33.

7 La filtración en gel es un tipo de cromatografía de exclusión por tamaño en la que los

empaques son hidrófilos y los eluyentes son acuosos. Se utiliza para separar compuestos polares
de alta masa molecular. La cromatografía de permeación en gel es un tipo de cromatografía de
exclusión por tamaño en la que las empaquetaduras son hidrófobas y los eluyentes no son
acuosos. Se utiliza para separar especies no polares de alta masa molecular.

33.8

Por HPLC pero no por GC se pueden separar compuestos inestables al calor y no volátiles.

33.9 En una elución isocrática, la composición del disolvente se mantiene constante durante toda
la elución. La elución isocrática funciona bien para muchos tipos de muestras y es más sencilla de
implementar. En una elución en gradiente, se emplean dos o más disolventes y la composición del
eluyente se cambia continuamente o en etapas a medida que avanza la separación. La elución en
gradiente se usa mejor para muestras en las que hay algunos compuestos bien separados y otros
con tiempos de retención excesivamente largos.

30.10 Para analitos que tienden masas moleculares mayores a 10 000 se utiliza uno de los dos
métodos de exclusión molecular; permeación en gel para especies no polares y filtración en gel
para especies polares o compuestos iónicos. Para especies iónicas, la cromatografía de
intercambio iónica suele ser el método de elección. En la mayoría de los casos, para moléculas
pequeñas no iónicas, los métodos de inversión de fases suelen ser adecuados.

33.11 En la cromatografía iónica en la columna supresora, a la columna cromatográfica le sigue

una columna cuyo propósito es convertir los iones utilizados para la elución en especies
moleculares que son en gran parte no iónico y, por lo tanto, no interfieren con la detección
conductométrica de la especie de analito. En la cromatografía iónica de columna única, se usan
intercambiadores iónicos de baja capacidad para que las concentraciones de iones en la solución
de elución se puedan mantener bajas. La detección se basa entonces en las pequeñas diferencias
en la conductividad causadas por la presencia de componentes de muestra eluidos.

33.12 Se necesita una muestra de la fase gaseosa por espectrometría de masas. La salida de la
columna de LC es un soluto disuelto en un solvente, mientras que la salida de la columna GC es un
gas y así directamente compatibles. Como un primer paso para LC/MS, el disolvente debe ser
vaporizado. Cuando está vaporizado, sin embargo, el solvente LC produce un volumen de gas 10 -
1000 veces mayor que el gas portador en cromatografía gaseosa. Por lo tanto, también debe
eliminarse la mayoría de los solventes.

25.17

(a) Los compuestos aromáticos no polares se separaron por HPLC en una fase unida a octadecilo
(C18). El eluyente fue 65% en volumen de metanol en agua. ¿Cómo se verían afectados los
tiempos de retención si se usara metanol al 90%?

Rta: El metanol es menos polar que el agua. Si reemplazáramos el solvente eluyente de MeOH al
65% en agua a MeOH al 90% en agua, estaríamos reduciendo la polaridad del solvente eluyente,
por lo tanto la fuerza eluyente de la fase móvil aumenta a medida que disminuye la polaridad. El
90% de MeOH / H2O es menos polar que el 65% de MeOH / H2O, por lo que la fuerza eluyente es
más fuerte, por lo que la elución es más rápida.

(b) Los solutos polares se separaron por HPLC (no HILIC) con una fase unida que contenía
sustituyentes de diol polar [-CH (OH) CH2OH]. ¿Cómo se verían afectados los tiempos de retención
si el eluyente se cambiara de 40% en volumen a 60% en volumen de acetonitrilo en agua? El
acetonitrilo (CH3CqN) es menos polar que el agua.

Rta: Cuanto más polar es el solvente, mayor es la resistencia del eluyente en una columna polar y
menor es el tiempo de retención. Como el 60% en volumen de acetonitrilo es menos polar que el
40% en volumen de acetonitrilo, el tiempo de retención será mayor para el 60% en volumen de
eluyente.

(c) Los solutos polares se separaron por cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) con una
fase de unión fuertemente polar. ¿Cómo se verían afectados los tiempos de retención si el
eluyente cambiara de 80% en volumen a 90% en volumen de acetonitrilo en agua?

Rta: los compuestos polares en una fase estacionaria polar aumentan el tiempo de retención, por
lo que el tiempo de retención sería mayor si el eluyente se cambiara de 80% en volumen a 90% en
volumen de acetonitrilo en agua.

(d) Los solutos polares se separaron por cromatografía en fase normal sobre sílice desnuda usando
metil t-butil éter y disolvente 2-propanol. ¿Cómo se verían afectados los tiempos de retención si el
eluyente se cambiara de 40% en volumen a 60% en volumen de 2-propanol?

Rta: El tiempo de retención sería más corto si el eluyente se cambiara de 40% en volumen a 60%
en volumen de 2-propanol.