TALLER Nº 1 Aminoácidos y péptidos

1. ¿Qué es un aminoácido? ¿Por qué los aminoácidos presentan actividad óptica?

Un aminoácido es una molécula que contiene un grupo carboxilo (-COOH)

y un grupo amino (NH2-) libres. Pueden expresarse en general por NH2 CHR-COOH, siendo R un radical característico para cada ácido. Químicamente son muy variados. Los hay que forman proteínas (proteicos), mientras otros nunca se encuentran en ellas. Todos los aminoácidos que componen proteínas presentan un carbono asimétrico denominado alfa.
La actividad óptica se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que atraviesa una disolución de aminoácidos, y es debida a la asimetría del carbono , ya que se halla unido (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoácidos en Dextrogiros (+) si desvían el plano de luz polarizada hacia la derecha, y Levógiros (-) si lo desvían hacia la izquierda.

2. Dibuje el aminoácido Alanina ¿Cuál es la forma de este aminoácido que predomina a pH neutro?
NOMBRE: Alanina ácido L-2-aminopropiónico SÍMBOLOS: Ala; A NÚMERO CAS: 56-41-7 FAMILIA: aminoácidos con sustituyentes no polares (hidrofóbicos) FÓRMULA MOLECULAR: C 3H7 O2N MASA MOLECULAR: 89 PUNTO ISOELÉCTRICO: 6,00

Punto isoeléctrico: a pH neutro, la alanina existe predominantemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y carboxilo están ionizados, pero la carga neta es cero. El punto isoeléctrico (pl) es el pH al cual un aminoácido es eléctricamente neutro, esto es, donde la suma de las cargas positivas iguala la suma de las cargas negativas. Nota: para un aminoácido como la alanina el cual sólo tiene dos hidrógenos disociables (uno del grupo carboxilo alfa y otro

Polares sin carga: Ser. Aminoácidos con grupos R cargados negativamente. poseen todos seis átomos de carbono. pero a pH 7 menos del 10 % de las moléculas poseen carga positiva. la fenilalanina. la leucina. la de la aspargina y la glutamina. El pl es el punto medio entre pK1 y pK2 este p unto corresponde al pH donde la estructura II (carga neta de cero) predomina. Aquí se encuentran la alanina. sus grupos tilo e hidroxilo fenólico tienden a perder mucho más fácilmente protones por ionización que los grupos R de otros aminoácidos de esta clase. Tyr. Asp. R. Glu (b) Lo mismo. Trp.del grupo amino alfa). C Polares con carga: K. Phe. Polares con carga: Lys. Existen 8 aminoácidos que contienen grupos R no polares o hidrofóbicos. la treonina y la tirosina se debe a sus grupos hidroxilos. La polaridad de la serina.7. A pH 6 más del 50 % de las moléculas de la histidina. la valina. a veces se clasifica como una aminoácido no polar. la cual se halla casi en la línea fronteriza entre los aminoácidos no polares y los que poseen grupos: No polares: Ala. y en donde existen también iguales cantidades de la forma I (carga neta de +1) y de la forma III (carga neta de ±1). Q. a sus grupos amídicos y de la cistina a la presencia del grupo sulfhidrilo (-SH). V. Val. La cistina y la tirosina poseen las funciones mas polares de esta clase de aminoácidos. P. Pro. El menos hidrófobo de esta clase de aminoácidos es la alanina. Asn. Los aminoácidos en los que los grupos R poseen carga positiva neta a PH 7. Sus grupos R contienen grupos funcionales polares. Los aminoácidos pueden clasificarse según la polaridad de los grupos R. utilizando el código d e una letra: No polares: A. el pl es el promedio de pK1 y pK2: pl= [2. Ile. Arg. His. Estos aminoácidos son menos solubles en el agua que los aminoácidos con grupos R polares. neutros que pueden establecer enlaces de hidrógeno con el agua. Esta última tiene propiedades límite. Gln. E . cada uno de los cuales posee un segundo grupo carboxilo que se halla completamente ionizado y por tanto cargado negativamente a pH 6 y 7. Aquí se encuentran la lisina. Cys Aminoácidos con grupos R cargados positivamente. Met Aminoácidos con grupos R polares sin carga: Estos aminoácidos son relativamente más solubles en el agua que los aminoácidos anteriores. H. N. poseen un grupo R cargado positivamente. la isoleucina. F. I. W. Thr. D. Los dos miembros de esta clase son los ácidos aspártico y glutámico. (a) Complete la siguiente lista utilizando el código de tres letras.3 + 9.1 /2 =5. la prolina. M Polares sin carga: S. T. Y. la arginina y la histidina. 3. Leu. La glicola. el triptófano y la metionina. L.

0 6.98 9.68 10.51 V (mL) 7. se midió el pH con un pH-metro.0 4.0 3.80 . Los valores experimentales obtenidos están en la tabla siguiente : V (mL) 0.22 9. (a) Dibuje las estructuras de estas tres formas.00 10.5 1.5 pH 1.41 2.33 2. El agregado de NaOH se repitió sucesivamente hasta que el pH registrado fue cercano a 12.5 7.72) fue titulada con una solución de NaOH 1M.24 2.0 pH 9. luego de mezclar bien la solución.0 pH 2.0 2.0 1.58 9.96 11.05 8.4.5 6.5 8. glicina isoeléctrica (³glycine.0 9. de la siguiente forma: Sobre 50 mL de solución de clorhidrato de glicina se agregó 0.5 mL de NaOH 1M.0 8.5 5.5 9.5 3.5 2.36 2.75 5. free base´) y la sal sódica (glicinato de sodio.30 2.95 8.15 2.82 2.5 10.37 V (mL) 4.0 5. La glicina puede obtenerse comercialmente en tres formas: clorhidrato de glicina. (b) Una solución de clorhidrato de glicina (cuyo pH inicial era 1.62 9.

y no de cantidad o volumen de acido o base que podes amortiguar porque eso va a depender de la concentración del acido o de la base a usar. En el caso particular de la glicina (gly) sus valores son: pKa1 : 2.4 para el pKa1 y también se puede usar como buffer de pH desde 8.CURVA DE TITULACION Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2. Para la glicina entonces se forma un buffer que va a amortiguar un intervalo de pH desde 1.1) se le tiene que aplicar a ambos pKa del aa y ese será el valor de pH máximo que amortigua la solución.6 para el pKa2.6) pH=pI= 6 Hablamos de 2 intervalos por cada aminoácido .6 que se corresponde con un pH alcalino por lo que la molécula tendrá carga neta + o sea COO. entonces tiene dos pKa. . uno para cada uno.6 hasta 10. Ese intervalo amortiguador (+/ .4 + 9.4 que se corresponde con un medio acido por lo que la molécula del aa tiene carga neta + osea COOH+NH3+ pKa2 : 9. Igual hay que tener en cuenta que siempre hablamos de unidades de pH.+ NH2. afuera de eso ya no amortigua nada. Un aminoácido tiene al menos un grupo amino (NH2) y un grupo carboxilo (COOH).4 a 3.

87) pH=pI=6.11 Lisina Punto Isoelectrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2. pero la carga neta es cero Acido Glutámico: El ácido aspártico y el ácido glutámico son donadores de . (a) Esquematice las curvas de titulación que esperaría para los aminoácidos Ala. (b) Calcule el punto isoeléctrico de cada uno de ellos. Glu y Lys.35 + 9.68 c) Alanina: a pH neutro.16 + 9.5. la alanina existe predomin antemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y carboxilo están ionizados.20) pH=pI= 5.11 ACIDO GLUTAMICO Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2. (c) ¿Cuál es la forma que predomina a pH neutro? ALANINA Punto Isoeléctrico pH=pI=1/2(pKa1 + pKa2) pH=pI=1/2 (2.87) pH=pI=6.35 + 9.

tener ambos comportamientos al mismo tiempo. siendo el estrecho margen de 7. Cuáles de los aminoácidos tienen capacidad reguladora de pH en la zona fisiológica (entre pH 6 y pH 8)? Son Isoleucina con pI 6.8 y 7. a un determinado pH (en su pI).05) pI=3. A pH neutro las cadenas laterales de estos aminoácidos están completamente ionizados.protones. mientras que en el fuertemente ácido lo hacen positivamente.7.45 el de normalidad. En un medio muy básico se cargan negativamente. el alfa-carboxilo disociado (-COO-) y los dos aminos protonados -NH3+ ). Los valores de pK son tales que determinan que en la disociación siguiente. El pH de los medios biológicos es una constante fundamental para el mantenimiento de los procesos vitales. Lisina: A pH neutro. conteniendo un grupo carboxilo cargado negativamente (-COO). es decir. En humanos los valores extremos compatibles con la vida y con el mantenimiento de funciones vitales oscilan entre 6. aproximadamente. Tampones inorgánicos 1.3. Prolina con pI 6. como a la gran abundancia de esta proteína en la sangre (15 % del volumen total sanguíneo). Valina con pI 6. es un sistema muy eficaz debido a que: 1) La . Los sistemas encargados de evitar grandes variaciones del valor de pH son los denominados ³amortiguadores. Leucina con pI 6. Los amortiguadores resisten tanto a la adición de ácidos como de bases. el valor x sea.16) es un ácido más fuerte que la desoxihemoglobina (pK= 7. La acción enzimática y las transformaciones químicas de las células se realizan dentro de unos estrictos márgenes de pH. ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la His? Punto Isoeléctrico de His (Histidina) pH=pI=1/2 (1.71). El aminoácido tiene una carga positiva neta 6. Son por lo general soluciones d e ácidos débiles y de sus bases conjugadas o de bases débiles y sus ácidos conjugados. 0. forma iónica de un aminoácido dibásico. Es por eso que se les denomina aspartato o glutamato para enfatizar que están cargados negativamente a pH fisiológico . e Histidina con pI 7. Tampón hemoglobina Es un tampón fisiológico muy eficiente debido tanto al cambio de pK que experimenta al pasar de la forma oxidada a la reducida.93 7. Desde el punto de vista fisiológico este tipo de amortiguador es resulta de especial interés a nivel tisular.8.81 + 6. es imprescindible el mantenimiento de un pH para la realización de muchas reacciones químico -biológicas.35 a 7. Aunque su valor de pK (6. Tampón carbónico/bicarbonato Está constituido por H2CO3 y HCO3 -. buffer. o tampones´. La oxihemoglobina (pK= 7. Tampones orgánicos Las proteínas y aminoácidos como tampón Los aminoácidos y proteínas son electrolitos anfóteros.4).6.1) está algo alejado del pH fisiológico de la sangre (7. pueden tanto ceder protones (ácidos) como captarlos (bases) y. La carga depende del pH del medio. También en el trabajo de laboratorio.

35 y 3. Glutamina.99 mínimo y 2.16 +/-1 1.9 máximo.05 máximo. 2) es un sistema abierto.1 sería 1.99 +/. Isoleucina. Serina. Gly (Glicina) pK1= 2. Lisina pH12 con pK R Arginina 10.81como mínimo y 2.78 mínimo y máximo respectivamente. Y con pK2 = 9. Aspargina. Lisina. Lys (Lisina) pk1=2. Triptófano.9 A pH= 11 el grupo -amino estará al 100% desprotonado Si pK -1 = 7. Acido Aspártico. Valina con pK R Cisteína.78 y 10. Histidina. Glicina.81 +/-1 sería 0. y 3) además.9 A pH= 9.9 A pH = 9. Para pK2 = 9.35 el mínimo y el máximo nivel de amortiguación de pH.05 +/ -1 sería 5.20 máximo. el HCO3. Acido Glutámico.5 el grupo -amino estará al 100% desprotonado y Si pK +1 = 9. Metionina. Indique el o los rangos de amortiguación de los aminoácidos Gly.99 máximo.9 A pH =11 el grupo -amino estará al 100% desprotonado .puede ser eliminado por los riñones mediante un sistema de intercambio con solutos. (Acido Aspártico) pK1 = 1.20 mínimo y 10. pH6 : con pK R Histidina pH9 : con pK2 Alanina.78 +/ .81 como máximo. pH 9 y pH 12 pH pH4: con pK R Acido Aspártico. con lo que el exceso de CO2 puede ser eliminado por ventilación pulmonar de manera rápida. Elija aminoácidos que amortigüen a pH 4. mientras que en pk2=6. Fenilalanina. Asp y Lys. His. Con pK2 = 3.05 mínimo y 7. His (Histidina) pK1= 1.9 y SI pK +1 = 9.5 el grupo -amino estará al 100% protonado Si pK -1 = 7.16 el máximo. ¿qué fracción estará protonada a pH 9.relación HCO3-/ H2CO3 es muy alta (20/1).9 mínimo y 4. Tirosina.1 sería 0. 9. Asp.16 sería el mínimo y 3. Acido Glutámico. Leucina.35 +/. 8.1 sería 8. pH 6.9 sería 2.20 sería 8. Arginina. Para el grupo -amino de la Lys.5? ¿Y a pH 11? AMINOACIDO LISINA (Lys) pK de amino = 8. lo que le proporciona una alta capacidad tampón frente a los ácidos.

8? AMINOACIDO ACIDO GLUTAMICO (Glu) pK de carboxilo = 2. la fuerza ejercida por el campo eléctrico sobre la molécula cargada. como los aminoácidos.0? ¿Y a pH 3. Cuando se aplica un campo eléctrico a una solución. Esta velocidad depende de la carga y de las dimensiones de cada especie molecular.1 y A pH=5 el grupo -COOH estará al 100 % anoniado y A pH= 3. la molécula (cargada) se mueve con una velocidad en la que estas fuerzas resultan equilibradas. Electroforesis sobre papel. Cuando se aplica el campo eléctrico. las fuerzas de fricción que ejerce el entorno sobre la molécula. Para el grupo -carboxilo del Glu. Si bien la electroforesis como método de separación puede llevarse a cabo de modo libre en una solución. .11. Este desplazamiento se denomina electroforesis. ¿qué fracción estará en la forma aniónica a pH 5.8 el grupo -COOH estará al 100% desanoniado 12. puede emplearse la electroforesis sobre papel. y oponiéndose a este movimiento. Por un lado. Dado que moléculas diferentes difieren en por lo menos uno de estos aspectos. las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo. las velocidades diferenciales de desplazamiento en un campo eléctrico permite separarlas. es más frecuente hacerlo sobre un soporte. La velocidad de las moléculas depende de dos factores. Para moléculas pequeñas. Por otro lado.

Se hace una electroforesis sobre papel a pH 3. Lys. cuya reacción con l os aminoácidos da un compuesto de color azul. Ser. Phe. Glu. 16. asi mismo debe influir la velocidad que experimenta cada aminoácido con relación a la solución tampón y los electrodos.Asp Lys Gly . Se hace una electroforesis sobre papel de una mezcla de Gly.Lys Gly Asp . Para aminoácidos. Arg. Ser. Arg y Ser. se suele utilizar la ninhidrina. Cys y Arg en un campo eléctrico a pH 7? Gly.9 de una mezcla de Ala. Arg (b) ¿Cuáles permanecen cerca del origen? Gly. La solución tampón tiene pH 6.97) es ligeramente más ácida que la Leucina (5. Una gota de l a mezcla que se va a analizar se aplica sobre el papel.98). Dada una solución que contiene Lys y Tyr. (a) ¿Cuáles se mueven hacia el cátodo y cuáles hacia el ánodo? ANODO: Glu CATODO: Lys. La solución tampón permitirá mantener constante el pH durante el experimento. Aminoácidos con cargas idénticas pueden separarse levemente cuando son sometidos a electroforesis sobre papel. Arg. se retira el papel y se lo deja secar. Luego de un tiempo adecuado (usualmente horas). Leu. His ANODO: Asp 15. Ala. se desconectan los electrodos.Los extremos de una tira de papel de filtro se sumergen en dos cubas que contienen una solución tampón y los electrodos. y los electrodos se conectan a una fuente de corriente eléctrica continua. ¿a qué pH migran en i gual sentido si son sometidos a un campo eléctrico? ¿y en sentido contrario? A pH 10 migraran hacia el ánodo y a pH 7 migraran en sentido contrario . Phe. Por ejemplo. Glu. dependiendo del tipo de moléculas. Sugiera una explicación para este hecho. 17. la glicina se separa de la leucina. Se separan porque la Glicina (5. Es casi nada pero no es el mismo p H. 13. ¿Cómo se comportan Gly. Escriba las fórmulas de los siguientes tripéptidos: . Ser 14. 18. Asp e His ¿hacia dónde migrará cada uno de ellos? CATODO: Ala. y Cys se van al ánodo porque son más ácidos carga negativa mientras que Arg se va al cátodo es básico con carga positiva. La ubicación de la zona donde se encuentran las distintas especies moleculares luego de la migración electroforética se revela utilizando diferentes métodos.Gly Lys Asp . Ala. Glu.0. Leu.

.

proponga un valor de pH en el que se prodría hacer una electroforesis para separarlos.5? (b) Dada una mezcla de esos tres tripéptidos. supong a que estos pK son los que se dan en la tabla. (a) A los fines de este ejercicio. y por lo tanto los pK pueden diferir de los valores observados en los aminoácidos libres. Cuando los aminoácidos están formando cadenas polipeptídicas. los pK de las cadenas laterales están influenciados por el contexto de la molécula de la cual forman parte. .19. (b) ¿En cada caso. cuál sería la carga de las especies que espera encontrar a pH 6. y calcule el punto isoeléctrico de los tripéptidos del ejercicio anterior.

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