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Se ha visto que cuando se sobreexpresa cambia su localización, ya que una elevada

sobreexpresión inhibe el crecimiento de las células.

cuando se sobreexpresa e independientemente de si hay un estrés osmótico o no. Los gránulos de


procesamiento constituyen sitios de almacenamiento y degradación del mRNA

Para comprobar la expresión de la proteína y ver si es soluble se sigue el procedimiento de


pequeña escala para la expresión y purificación por afinidad de la proteína. A partir de los
resultados obtenidos se podrá expresar y purificar a gran escala o ver la interacción del constructo
con otras proteínas.

Se realizó el test de expresión por IPTG con: 10 mL LB con los antibióticos correspondientes y una
colonia crecida de la placa. Se incubó a 37ºC hasta que el cultivo alcanzó una densidad óptica
(OD600) entre 0,6 y 0,8. Esta densidad corresponde al crecimiento exponencial de las células E.
coli y es el momento clave para inducir la sobreexpresión de la proteína. La absorbancia se midió
con un densitómetro Ultrospec 10 (Amersham Biosciences®). Una vez tuvimos los cultivos listos la
expresión de la proteína de interés fue inducida con 0,8 mM IPTG (CalBiochem®). El cultivo se dejó
a 20ºC toda la noche. El IPTG es un inductor análogo de la lactosa que induce la transcripción del
operón lac en bacterias y por lo tanto, induce la expresión de la proteína recombinante de interés.

La sobreexpresión de las diferentes construcciones mediante el método de autoinducción ha sido


más efectiva que a través de la inducción por IPTG.