ANALISIS MICROBIOLÒGICO DEL AGUA

• GENERALIDADES

La potabilidad del agua puede establecerse desde dos puntos de vista:

1. Físico – Químico

2. Microbiológico

Desde el punto de vista Médico Veterinario nos interesa más el método

MICROBIOLÓGICO.

Conocemos que el agua es un líquido vital para la supervivencia y por esta razón es importante
que el consumo de la misma no sólo sea en cantidad sino además, en condiciones higiénicas,
dado que el agua es uno de los más importantes VEHÍCULOS en la transmisión de
enfermedades en humanos y animales.

Los Organismos Internacionales indican que el desarrollo de un pueblo se mide por la CALIDAD
DEL AGUA que consume.

Particularmente las enfermedades gastro-entéricas se transmiten a través del consumo de

agua NO POTABLE contaminadas con desechos orgánicos (materia fecal), proveniente de
animales y de personas.

Por esta razón la potabilidad del agua y su análisis microbiológico está dirigido a la búsqueda
de ciertos INDICADORES DE CONTAMINACIÓN FECAL, las llamadas bacterias entéricas
(bacterias que viven en el intestino de animales y personas).

En el análisis microbiológico del agua se utilizan 3 indicadores de contaminación fecal:

• EL GRUPO COLIFORMES (E. coli, Enterobacter cloacae, Ent. aerógenes).

• LOS ENTEROCOCOS (Streptococcus faecalis).

• CLOSTRIDIUM PERFRINGENS.

De estos tres grupos se prefiere al GRUPO COLIFORMES por las siguientes razones:

1. En una muestra contaminada su número es mayor que las otras bacterias.

2. Se conoce bien su periodo de vida y se pueden establecer contaminaciones recientes.

3. Su cultivo y aislamiento es bastante sencillo o fácil.

• CONDICIONES QUE DEBE REUNIR EL AGUA POTABLE SEGÚN OMS/OPS.

1. EN EL ANÁLISIS CUALITATIVO NO DEBE PRESENTAR MAS DE 20 COLIFORMES POR

LITRO DE AGUA.

2. EN EL ANÁLISIS CUANTITATIVO NO DEBE PRESENTAR MÁS DE 200 COLONIAS

BACTERIANAS POR MILILITRO DE AGUA.
 3. NO DEBE CONTENER BACTERIAS QUE PRESENTEN PIGMENTO (CROMÓGENAS),
BACTERIAS QUE DESPIDAN MAL OLOR, NI BACTERIAS QUE DESTRUYAN LAS
PROTEÍNAS (PROTEOLÍTICAS).

MATERIALES, MEDIOS Y EQUIPOS

• TUBOS DE ENSAYO CON TAPA DE ROSCA DE 25 Ml.

• GRADILLAS.

• PIPETAS DE VIDRIO ESTERILES DE 1 y DE 10 ML.

• TUBITOS DE DURHAM ESTERILES.

• CAJAS DE PETRI ESTERILES.

• CALDO LACTOSADO DE DOBLE CONCENTRACION.

• AGAR NUTRITIVO Y GELATINA NUTRIVA

• AGAR MAC CONKEY, ENDO AGAR o AGAR VERDE BRILLANTE EN CAJAS DE PETRI.

• MECHERO DE BUNSSEN.

• BAÑO MARIA.

• ASA BACTERIOLOGICA.

• ESTUFA BACTERIOLOGICA.

• REFRIGERADOR.

DESARROLLO DE LA PRACTICA

1. ANÁLISIS CUALITATIVO (calidad): Se realizan tres pruebas Presuntiva, Confirmativa y

Complementaria.

a) PRUEBA PRESUNTIVA: Cerca del mechero y con los cuidados necesarios inocular 5 tubos
que contienen 10 ml. de caldo lactosado de doble concentración y tubo de Durham invertido,
con 10 ml de la muestra de agua en cada uno de ellos; seguidamente llevar a la incubación a
37 º C. por 24 horas.
• Después de las 24 horas, la presencia de gas atrapado en los tubos de Durham es
indicador de una PRUEBA PRESUNTIVA POSITIVA.

• Dependiendo del número de tubos que presenten gas (aire), dentro del tubito de
Durham, se hace un cálculo estadístico del número probable de COLIFORMES por litro
de agua presente en la muestra:
 Nº de tubos positivos Nº probable de
presencia de gas (aire) coliformes
por litro de muestra.
1 20
2 50
3 90
4 160
5 >160

• b) PRUEBA CONFIRMATIVA: A partir del tubo que tenga mayor cantidad de gas (aire)
en el tubito de Durham, con asa estéril se toma una muestra del caldo y se inocula una
caja Petri con agar de MacConkey, se la identifica y luego se lleva a incubar a la estufa
bacteriológica a 37ºC por 24 horas.

• Transcurrido este periodo de tiempo, el desarrollo de colonias típicas de coliformes

caracterizadas por ser de color rosado, nos indican UNA PRUEBA CONFIRMATIVA
POSITIVA.
c) PRUEBA COMPLEMENTARIA: Consiste en inocular un sólo tubo de caldo lactosado de
concentración simple, conteniendo tubo de Durham invertido, con una muestra obtenida de
las colonias rosadas típicas de coliformes desarrolladas en la prueba confirmativa. Si después
de la incubación por 24 horas a 37 º C., aparece gas en el tubo de Durham invertido y en un
frotis con tinción de GRAM aparecen bacilos Gram negativos, significa que efectivamente, EL
AGUA ESTÁ CONTAMINADA CON MATERIA FECAL.

• 2. ANÁLISIS CUANTITATIVO (cantidad)

• Con una pipeta estéril y con los cuidados necesarios, tomar de la muestra original de
agua y depositar en 2 cajas de Petri estériles y vacías, 1 ml. en cada una de ellas.

• Sobre la muestra vaciar 20 ml. de AGAR NUTRITIVO (AN), en una de las cajas de Petri y
20 ml. de GELATINA NUTRITIVA (GN), en la otra, homogenizando la mezcla con
movimientos rotatorios suaves para que la muestra se distribuya uniformemente en
todo el espesor del medio de cultivo.

Identificar cada una de las cajas de Petri con las iniciales AN o GN, respectivamente,
dejándolas solidificar sin moverlas. Seguidamente, llevar el medio que contiene agar nutritivo
a la estufa bacteriológica (37º C. 24 horas) y dejar a temperatura ambiente el medio que
contiene la gelatina nutritiva, después de 24 horas se procede a realizar las lecturas u
observaciones correspondientes.
EN EL AGAR NUTRITIVO (AN)

CONTAR EL NÚMERO DE COLONIAS BACTERIANAS PRESENTES, OBSERVAR SI HAY COLONIAS

CON PIGMENTO Y SI EL CULTIVO DESPIDE MAL OLOR (FETIDO).
EN LA GELATINA NUTRITIVA (GN)

INVESTIGAR LA PRESENCIA DE BACTERIAS QUE DESTRUYEN LA PROTEINA (PROTEOLITICAS), ES

DECIR LA GELATINA ESTA LIQUIDA.