UNI-FIP-PQ 317

QUIMICA ANALITICA INSTRUMENTAL

LABORATORIO

LABORATORIO 6

Cromatografía de Gases

1. INTRODUCCIÓN

En general la Cromatografía es una técnica que abarca un conjunto importante y diverso de

métodos, que permite a los científicos separar componentes estrechamente ligados en mezclas
complejas, y que en muchas ocasiones resulta imposible resolver por otros medios. Se basa en las
diferentes interacciones entre un soluto, una fase estacionaria y una fase móvil.

Hay muchos tipos diferentes de cromatografía: De capa fina (TLC), Cromatografía de líquidos de
alta eficacia (HPLC), y de gases (GC). La cromatografía se aplica en muchos campos. Los
bioquímicos utilizan cromatografía líquida para separar proteínas; los químicos utilizan GC, TLC, y
HPLC para identificar compuestos orgánicos. Los científicos forenses y otros especialistas usan la
cromatografía de gases para el análisis de drogas, toxinas y análisis del medio ambiente.

Todos los tipos de cromatografía utilizan los mismos principios que incluyen una fase estacionaria
y una fase móvil. La fase estacionaria es inmóvil en la columna o en la placa y la fase móvil se
desplaza desde un punto inicial a un punto final. Los compuestos viajan desde el principio hasta el
final a una velocidad específica en función de su afinidad que compite por la fase móvil (gaseosa o
líquida) frente a la fase estacionaria sólida. Los compuestos se adhieren a la fase estacionaria a
través de interacciones dipolo-dipolo, fuerzas de dispersión o de interacciones iónicas.
2. PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO DEL MINICROMATÓGRAFO VERNIER

El Mini GC Plus Vernier está diseñado para separar mezclas de gases o líquidos volátiles e
identificar los componentes de las mezclas por su tiempo de retención específico. El cromatógrafo
utiliza aire ambiental suministrado por una bomba para llevar una pequeña muestra de vapor a
través de una columna de acero inoxidable.

La columna es una columna capilar con una fase estacionaria no polar de 11 m y 0,53 mm de
diámetro interno de propósito general de marca Restek (MXT-1).

Fase estacionaria no polar (polidimetilsiloxano)

La columna se calienta usando una corriente eléctrica. La temperatura de la columna se controla

por un detector de temperatura de resistencia incorporado (IDT) para medidas exactas de la
temperatura (la columna trabaja entre 30 °C y 160 °C). El conjunto de columna también tiene un
termistor independiente para proteger contra el sobrecalentamiento.

Al final de la columna está el detector que es un sensor quimiocapacitivo de Seacoast Science. El

sensor es un chip sensor micromecanizado recubierto con un polímero quimioselectivo. El
polímero absorbe los analitos que salen de la columna. La absorción del analito por el
recubrimiento de polímero es medido por el circuito detector.

Una muestra que consta de uno o más compuestos se inyectan en la columna y es arrastrada por
el aire atmosférico, que es la fase móvil. Los compuestos orgánicos que fluyen hacia la salida de
la columna de cromatografía se registran como un pico en un cromatograma, como se muestra en
la figura siguiente. El tiempo que necesita un compuesto específico para salir de la columna (y ser
detectado) después de que se inyecta se llama tiempo de retención, y es un tiempo característico
y único para el compuesto en determinadas condiciones de trabajo. Con un equipo de GC, un
compuesto puede ser identificado a partir de una mezcla de compuestos por medio de su tiempo
de retención.
 Cromatograma de una muestra

Varios factores pueden afectar el tiempo de retención de un compuesto. Por ejemplo: Dados dos
compuestos del mismo grupo funcional, el más volátil (es decir, el compuesto con un punto de
ebullición más bajo) se moverá a través de la columna más rápido debido a que está fluyendo en la
fase móvil más rápidamente. Los grupos funcionales presentes en el compuesto son también un
factor importante. Por ejemplo, los alcoholes pueden interaccionar con una fase estacionaria
polar, por lo que interactúan más fuertemente que los ésteres, porque los alcoholes son capaces
de formar enlaces de puente de hidrógeno, entonces, entre un alcohol y un éster de similares
masas molares, el alcohol demorará más en salir (tiempo de retención mayor). El peso molecular
de un compuesto también puede jugar un papel en pequeña medida, a pesar de que no exista una
relación directa entre la masa molecular y el tiempo que tarda en viajar a través de una columna
de GC.
En este experimento, usted se verá inmerso en el proceso de identificar una o más especies
desconocidas usando la cromatografía de gases. En primer lugar, usted practicará realizando un
cromatograma de gases probando varias sustancias conocidas. Luego usará esta información para
identificar las sustancias presentes en una muestra de mezcla desconocida.

3. MATERIALES
LabQuest o computadora etanol
LabQuest App o Logger Pro acetato de etilo
Vernier Mini GC Metanol
Jeringa de vidrio de 1  L 4-metil-2-pentanona
Papel Tisuue, tejido sin pelusa o papel absorbente Mezcla desconocida

4. EJERCICIOS PRE-EXPERIMENTACIÓN
Complete la tabla de abajo. Esta información es un punto de partida común para la comprensión
del comportamiento de un conjunto de sustancias a ser analizadas por cromatografía de gases,
que se pueden encontrar en una mezcla. Para cada sustancia identificar su familia orgánica:
alcano, alqueno, alcohol, aldehído, éster, éter, cetona, etc.

Compuesto Temperatura de Masa Molar Grupo Funcional

Ebullición (C) (g/mol)
Metanol
Etanol
Acetato de etilo
4-metil-2-pentanona
 5. PROCEDIMIENTO

Parte I: Prueba para compuestos conocidos

1. Obtener una jeringa de vidrio así como un set de viales que contienen las cuatro sustancias
conocidas. Use el metanol para limpiar la aguja de la jeringa.

2. Prepare el Mini GC Vernier para la recolección de datos:

a) Encienda el Mini GC.

b) Conecte el mini GC al puerto USB de su ordenador.
c) Inicie el programa de recolección de datos y a continuación elija Nuevo en el menú Archivo.
d) Para abrir el perfil de Temperatura-Presión, haga click en ⊳Tomar datos .
e) Establezca los valores de Temperatura-Presión a:

Temperatura inicial 35C

Tiempo de mantenimiento 1 min
Rampa de calentamiento 10 C/min
Temperatura final 65C
Tiempo de mantenimiento 6 min
Tiempo de la corrida 10.0 min
Presión 4.0 kPa

f) Seleccione Aceptar para iniciar el Mini GC mientras calienta. Cuando el Mini GC está listo para
la inyección, en el paso 6, aparecerá una ventana con el mensaje: "Inyectar y Recoger al
mismo tiempo", y el LED se iluminará en verde. Continúe con el paso 3 durante el
calentamiento.

3. Siga estos pasos para limpiar y lavar la jeringa con metanol. Importante: La jeringa de vidrio es
frágil, tenga cuidado de no doblar la aguja o doblar el émbolo. Nunca tire del émbolo más de 50%
de su volumen total. Tenga cuidado de no doblar el pistón a medida que lo presiona al momento
de la inyección.
a) Presione el émbolo completamente.
b) Sumergir la punta de la aguja de la jeringa en el vial de metanol.
c) Tire del émbolo para llenar la jeringa aproximadamente con 1/3 de metanol.
d) Expulsar el líquido sobre una toalla de papel.
e) Repita los pasos del a-d, al menos dos veces hasta que se sienta familiarizado con el
proceso de recolección de líquido en la jeringa y la medición del volumen del mismo. Use
una toalla de papel para secar cuidadosamente alrededor de la punta de la aguja de la
jeringa.

4. Siga el proceso en el paso 3 para limpiar y lavar la jeringa con el líquido a analizar.
5. Recolecte cierto volumen del líquido a analizar para la inyección.

a) Sumerja la punta de la aguja dentro del vial del líquido a analizar.

b) Medir 0.10 L de líquido. Es importante que el volumen esté muy cercano a los 0.10 L
y que se inyecte el mismo volumen para cada muestra.
c) Después de recolectar datos, secar suavemente la aguja con papel toalla.

6. Prepárese para la inyección e inicio de recolección de datos:

a) El mini GC debería de haber llegado a la temperatura inicial y

presión adecuada y la luz LED debería estar en verde.
b) Para insertar la aguja de la jeringa en el puerto de inyección,
sostenga la jeringa con una mano y la aguja con la otra como se muestra en la
figura 2. Inserte la aguja en el puerto de inyección, hasta que el tope de la
misma se encuentre bien asentada. Si la aguja sobresale, gire la jeringa
mientras la inserta. No presione el émbolo mientras realiza esta acción.
c) Presione el émbolo y seleccione ⊳Tomar datos, simultáneamente
para iniciar la recolección de datos. Una vez descargado todo el contenido,
retire la jeringa del puerto de inyección.

7. Mientras la recolección de datos se lleva a cabo, repita el paso 3 para

limpiar a fondo la jeringa y la aguja con el siguiente compuesto. Al momento Figura 2
de introducir el compuesto, notará que el desplazamiento del émbolo en la
jeringa se torna más difícil. Puede tardar más de 3 enjuagues sentir el movimiento del émbolo de
la jeringa sin problemas de nuevo, que será nuestro indicador de que se limpió correctamente la
aguja y la jeringa.

8. La recolección de datos terminará después de 10 minutos. Usted puede detener la recolección

antes, si tiene la certeza de que toda la muestra inyectada ha pasado por el detector.

9. Determine el tiempo de retención de su cromatograma:

a) Elija “Integración de picos (peak integration)” en el menú de análisis.
b) Seleccione e integre un pico. Para ello, arrastre desde un punto antes a la izquierda del
pico hasta lo suficientemente a la derecha que incluya toda la cima del pico. Seleccione “Añadir”.
c) Guarde el tiempo de retención mostrado en su tabla de datos.

10. Repita los pasos anteriores con las otras muestras conocidas.

11. Repita los pasos anteriores con la mezcla de concentración conocida, pero en este caso anote
las áreas debajo de cada curva.
Parte II: Prueba para la mezcla desconocida:

1. Repita los pasos anteriores con la muestra desconocida. Determine los tiempos de retención y
las áreas de cada pico. Determine la identidad de las sustancias que componen la mezcla y su
concentración por comparación de áreas.

2. Después de haber completado la prueba de la mezcla desconocida, guarde el archivo para

usarlo en otro momento. Guarde el archivo en una unidad flash USB, ordenador según las
indicaciones del instructor.

3. Apague el Mini GC, mantenga los resultados del experimento abierto en una ventana del
software ya que tendrá que hacer referencia a los diferentes cromatogramas para responder a las
preguntas de análisis de datos.

6. TABLA DE DATOS:

Compuesto Tiempo de Retención

(min)
Metanol
Etanol
Acetato de etilo
4-metil-2-pentanona

Mezcla conocida Tiempo de Retención Área

(min)
Etanol
4-metil-2-pentanona

Mezcla desconocida Tiempo de Retención Área Concentración

(min) calculada

7. TEMAS DE INVESTIGACIÓN

a) Principios de cromatografía
b) Partes de un cromatógrafo
c) Tiempo de retención como criterio de identificación. Factores que influyen.
d) Integración de áreas