(2) interacciones PROTEOGLYCAN FOSFOLÍPIDOS Y también es interesante observar que,

en ambos predentin fosfolípidos y la dentina, comparten las mismas ubicaciones como

proteoglicanos. Histoquímica ultraestructural los estudios han demostrado que los
glicosaminoglicanos (GAGs) están presentes en predentin y dentina y están estrechamente
asociados con el fosfolípido-tinción positiva para el material. En predentin, GAGs aparecen
como agregados o como gránulos cuando colorantes catiónicos como Alcian Blue, Rojo, o
rutenio rutenio tricloruro hexamine fueron utilizados. Aparecen como estructuras cuprolinic
stellated con azul, y como horquillas o estructuras en forma de boomerang con detergentes
catiónicos como cloruro cetylpyridinium (para revisión, ver Goldberg y Takagi, 1993; Embery et
al., 2001). GAGs no están manchadas por MGA. Dependiendo del método utilizado, los
agregados se encuentran en estrecho contacto con las fibrillas de colágeno y/o
Intercollagenous espacios. Sin embargo, también se ha demostrado que, después
rapidfreezing y congelar de sustitución, lo que minimiza la pérdida de proteoglicanos y
agregación de los componentes artefactual, GAGs aparecen como un gel expandido amorfo,
llenando todo el espacio disponible entre las fibrillas de colágeno (Goldberg y Escaig, 1984c).
Tomadas en conjunto, en predentin, la tinción para GAGs aparece como muy uniforme. Más
recientemente, detección immunogold reveló que condroitín sulfato y dermatan sulfato (CS/DS)
muestra un gradiente decreciente de distal a proximal y el reverso predentin ha observado para
keratan sulfato (KS) (Goldberg et al., 2000; Hall et al., 2000).

Lo mismo se aplica a la CS/DS- y KS-relacionados proteoglicanos ricos en leucina decorin y

lumican, respectivamente, los cuales no son Uniformemente distribuido y aumento en la
predentin distal. Aparentemente, desde nuestras observaciones histoquímica de electrones, los
fosfolípidos también mostrar tal gradiente, con el aumento de tamaño y número de agregados
producidos por el método de tinción. Por lo tanto, se puede concluir que, en predentin, algunos
fosfolípidos y algunos proteoglicanos comparten los mismos territorios en intercollagen
espacios. Podrían estar involucradas en el transporte De fibrillas de colágeno de la predentin
proximal, el lugar donde están segregadas, en la parte distal, donde se produce la
mineralización. Es posible que junto con las lipoproteínas PGs desempeñan papeles en el
proceso de fibrilación del colágeno, como es el caso in vitro (Pentikäinen et al., 1997).
Liposomas, por otro lado, como se ha observado en muchos ámbitos de nuestras secciones
predentin, pueden contribuir a que el transporte de calcio hacia la mineralización del frente.
Conviene aclarar, para evitar cualquier confusión, que estos liposomas son distintas de las
vesículas de la matriz extracelular.

Liposomas forman una red de fosfolípidos en la predentin extracelular en todas las etapas de la
dentinogénesis. Filamentos y gránulos interconectados, de 3 a 12 nm de espesor, forman la
malla de la red irregular, alrededor de 0.1-0.2 mm de diámetro. Esta red es totalmente ajeno a
las vesículas de matriz (MV), Visto sólo durante la formación de la dentina del manto, y nunca
observados en el desarrollo del esmalte. MV se originan de células y derramando en ciernes.
Las proteínas y los fosfolípidos de la membrana limitante de MV tienen una composición que
difiere de la de la membrana plasmática, al menos para los condrocitos. Los proteoglicanos son
Ubicado en la matriz extracelular y en la superficie de la membrana. Enzimas y proteínas que
se sabe que están asociadas con los procesos de mineralización están también presentes en
MV. En este contexto, un alto nivel de fosfatasa alcalina, una enzima que genera el fosfato
inorgánico de fosfato orgánico compuesto, ha sido detectado. Proteínas de unión a calcio de la
anexina familia (es decir, la anexina II, V y VI), metaloproteasas de matriz como la MMP-2, -3, -
9, -13, y los factores de crecimiento como el factor de crecimiento transformante- han sido
identificados en MV (Wuthier, 1988; Nefussi et al., 1989; Dean et al., 1992; D'Angelo et al.,
2001). Muchos estudios han sido llevados a cabo en el MV y proporcionar información sobre
los mecanismos de la mineralización del cartílago. Interacciones entre MV y colágeno (Wu et
al., 1991), Descripción del núcleo nucleational complejo (Wu et al., 1993), y la identificación de
la anexina (Wuthier, 1988) arrojan luz sobre este fenómeno y cómo se genera. En la ausencia
de MV, que es el caso con circumpulpal dentina y esmalte, la mineralización está ocurriendo
también, pero de una manera diferente. Sin embargo, algunos eventos son similares y sugerir
algunas características comunes. Aunque hay muchas diferencias entre los derivados de
célulasMV y el liposoma predentin visualizados en la red, ambas están formadas por lípidos
involucrados en la biomineralización.

La naturaleza de la interacción con PGs todavía no está establecida, pero se puede

argumentar que, o bien actúan en sinergia en los procesos de mineralización, o PG moléculas
excluir iones de calcio en su periferia, favoreciendo así la concentración de calcio extracelular
dentro de fosfolípidos. Al hacerlo, el La inhibición de la precipitación de fosfato de calcio y/o el
aumento de la concentración de iones de calcio dentro de liposomas phospholipidrich puede
contribuir a eventos que promueven la nucleación mineral inicial. In vitro, se ha demostrado que
cuando un cartílago proteoglycan aggrecan-que no parecen estar presentes en predentin-se
añade a la suspensión de medio, no tiene ningún efecto sobre la precipitación intra-liposomal,
pero gravemente Redujo su posterior propagación al medio por ~ 70% (Eanes et al., 1992).
Esta no es la primera vez que la PGs han demostrado interactuar con lípidos y contribuir a la
formación de estructuras mineralizadas. Este fenómeno ha sido reportado en la placa
aterosclerótica, y lo mismo puede aplicarse a la situación de la dentina (Jarrold et al., 1999;
Kaplan y Aviram, 2000). Decorin enlaces las lipoproteínas de baja densidad (LDL) al colágeno,
Y esta interacción parece contribuir a la formación de placas ateroscleróticas que
posteriormente se sometieron a la mineralización (Kovanen y Pentikäinen, 1999). Biglicán,
encontrada en el cartílago, hueso, piel, dentina, y muchos otros tejidos, también es un
proteoglycan vascular. Se enlaza de manera diferente a las lipoproteínas de alta densidad 2 y 3
(HDL2 y HDL3) (Olin et al., 2001). Esto ha sido establecido en la placa aterosclerótica pero No
se puede generalizar. En el hueso, dentina, y cartílago, mineralización inicial es proporcionada
por vesículas de matriz: los fosfolípidos de la membrana que rodea proteínico/está protegido o
cubierto por PGs, y las segundas están estrechamente asociadas con MV o membrana situada
en los alrededores de la matriz extracelular (para revisión, ver Wuthier, 1988; y Nefussi et al.,
1989). La mineralización de la matriz se produce sólo después de vesículas Degradación de
PGs por MV-específicas asociadas como las metaloproteasas MMP-3 o stromelysin-1 (Dean et
al., 1992). Se ha reportado que la MMP-2, -9 y -13 también están implicados En estos eventos
en la placa de crecimiento del cartílago (D'Angelo et al., 2001). En 1976, Vogel y Boyan-Salyers
(1976) propuso que los fosfolípidos ácidos pueden estar implicadas en la cascada de eventos
siguientes: (1) los liposomas o membranas plasmáticas de proporcionar un entorno en el que la
mineralización puede ocurrir; (2) después de desolvatación y concentración de iones; (3)
además de Ca++ vinculante, la formación de dímeros CaHPO4 y su condensación En una
(Ca9PO4)6 unidades enlazadas a la membrana se logra mediante el crecimiento de cristales,
los cuales, a su vez, destruye el dominio hidrofóbico; y (4) una vez que la mineralización está
iniciado, los cristales crecen a lo largo de las superficies de las fibrillas de colágeno, y esta es
la razón de la presencia de estructuras en forma de aguja, también llamado "crystal fantasmas"
(Bonucci, 1987), que se compone de una mezcla de proteínas, proteoglicanos y fosfolípidos.
Este Codistribution se observa también en dentina. En este contexto de interacciones entre los
proteoglicanos y las lipoproteínas de baja densidad, algunos datos sugieren que las
lipoproteínas de baja densidad (LDL) interactúan con las cadenas de GAG decorin y biglicán,
que sí están sujetos a la endocitosis mediada por receptor, a través de interacciones mediadas
por la lipoproteína lipasa (Schönherr et al., 2000). También es digno de mención que el LDL-
relacionadas Scavenger receptor y trombospondina 2 (Yang et al., 2001) regulan la matriz
extracelular la metaloproteinasa-2 (MMP-2).

(3) ORIGEN DE FOSFOLÍPIDOS Y DENTINA PREDENTIN la incorporación y la suerte de

fosfolípido precursores han sido estudiadas principalmente por radioautography. Durante años,
los resultados se ve menoscabada por el hecho de que la obtención y difusión de los
etiquetados como precursor(s) podría ocurrir durante la fijación, deshidratación, Y embedding
(en Epon). Por lo tanto, todos los datos obtenidos con métodos convencionales no eran fiables.
Nuestros intentos de etiqueta de precursores con ácido palmítico (Goldberg y Escaig, 1984d) o
ácido oleico (Goldberg et al., 1990) no pudieron proporcionar información precisa. El etiquetado
de fondo era tan alto que la interpretación de los resultados se vio obstaculizada. En contraste,
cuando [3H] la colina se utiliza en conjunción con la MGA o Fijación iodoplatinate y manchas,
se forman agregados que impidan la traslocación del etiquetado compuesto. Etiquetado de
fondo en este caso fue moderada y, por lo tanto, aceptable.

Para investigar cómo etiquetan los precursores son incorporados en tejidos dentales, y el
destino y el volumen de negocios de fosfolípidos, nos inyecta ratas por vía intravenosa a través
de la vena yugular con [3H] La colina. Las ratas fueron asesinados 30 min, 1 hora, 2 horas, 4
horas, 24 horas, 48 horas y 4 días después de una perfusión intracardiaca MGA solución
durante 10 min. El desarrollo de partes de los incisivos mandibulares fueron disecados, y los
cortes se encontraban inmersos en el fijador de la noche a la mañana. Tras varios aclarados en
el búfer solos, las muestras fueron deshidratadas y embebido en Epon. Semi-finas secciones
fueron procesados para radioautography. Utilizando métodos cuantitativos, nosotros Anotó la
densidad de granos de plata automáticamente por compartimento y para cada período de
tiempo (por detalles técnicos, consulte Goldberg et al., 1999). Esto se llevó a cabo en el
odontoblasto cuerpos celulares, formando predentin, dentina, esmalte y ameloblasts. El análisis
de la varianza (ANOVA) y significancia estadística de las diferencias entre dos valores
promedio, evaluado por el test PLSD de Fischer, Scheffé F Prueba.f y la prueba de Dunnett t
fueron calculadas por Statview Statview ( II, Abacus conceptos, Calabasas, CA, USA).
Después de 30 min, en todos los compartimentos de las secciones, la incorporación de [3H]
precursor cholinelabeled era inferior o igual al fondo etiquetado, excepto en la dentina, donde el
etiquetado fue significativamente por encima del nivel de fondo. Lo mismo ocurrió 1 horas
después de la inyección de precursores. Etiquetado de la dentina fue incluso aumentó en ese
periodo de tiempo.

Después de 2 horas, el etiquetado comenzó a ser significativamente por encima del nivel de
fondo en odontoblastos, predentin, desarrollo de esmalte y ameloblasts secretora. La dentina
estaba densamente etiquetados. Después de 4 horas, el etiquetado sigue aumentando en
odontoblastos y ameloblasts, alcanzando máximos a las 24 hrs. A las 48 horas, los granos de
plata fueron redistribuidos, y parecían estar concentrados en la parte de la dentina
correspondiente a lo que hemos llamado metadentin Septier y Goldberg ( 1996).

El etiquetado se mantuvo bastante alta en esmalte y la dentina en 4 días, a pesar de una ligera
disminución era evidente. El principal hallazgo de esta investigación fue que la dentina fue
etiquetado antes de odontoblastos, las células productoras de este tejido. Esperábamos
encontrar una eventual incorporación en odontoblastos en 30 min-1 hr, seguido por una
posterior secreción o liberación de fosfolípidos en Predentin. Este no era el caso. El hecho de
que el etiquetado apareció en la dentina antes de cualquier absorción visible en el odontoblasto
y predentin fue totalmente inesperado. Nuestra hipótesis de trabajo es que intercambio
isotópico ocurren entre las membranas de las células sanguíneas que incorporar y sintetizar los
fosfolípidos, etiquetados y lipoproteínas (muy bajo, intermedio y las lipoproteínas de alta
densidad). Estas lipoproteínas pueden ser transportados por un portador de lípidos Y
rápidamente penetran en la dentina. El tiempo necesario para que estos eventos ocurren
dentro de los límites de 30 min, y por lo tanto encaja bien con nuestra observación.
Odontoblasto incorporación de los precursores y la subsiguiente secreción supera este período
de tiempo. En realidad, es sabido que el rotulado de la albúmina, una proteína sérica, pasa
entre la parte distal junctional complejos ubicados entre odontoblastos y difunde en todo
predentin.

Posteriormente La albúmina es incorporado en la dentina (Kinoshita, 1979). En este contexto,

la albúmina es uno de los bien reconocidos de lípidos, proteínas o lípidos portadores
(Veerkamp y Maatman, 1995). La presencia de etiquetado (3H) que contienen colina y dentina
predentin fosfolípidos en tan temprano como a los 30 min-1 hr admite difusión en lugar de
incorporación y la secreción de odontoblastos. Esta hipótesis arroja luces sobre el posible
origen de fosfolípidos Implicado en la dentina biomineralización. Esto no puede ser aplicado a
los ameloblasts secretora, que se conectan en sus partes distales por varias hebras de
apretados empalmes y que actúan como una barrera de permeabilidad entre las células del
órgano del esmalte y la formación del esmalte. En este sentido, ha sido demostrado por
Wortsman y Traycoff (1980) que un fuertemente enlazada la albúmina la fracción de calcio está
presente en ambos sueros humanos y de rata. Este calcio es complejado A la albúmina a
través de ácidos grasos, y esta circula fuertemente enlazada o fracción de calcio albúmina
complejo de ácidos grasos puede ser absorbido por las células vivas. Para el sistema
predentin/dentina, nos gustaría sugerir que la albúmina complejo de ácidos grasos no serán
inmediatamente incorporados en las celdas, pero pasa entre odontoblastos, cruza la parte
distal permeable junctional complejos, y se difunde en la dentina antes de cualquier uptake
celular y fosfolípidos Síntesis. No podemos descartar que la acumulación inicial de la etiqueta
en la dentina puede ser debido a interacciones físico-químicas entre los precursores, el
colágeno, y el mineral y por lo tanto no refleja un fenómeno biológico controlado. Sin embargo,
la redistribución de los granos de plata en el área metadentin ocurridos entre 2 y 4 horas
después de la inyección, sugiere que este evento no puede ser un simple enlace de los
fosfolípidos en el mineral, sino un Proceso activo.

Cualquiera que sea el origen de estos fosfolípidos puede ser, todavía hay algunos conflictos
entre datos sobre histoquímica el papel potencial de los fosfolípidos en predentin, en el
transporte de calcio hacia el metadentin mineralizantes, y los resultados obtenidos por
radioautography que sugieren una interacción directa entre los lípidos séricos de origen y la
fracción de lípidos en la dentina A través de la albúmina.
Los dos grupos de fosfolípidos podrían ser totalmente diferentes en su composición y tienen
funciones complementarias. Se necesitan más investigaciones para aclarar esta cuestión.

(4) El esmalte lípidos en esmalte, investigaciones no histoquímica para visualizar

específicamente iodoplatinate MGA- o teñidos de estructuras en la matriz extracelular, excepto
unos pocos crystallite-like o "cristal Ghost" estructuras ubicadas en el interior formando el
esmalte, cerca del dentino-esmalte junction. Sin embargo, por las técnicas de histoquímica
informó anteriormente, y en el contexto de una lipidosis farmacológica inducida por el uso de la
cloroquina, restos de membrana fueron visualizados en espacios más o menos vacío dejado
por tomos' de los procesos. Normalmente, estos espacios se llena gradualmente por la varilla
de material. Estos restos de membrana, que también se visualizan con El método
filipin/colesterol, pueden tener función biológica(s). Sin embargo, hasta ahora, no sabemos por
qué tales restos de membrana es liberado por ameloblasts secretoras y qué papel podrían
tener. Ellos son ciertamente no involucradas directamente en la biomineralización, porque no
tenemos ninguna evidencia de tales funciones nucleante, incluso mediante microscopia
electrónica de rutina. Aparentemente, no hay metaloproteasas de matriz asociada con estos
restos, Al menos aquellos (MMP-2, -3, -9) que han sido estudiados por nuestro grupo, así como
enamelysin (MMP-20), el cual parece ser específico para el esmalte de la degradación de
proteínas. Muchas otras enzimas, como la fosfatasa alcalina, son candidatos para posibles
funciones en procesos de mineralización. Observaciones inmunohistoquímico reveló que la
MMP-2, -3 y -9 se encuentra en realidad en la formación de la matriz del esmalte, pero no
parece estar asociado con Los restos de membrana. Sin embargo, en algunos lugares, hay
evidencia que apoya la posible relación entre IPstained desintegrando restos de membrana y
esmalte mineralización inicial. Restos de membrana pueden ser degradados por fosfolipasas,
un fenómeno que podría contribuir a la posible liberación de algunos fosfolípidos de estas
membranas. Este material puede ser transferido a la fosfolípido-conteniendo Crystal fantasmas,
estructuras que se detectan en la formación del esmalte, exactamente en los lugares donde se
inicia la mineralización del esmalte. Esta hipótesis aún necesita ser reforzada y espera
argumentos más sólidos que en datos morfológicos por sí solos.

(V) y farmacológica patología inducida genéticamente

para evaluar el posible papel de los lípidos en la mineralización de Tejidos dentales, utilizamos
varios enfoques experimentales. Farmacológicas proporcionar algunos datos interesantes. Las
ratas inyectadas con una sola inyección de suramin desarrollar una mucopolisacaridosis
combinado con una lipidosis. Suramin, un polysulfonated polyanionic naphtylurea con carácter,
utilizado como un anti-trypanosomal droga, está tomada en células por endocitosis, se acumula
en los lisosomas, e inhibe phagosome-lysosome fusión Hart y Young, 1975). Tras la
administración intravenosa, suramin induce una acumulación de GAGs y sphingolipids
(Constantopoulos et al., 1980) debido a la inhibición de muchas enzimas lisosómica. La función
de varias bombas de iones está inhibida (Moriyama y Nelson, 1988). Ultraestructuralmente
ameloblasts secretoras y odontoblastos cargado con los lisosomas. En la dentina, MGA amorfa
manchada Electrón-densas parches que no se había visto en las secciones de control (Figs.
9a, 9b). Estos parches son eliminadas por el tratamiento cloroformo/metanol y, por
consiguiente, se identifican como lípidos. Aunque se encontró una clara relación entre eventos
intracelulares, a saber, que la acumulación de lysosome suramin inducida como estructuras,
concomitantemente con una alteración en la distribución de lípidos en histoquímica dentino-hay
No hay evidencia clara sobre los efectos de suramin y, consecuentemente, de algunos lípidos,
de biomineralización (Gritli et al., 1993). Esto puede ser debido al hecho de que no sólo
inducida suramin mucopolisacaridosis y lipidosis, pero también interfirió con factores de
crecimiento como el factor de crecimiento transformante, factor de crecimiento epidérmico y
factor de crecimiento de fibroblasto-2, bloqueando el enlace a sus respectivos receptores de la
superficie celular (Coffey et al., 1987). Un Abordaje farmacológico más simple se llevó a cabo
para evaluar los efectos de la lipidosis más específicas. Dada la cloroquina durante 6 semanas
en el agua de bebida induce la acumulación de sphingolipids lisosómica. Nuevamente,
odontoblastos, células de la pulpa y las células del órgano del esmalte, pero no secretantes
ameloblasts, fueron cargados con lisosomas que contienen estructuras similares a la mielina.
Dos sorprendentes efectos fueron observados con respecto a Dentinogénesis o amelogénesis:

• En primer lugar, la zona metadentin fue mayor y más densa (Figs. 10a, 10B). Ello evidencia
que alteraciones lipídicas influyen en la zona donde se inicia el proceso de mineralización. Si
metadentin se ensancha, esto sugeriría que el proceso se ha retrasado.

• En segundo lugar, muchos defectos de formación de esmalte fueron vistos en el interrod

dominios, sitio donde crece en la aposición del esmalte recién formado producido (Figs. 11a,
11B). Ya sea la parte central de interrod fue normal y cubiertos por material amorfo, o
aberraciones en la estructura normal fueron vistos, con secuencias discontinuas de normal y
alterada formación de esmalte. Además, la acumulación Los restos de membrana se produjo
dentro de las varillas (Goldberg et al., 1998) (Fig. 12). Desde las enfermedades genéticas
pueden proporcionar algunas ideas sobre los efectos de las alteraciones lipídicas en la
formación y la mineralización de los tejidos dentales, una patología genética, la enfermedad de
Krabbe, fue estudiada (Bloch-Zupan et al., 1994). SEM análisis reveló defectos en el esmalte y
la dentina, incluyendo hipoplasia del esmalte, Inclusiones de proteínas formando haces en
ángulos rectos con la DEJ, e inclusiones de material amorfo en el manto de la dentina de los
dientes deciduos. Con TEM, pulpa de celda se detectaron alteraciones. Además, el
odontoclast-como las células eran extremadamente prominentes, lo que probablemente
contribuyó a la precoz derramamiento de los dientes. La complejidad de la enfermedad, añadió
a la confusión, y existe una clara necesidad de un modelo más simple.

En el Fabry's ratones diseñados por Kulkarni y co-trabajadores (Unidad de Genómica

Funcional, NIDCR, NIH, Bethesda, MD, EUA) (Oshima et al., 1995), a saber, el fosfolípido
(sphingolipid) alteración induce varios defectos estructurales. En esmalte, agujeros minúsculos
que pueden contener tomos' proceso restos fueron vistos en la intersección entre las varillas y
interrod, dando la apariencia de un esmalte prismático plagado (Dunglas et al., 2001). En la
dentina, como fue El caso de tratamiento con cloroquina, metadentin fue sustancialmente
ampliado. Las perturbaciones de la red de colágeno que aún están bajo investigación.

Aunque cada modelo tiene su propia especificidad y complejidad, y puede exhibir una
convergencia de efectos plural, concluimos que los fosfolípidos desempeñan un papel en la
amelogénesis y dentinogénesis. Por el momento, nos han proporcionado evidencia que indica
que los lípidos, es decir, los fosfolípidos, desempeñar un papel en la La formación y la
mineralización de los tejidos dentales. Enfoques farmacológicos experimentales y estudios
sobre enfermedades genéticas, y ahora el uso de ratones transgénicos, apoyan esta hipótesis.
Por lo tanto, los fosfolípidos tienen que ser considerado tan importante como cualquier
molécula o grupo de moléculas pertenecientes a la dentina proteínas no colágenas. Esto
probablemente es cierto también para el esmalte de los componentes de la matriz extracelular,
aunque hay Todavía un debate sobre la naturaleza celular o extracelular de lípidos del esmalte
(Figs. 13a, 13B). Todavía existe la necesidad de investigar más a fondo la naturaleza de las
moléculas implicadas en estos procesos. También es importante para el estudio de la
regulación de los eventos por enzimas involucradas en la síntesis de lípidos, tales como el
ácido graso sintetasa complejos y muchos otros, y de quienes participaron en su degradación,
como fosfolipasas y otras que pudieran Ser menos específico. Las interacciones físico-
químicas entre los proteoglicanos, Colágeno, lípidos, LDL o HDL, y/o otros todavía-tobe
moléculas identificadas en el predentin/dentina compartimentos son dignas de mayor
investigación, como lo son también las interacciones entre proteínas de esmalte y fosfolípidos.