

 

• •  • • • • • • • • • • • • • • 

0 min• • •    • • • • • • • • • • • • • • • • 60 min•     • • • • • • • • • • 150 min•    • • 

Un pequeño agujero se realizó en una placa de Jello usando una pipeta Pasteur de vidrio (flecha), como se muestra en•  Figura 1. • colorante azul de metileno se añadió al agujero y las

fotos fueron tomadas 0, 60 y 150 minutos más tarde. Como los difunde colorante azul en el Jello, la mancha de colorante aumenta de tamaño.• 

• • 

Figura 4 Difusión de dos colorantes en agarosa• 

  

      • • • • • • • • • 
Permanganato de potasio (izquierda, naranja) y azul de metileno (derecha, azul) después de la

difusión durante 60 minutos en 1% de agarosa. El permanganato de potasio es de aproximadamente

El potasio permanganato de la mitad del peso molecular de azul de metileno y se difunde más rápidamente que el azul de metileno,
metileno azul•  dando como resultado un radio ligeramente mayor para el punto de colorante permanganato de

potasio que para azul de metileno.• • 

  Tenga en cuenta que el permanganato de potasio forma agregados en la mancha de tinte y la

difusión se hace gradualmente más lento que el azul de metileno; ~ después de 3--4 horas, la gota

colorante azul de metileno será mayor que el punto de tinte permanganato de potasio.• 

60 min• 

• • 

 
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• • • 

Figura 5 Parcela de   Distancia de difusión vs Tiempo de azul de metileno en Jello• 

difusión azul de metileno en Jello (ver imágenes en• 

Figura 3). • La distancia de difusión, que es igual al radio de la mancha de
colorante, se midió en diferentes momentos, al cuadrado, y se traza contra el
tiempo después de convertir el tiempo de minutos a segundos. Los puntos
forman una línea, mostrando que la distancia de difusión (o radio) al
cuadrado aumenta linealmente con el tiempo. Dado• 

X 2 = 4DT • para la difusión 2D, la pendiente de la línea de ajuste a los puntos es•  4D. • Después

de dividir la pendiente por 4, el valor de•  re  para la difusión de azul de metileno en Jello

se encontró que era ~ 4,55 x 10-- 6   cm 2 / s • o ~ 455•  μ metro 2 / s • en este experimento.

Tenga en cuenta que las inexactitudes en la medición del tamaño de la mancha de

colorante, así como las diferencias en placas de gel y la temperatura ambiente pueden

causar que su valor para•  re • a diferir de las nuestras.• 

 
• • 

• • 

   

 
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• • • 

referencias• 
  Berg, HC 1983•  Random Walks en Biología. • Princeton University Press• •  Elster, AD 2014 Preguntas y Respuestas en la RM:

Difusión. http://mri-q.com/what-is-diffusion.html

Howard, J 2001 Mecánica de las proteínas motoras y el citoesqueleto. Sinauer Associates, Inc. Rob Phillips Solution Group

2005 para la difusión 2D Ecuación

http://www.rpgroup.caltech.edu/courses/aph162/2006/Protocols/diffusion.pdf  
• • • 

autores• 
Un sharyn Endow
Adam P Russell• 
• Duke University Medical Center Durham, Carolina

del Norte 122115• 

• • • • 

Copyright © 2015 por la Sociedad de Biofísica. Todos los derechos reservados.•