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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN SIMÓN LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA AGUAS Y ALIMENTOS


CARRERA DE BIOLOGÍ A Universitario: Javier Orellana Salazar
Fecha de entrega: 18/04/2018 Grupo: 1
Docente: M.Sc. Mercedes Iriarte P.

Práctica # 2
DETECCIÓN DE INDICADORES CLÁSICOS POR EL MÉTODO DEEL NMP
1. Introducción
El agua contiene suficientes sustancias nutritivas para permitir el desarrollo de los
diferentes microorganismos. Muchas de las bacterias del agua provienen del contacto con el
aire, el suelo, animales o plantas vivas o en descomposición, fuentes minerales y materia fecal
Un número importante de enfermedades son transmitidas a través del agua. La contaminación
fecal en el agua es un factor importante ya que las heces contienen una gran variedad de
microorganismos, incluyendo enteropatógenos, los cuales son un riesgo para la salud pública al
estar en contacto con el ser humano. Estos enteropatógenos incluyen principalmente a las
bacterias de los géneros Salmonella, Shigella y Vibrio, protozoarios como Entamoeba
hystolitica o virus, como el de la polio o la hepatitis, que ingresan al agua cuando ésta entra en
contacto con la materia fecal. (Juárez et al., 2011)

El método de número más probable (nmp) es una estrategia eficiente de estimación de


densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células
individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia
(positivo o negativo) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de
microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito
importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la
población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se
obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla
probabilística. Algunas de las ventajas del NMP son: (i) la capacidad de estimar tamaños
poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se
puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en
una muestra de suelo usando el método de infección de plantas, (ii) provee una recuperación
uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados, (iii) determina sólo
organismos vivos y activos metabólicamente, y (iv) suele ser más rápido e igual de confiable
que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros. (Ramírez, 2014)

2. Objetivos
(Ídem guía)

3. Materiales y reactivos
(Ídem guía)
4. Resultados
Los resultados que se muestran a continuación corresponden al sitio de estudio con la
elaboración de una ficha de inspección sanitaria (Cuadro 1)
Por un lado, se determinó la carga microbiana de una fuente de agua por el Método del
N.M.P (Cuadro 2.)

PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRA E INSPECCIÓN SANITARIA (Cuadro 1.)


1. Ensayo Requerido
FISICOQUÍMICO Tipo de Servicio: Proyecto de investigación
MICROBIOLÓGICO Fecha: 1/04/2018
2. Datos de la Zona de Muestreo
Dirección: Condominio MonteVerde Comuna Pacata
Localidad: ---- Zona: Arocagua
Provincia: Cercado Departamento: Cochabamba
3. Datos de la muestra, lugar y punto de muestreo
Tipo de fuente hídrica: Cisterna
¿Existe tratamiento del agua? No
Tipo de Red de Distribución: Privada
Lugar de Muestreo: Cocina
Punto de Muestreo: Grifo de la cocina
Uso del agua: Consumo y lavado de servicios
Apariencia de la muestra: Cristalina (“Óptima”)
Estado del tiempo: Soleado
Tipo de Muestreo: Compuesto
4. Inspección Sanitaria
4.1 Lugar y punto de muestreo Cocina/grifo de la cocina
Estado sanitario del lugar de muestreo Bueno
Estado sanitario del punto de muestreo Regular
4.2 Medios de almacenamiento de agua
¿Almacena el agua? Si ¿Tiene depósito? Sí
4.3 Frecuencia de limpieza: Poca
4.4 Sistema de Distribución
Material del Sistema de Distribución Con tuberías galvanizadas
5. Datos de medición de campo
pH 6,78 Tambiente[°C] 24 Conductividad [µS/cm] ----
Tmuestra[°C] 22 OD [mgO2/L ---- Turbiedad [NTU] ----
Los datos fisicoquímicos no se midieron en la zona de estudio,
debido a falta de material/equipos. Asimismo, el croquis del
6. Observaciones
sistema hidráulico del laboratorio no se realizó por falta del
personal.
Cuadro 2. Análisis microbiológico de aguas de consumo del sitio de estudio por el
método N.M.P
ETAPA A PRUEBA PRESUNTIVA ETAPA A PRUEBA PRESUNTIVA
Muestra 1 (caldo lauril triptosa) Muestra 2 (caldo lauril triptosa)
Código 5-2-0 =≥ 445 NMP/100 mL Código 5-2-2 =≥ 4904 NMP/100 mL

ETAPA B ETAPA CONFIRMATIVA ETAPA B PRUEBA CONFIRMATIVA


Muestra 1 (caldo VBB) Muestra 2 (Caldo VBB)
Código 5-1-0 =≥ 229 NMP/100 mL Código 5-5-1 =≥ 3178 NMP/100 mL
ETAPA B ETAPA CONFIRMATIVA ETAPA B PRUEBA CONFIRMATIVA
Muestra 1 (caldo EC) Muestra 2 (Caldo EC)
Código 5-1-0 =≥ 229 NMP/100 mL Código 5-1-0 =≥ 635 NMP/100 mL
1 = Muestra tomada sin flamear el grifo 2 = Muestra tomada con flameo del grifo
5. Discusión

Según la NB 512, establece que el valor máximo aceptable para aguas de consumo humano
tomando parámetros bacteriológicos como Coliformes Totales debe ser de ≤ 5 NMP/100mL.
Considerando el dato de la NB 512 como parámetro de calidad microbiológico, se puede concluir
que las aguas de este condominio no están aptas para el consumo por la elevada cantidad de
coliformes totales.

6. Conclusión
El análisis bacteriológico dio positivo para ambas situaciones del lugar de muestreo,
mostrándose que la mayor carga de coliformes totales se encontraba en el sistema de distribución
ya que los valores de NMP en la muestra 2 son más elevadas que en la 1, normalmente se esperaría
que la mayor carga de coliformes totales se encuentre en la fuente de agua, pero en este caso fue al
contrario, presuntamente a una falta de una limpieza regular en el sistema distribución, ya que
cuando se hizo el llenado de la ficha de inspección sanitaria, se reportó que no había una limpieza
frecuente ( o en tal caso nunca se había hecho una) en el sistema de distribución.

7. Cuestionario

 ¿Cuál la diferencia entre un cultivo en filtro de membrana (FM) y tubos múltiples (NMP)?
El método de filtro de membrana emplea un tipo especial de filtro microporoso a través del cual
un volumen mayor (10 ml, 50 mL o más incluso) los microrganismos (bacterias) quedarán
atrapados en éste, donde cada disco filtrado se lo coloca en un medio de cultivo selectivo y
diferencial (agar) para su observar el crecimiento y posterior recuento de colonias típicas.
Por otro lado, el método de tubos múltiples emplea una serie de tubos con un caldo nutritivo
que permitirá el crecimiento y/o desarrollo de las bacterias con una alícuota de muestra de agua
(posiblemente contaminada por coliformes).
 ¿Qué ventajas y desventajas se pueden observar en los FM o NMP?
Características Filtro de Membrana Tubos Múltiples (NMP)
Recuento Recuento directo No recuento directo
Tiempo (emisión de Más rápido Menos rápido
resultados)
Dificultad Fácil Regular
Mayor concentración Menor concentración
Concentración de
usándose apenas unas
organismos
alícuotas
Tipo de agua (preferente Aguas de consumo Aguas residuales
para trabajar) (“potables”)
Trabaja con organismos Trabaja tanto con organismos
Tipo de MO’s estresados (debido al filtro) estresados como no
estresados.
 ¿Qué es lo que determina la viabilidad de las bacterias o en qué forma se observa la
viabilidad en los resultados en el método de NMP?
Este método trabaja con microorganismos no estresado, a diferencia del método por FM,
permitiéndose así que aquellos microorganismos que están débiles puedan tomar los nutrientes
del medio y crezcan.

8. Bibliografía

 IBNORCA Norma Boliviana NB 512. Calidad de Agua Potable para consumo Humano.
www.bvsde.paho.org/bvsacg/e/normas2/Norma-Bol.pdf

 Juárez, M., López, G., Luna, V & Moreno, L (2011). Manual de laboratorio de
Microbiología ambiental Instituto Politécnico Nacional. Unidad Profesional
interdisciplinaria de biotecnología.

 Ramírez, J. 2014. Microbiología. Número más Probable.


http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/numero-mas-probable-nmp.html