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Grupo: LIPSTOX
LIMA_PERÚ
2019
INFORME N°10: PRUEBA DE IRRITABILIDAD OFTALMICA DE
CHAMPUS POR EL METODO IN VITRO HET-CAM (OECD 405)
I. OBJETIVO:
➢ Determinar el índice de irritabilidad oftálmica de una marca comercial de un
champú por el método HET-CAM.
II. MARCO TEORICO:
Actualmente numerosos laboratorios en el mundo han incorporado el método con
la membrana corioalantoidea del huevo de gallina (HET-CAM, hen´s egg test
chorioallantoic membrane por sus siglas en inglés) para la evaluación de la
irritación ocular producida por cosméticos; debido a su rapidez, simplicidad,
sensibilidad, fácil ejecución y su relativo bajo costo (1)
En el sistema del método HETCAM, se determinan tres reacciones: hemorragia,
lisis y coagulación de la membrana corioalantoidea al noveno día de embrionación
cuando el tejido nervioso y la percepción del dolor aún no se han desarrollado (2)
Los huevos de gallina se incuban en una incubadora durante 9 días después de
cuyo tiempo los huevos defectuosos se descartan. La cáscara alrededor de la
celda de aire se retira y las membranas internas se extraen para revelar la
membrana corioalantoidea. Las sustancias de ensayo se añaden a la membrana
y se dejan en contacto durante 5 minutos. La membrana se examina para evaluar
el daño vascular y se registra el tiempo necesario para que se produzca la lesión.
La irritación se obtiene de acuerdo con la gravedad y la velocidad a la que se
produce el daño. Después de colocar la muestra de ensayo directamente sobre
la CAM, se lleva a cabo una evaluación de los parámetros mencionados
anteriormente durante un periodo de observación de 5 minutos(2).
III. METODOLOGÍA:
3.1. fundamento de la metodología:
El índice de irritación ocular se calculó a partir de la siguiente expresión.
IV. PROCEDIMIENTO
cronometro champú
PIPETAS DE 2 mL
Incubadora
V. CÁLCULOS Y RESULTADOS
Donde:
TH: Tiempo de aparición de hemorragia.
TL: Tiempo de aparición de lisis.
TC: Tiempo de aparición de coagulación
I.I = 10,76999
Hemorragia
I.I = 13,20333
Realizar un orifico por la zona de la cámara de Dejar humedecer por 5 min la capa que cubre
aire, dejando expuesta la membrana la membrana corioalantoidea, retirar la capa
corioalantoidea y agregar 2 mL de suero con una pinza.
fisiológico.
Lisis Hemorragia
Coágulo
Solución jabonosa (jabón NEKO Evaluación del efecto de jabón NEKO para el cuerpo
para cuerpo). en la membrana corioalantoidea.
VI. DISCUSIÓN
A pesar de los esfuerzos realizados en este sentido, todavía quedan lagunas por
resolver y no todos los métodos alternativos validados son útiles para todos los
productos que se evalúan.
VII. CONCLUSIÓN:
IX. BIBLIOGRAFÍA: