Preparación de soluciones amoriguadoras de pH de uso común en laboratorios de bioquímica y

biología molecular

INTRODUCIÓN
Las reacciones químicas a nivel celular y/o tisular en los sistemas biológicos solamente ocurren
dentro de un estrecho intervalo de concentraciones de iones hidrogeniones (H+/H3+O). Para
mantener las condiciones óptimas en el medio acuoso celular, los sitemas biológicos cuentan con
una diversidad de sustancias como los tampones o amortiguadores de pH.
Los tampons son sustancias que sufren una protonación reversible dentro de un interval particular
de pH y por ello mantienen la [H3+O] dentro de unos límites aceptables a nivel fisiológico.
Dentro de las caracteríticas que se considera debe tener un tampón biológico ideal, se encuentran:
• Tener pKa entre pH 6.0 y pH 8.0
• Ser inerte para una amplia variedad de sustancias químicas y enzimas.
• Ser altamente polar
• No tóxico
• De bajo costo
• Ser estable a la presencia de sales y los cambios de temperatura
• No absorber luz ultravioltea o visible
Ninguno de los tampones utilizados en bioquímica y biología molecular cumple plenamente los
requisitos antes mencionados. Por ello, uno de los primeros trabajos que debe hacer un estudiante
de bioquímica para su trabajo de laboratorio consiste en la selección de un adecuado tampón para
su muestra objeto de estudio.
Luego de ello, deber realizar con rigor los cálculos necesarios para preparar la cantidad justa de
estos reactivos a utilizar en sus experimentos.
Con base en este context, se debe resolver el siguiente taller de laboratorio.
OBJETIVO
Elaborar un protocolo de preparación de algunas soluciones tampones de uso frecuente en
laboratorios de bioquímica y biología molecular

ACTIVIDAD
Realiza los cálculos necesarios para preparar cada uno de las soluciones tampones que se listan
abajo y elabora un protocolo (Guía) de preparación de los mismos.

 100 mL de tampon Tris-HCl 1,5 M y pH 8.8

 100 mL de tampon Tris-HCl 1,0 M pH 6.8
 100 mL de RIPA buffer (50 mM Tris pH 8.0; suplementado con 50 mM NaCl y SDS 1%)
 100 mL de tampón fosfato salino con la siguiente composición: 137 mM NaCI; 2.7 mM KCl;10
mM Na2HP04 y 2 mM KH2P04. Cuál será su pH?