ARTICULO

SIEMBRA Y AISLAMIENTO
LABORATORIO MICROBIOLOGIA GENERAL

Cristian Andrés Ledesma – 1193071334 1

Brayan Estibel Plata – 1102726224 2
Jonathan Mejía Gómez – 1099554559 3
Carlos Guaitero Moreno – 1004923964 4
Anders Posso Sánchez – 111681215 5

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Programa de laboratorio de Microbiología general Grupo A
Facultad de Ciencias Agrónomas
Universidad de Pamplona, Kilómetro 1, Vía a Bucaramanga,
Pamplona- Colombia

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RESUMEN
Al igual que los seres humanos, los microorganismos necesitan nutrientes de acuerdo a sus necesidades para realizar
su ciclo de vida, esto debe ser proporcionado por el ambiente en el cual se encuentran, que puede ser denominado
medio de cultivo. En la práctica microbiológica se busca sembrar los microorganismos para estudiar de manera
aislada las características que posean, su desarrollo y capacidad de multiplicación para la formación de colonias, ya
que el aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas. Para esto se han desarrollado
diversos medios de cultivos y técnicas de aislamiento, los cuales se analizarán en el presente informe.

ABSTRACT
Like humans, microorganisms need nutrients according to their needs to carry out their life cycle, this must be
provided by the environment in which they are found, which can be called a culture medium. In microbiological
practice, we seek to sow microorganisms to study in isolation the characteristics they have, their development and
multiplication capacity for the formation of colonies, since the appearance of colonies serves to differentiate different
microbial species. For this, various culture media and isolation techniques have been developed, which will be
analyzed in this report.

PALABRAS CLAVES
 Esterilización
 Agotamiento
 Punción
 Medio de cultivo

KEYWORDS

 sterilization
 autoclave
 Microbiology
 Culture medium

1. INTRODUCCIÓN naturaleza; algunos microorganismos son patógenos,

por esta y muchas razones más, su estudio es de gran
importancia. La supervivencia y crecimiento continuo
Muchos microorganismos no son perjudiciales y
de microorganismos depende de un suministro
juegan un papel muy importante en la biosfera, dicho
adecuado de nutrientes y un ambiente favorable para
papel va desde fijar el nitrógeno para poder ser
su crecimiento. Un medio de cultivo es una solución
absorbido por las plantas hasta descomponer materia
que contiene los nutrientes necesarios para permitir el
orgánica y transformarla para su reabsorción en la
crecimiento de microorganismos, en condiciones
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favorables de pH y temperatura. Los principios
básicos de cualquier medio de cultivo son
principalmente; mantener el crecimiento y
aislamiento de las bacterias presentes en una muestra
para luego poder determinar que bacterias entre las
que se desarrollan tienen más probabilidad de ser
causantes de infección y cuáles son sus posibles
contaminantes o colonizadores, además estos medios
permiten hacer la identificación y caracterización del
desarrollo de bacterias con importancia .El desarrollo
adecuado de los microorganismos en un medio de
cultivo se ve afectado por una serie de factores de
gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos
por completo al propio medio
 Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación
microbiológica ha de contener, como mínimo,
carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales
inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otra sustancia inductora del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de
electrones para las reacciones químicas que tengan
lugar. Todas estas sustancias se suministraban
originalmente en forma de infusiones de carne,
extractos de carne o extractos de levadura.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas
sustancias a los medios es utilizar peptona que,
además, representa una fuente fácilmente asequible
de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los
microorganismos, que no suelen utilizar directamente
las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de
nitrógeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas
específicas por lo que se añade a muchos medios
sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc.
Igualmente pueden ser necesarios ciertos
carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de
naturaleza vitamínica. Muy a menudo se añaden al
medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien
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por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.
 Presencia o ausencia) de oxígeno y otros
gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una
atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas
pueden obtener el oxígeno directamente de variados
sustratos. Pero los microorganismos anaerobios
estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una
atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerófilos
crecen mejor en condiciones atmosféricas
parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy
reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen
un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de
las citadas condiciones.
 Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio
como en la atmósfera, es imprescindible para un buen
desarrollo de las células vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de
estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a
35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua
que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque
el medio
 Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho
mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.
Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.
 pH
La concentración de iones hidrógeno es muy
importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan
mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay
que requieren medios más o menos ácidos. No se
debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en
cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano
pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesos metabólicos normales.

 Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma
óptima a temperaturas entre 15 y43ºC. Otros como
los psicrófilos crecen a0ºC y los temófilos a 80ºC o
incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos).
En líneas generales, los patógenos humanos crecen en
rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor
de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos más amplios.
 Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición de
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o
incluso impedir el crecimiento microbiano normal del
o de los especímenes inoculados en dichos medios. El
sistema clásico para esterilizarlos medios de cultivo
es la autoclave (que utiliza vapor de agua a presión
como agente esterilizante).
La clasificación de los medios de cultivos resulta ser
bastante amplia, ya que su división atiende a
diferentes criterios, los más conocidos se indican a
continuación: Existen 3 tipos de medios de cultivo
según sus cualidades físicas: líquidos, semisólidos y
sólidos. Pues la ventaja fundamental de usar un
medio de cultivo líquido, es que permite que crezcan
bacterias que se encuentran en muy poca cantidad, es
decir, cuya concentración es muy baja en la muestra
que estemos analizando
Para el caso del medio de cultivo sólido, la ventaja
radica en que permite detectar los diferentes tipos de
bacterias que puedan encontrarse en una sola muestra.
Entonces el usar uno u otro medio de cultivo
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dependerá de lo que busquemos o queramos: aislar
una bacteria que se encuentre en cantidades muy
pequeñas (medio líquido) o todas las bacterias que
pueda haber en una muestra (medio sólido)
acuerdo a su utilización pueden ser:
 Medios comunes:
Son aquellos que poseen los componentes mínimos
para que pueda producirse el crecimiento de bacterias
que no necesiten requerimientos especiales. El medio
más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar
común, que resulta de la adición de agar al caldo
nutritivo.
 Medios de Enriquecimiento
Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas
normales, incorporan una serie de factores
indispensables para el crecimiento de
microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se
hace por adición de sangre u otros productos
biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que
aportan dichos factores.
 Medios selectivos:
Son medios utilizados para favorecer el crecimiento
de ciertas bacterias contenidas en una población
polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de
una población microbiana específica. Un ejemplo de
medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para
favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del
resto de enterobacterias
 Medios inhibidores:
Cuando las sustancias añadidas a un medio selectivo
impiden el crecimiento de una población microbiana,
se denomina inhibidor. Los medios inhibidores
podrían considerarse como una variante más
restrictiva de los medios selectivos. Los medios
inhibidores se consiguen habitualmente por adición
desustancias antimicrobianas o de cualquier otra que
inhiba completamente el desarrollo de una población
determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey
que permite el crecimiento de los gérmenes Gram
negativos e impide el crecimiento de los Gram
positivos.
 Medios diferenciales:
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Se utilizan para poner en evidencia características 1.Con un asa redonda, previamente esterilizada
bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o por calentamiento del alambre hasta el rojo
especies. La adición de un azúcar fermentable o un vivo en el mechero de gas, se tomó una muestra
sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El del cultivo de microorganismos.
medio MacConkey es un medio diferencial porque
permite distinguir los gérmenes que fermentan la
lactosa de aquellos que no lo hacen. También lo son el
C.L.E.D. (lactosa+/lactosa hemólisis), el SS (que es
doblemente diferencial). Al igual que los medios de
cultivo, existen diferentes técnicas para aislamiento de
microorganismos, dependiendo del resultado que se
busque, aquí se muestran esencialmente las técnicas
por estrías. El método más usual es la siembra por
estría simple sobre un medio de cultivo sólido
adecuado dispuesta en una placa de Petri.
 Estría Múltiples
2. Luego se extendió sobre un área pequeña de
mediante esta técnica se obtiene colonias aisladas a la superficie de la caja con agar nutritivo, en
partir de una muestra que contenga un elevado número forma de estrías muy juntas, pero sin hacer
de gérmenes presión para no dañar el agar
En la técnica de los Cuatro cuadrantes se divide la
placa en cuatro cuadrantes. Se toma el inoculo y se
siembra consecutivamente en 1–2–3–4. En el cuarto
cuadrante, al menos, obtendríamos colonias aisladas
La técnica por agotamiento es una de las más utilizadas
en el área de la microbiología, ya que permite ver el
desarrollo de colonias de forma aislada en zonas
específicas del medio de cultivo, en este informe se
describe la técnica y los resultados obtenidos mediante
esta

2. MATERIALES
 Cultivos puros de microorganismos
 Cajas de Petri con medios de cultivo
sólidos
 Mecheros de gas 3. Nuevamente se flamea el asa, se enfría y
 Asas redondas y rectas después de rozar la siembra realizada
previamente, se extiende de nuevo por otra
zona de la placa haciendo nuevas estrías. (Este
proceso se repite sucesivamente).
2.1 Procedimiento

Se realizar la siembra bacteriana en los

diferentes medios de cultivo (Agar nutritivo y
Agar EMB), mediante la técnica de siembra
por agotamiento, a partir de cultivos de agua,
de la siguiente manera:

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Medio 2: siembra masiva de bacterias en agar

nutritivo a 37°c

4. Se llevó a Incubar las cajas, en posición Se observa claramente que el cultivo ha terminando su
invertidas, a 27°C durante 24 horas y si se trata fase de adaptacion comenzando a presentarse la etapa
de un hongo se siembra por punción y se lleva exponencial.
a 25° C por 24 horas.

.
5. Tras la incubación, se observaron las colonias
aisladas en alguna región de la caja inoculada

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Resultados:
Los resultados en esta práctica pueden ser observados
mediante la comprobación de los medios de cultivo Medio 3: siembra de bacterias por agotamiento en
demostrando que se presentaron las Condiciones agar nutritivo a 37°c
óptimas de incubación como temperatura, pH, presión,
Como se aprecia se logra obtener colonias separadas a
condiciones atmosféricas (concentración de O2) y un
partir de inóculo.
buen procedimiento por parte de los estudiantes los
cuales siguieron al pie de la letra el procedimiento para
que no se presenten problemas como la contaminación
de la muestra, desinfectando el lugar de trabajo entre
otros…
Para ello se usó el hongo y la bacteria bacilus.
Medio 1: siembra masiva de bacterias en caja petri
agar nutritivo a 37°c
Se logra visualizar el crecimiento de microorganismos
como unas manchas en la caja petri diferenciandose
por su color y textura de medio en que fueron
sembradas.
Medio 4: siembra de hongos por punción en agar
nutritivo a 37°c
se visualiza el aislamiento de colonias de hongos
mostrando la punción central y algunas concéntricas.

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medio numero 5: siembra de bacterias por
picadura en tubo de caldo listeria
se detectan microorganismos a lo largo del canal desde
la parte inferior hasta la superior del tubo.
Discusión de resultados
De la práctica anteriormente realizada, se pudo obtener
los resultados esperados en la mayoría de los cultivos
implantados, ya sea de bacterias como también de los
hongos. Se pudo observar que estos microorganismos
se adaptaron al medio de cultivo y tuvieron un
crecimiento exponencial dentro de este, tal y como lo
podemos observar en la siembra de bacterias Bacilus
7. CONCLUSIONES
En la práctica de laboratorio se puede evidenciar los
diferentes tipos de siembra que se pueden aplicar
dependiendo de los microorganismos y los métodos de
siembra que corresponden a cada uno de estos con el
fin de obtener resultados determinantes en cada
medio, se pudo evidenciar la necesidad de la variedad
de os medios de cultivo debido a que no todos los
organismos se adaptan a un mismo medio y se
desarrollan de forma diferente bajo condiciones
medioambientales diferentes
REFERENCIAS
• Preparación de Medios de Cultivo - Prácticas
de Microbiología. (2019). Retrieved 10 October 2019,
from
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-
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en medios de cultivo de Agar Nutritivo por siembra
masiva y de agotamiento. En ellas se puede evidenciar
claramente como las bacterias se reprodujeron
rápidamente obteniendo así el resultado esperado para
este medio de cultivo.
De igual manera, podemos evidenciar que la siembra
por punción de hongos en el medio de cultivo se dio de
manera exitosa al evidenciar una gran proliferación de
estos en casi todo el medio de cultivo en el cual se
sembró y se pudo denotar que este medio de cultivo
poseía las condiciones óptimas para obtener este
resultado.
También se pudo observar que en la siembra de las
bacterias Bacilus en los tubos que contenían los
medios de cultivos por método de punción, en general,
se obtuvo el resultado esperado el cual consistía en la
adaptación y crecimiento de estas bacterias dentro de
estos medios de cultivos y su denota miento a simple
vista.
Dicho esto, se puede concluir que generalmente se
obtuvo los resultados esperados en esta práctica, ya
que pudo observar el crecimiento y adaptación que las
bacterias y los hongos pueden adquirir en los
diferentes medios de cultivos que se utilizaron en la
anterior práctica.
de-microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-
cultivo
• Tévez, L., Leonor, Torres, & Carola. (2006).
Medios de Cultivo [Ebook] (1st ed., pp. 1-4).
Universidad Nacional del Nordeste.
Cuestionario:
1. ¿cuál es la diferencia entre siembra masiva y
siembra por agotamiento?
la siembra por estría masiva s utilizada usualmente
cuando se requiere una gran cantidad de inoculo por
ende se utiliza esta técnica para aumentar la cantidad
de este, por otra parte, la siembra por agotamiento es

utilizada para el aislamiento de colonias con el
objetivo de obtener colonias separadas a partir de in
inoculo.
2. ¿cuáles son las condiciones que deben tenerse
en cuenta para hacer una siembra?
Nutrientes adecuados disponibles: es indispensable
contar con un medio de cultivo especializado para la
práctica, teniendo en cuenta las necesidades
nutricionales de la bacteria en cuestión que se desea
cultivar como los requerimientos son: una fuente de
carbono, fuentes de nitrógeno, elementos metálicos y
no metálicos, vitaminas, agua y una fuente de energía.
Consistencia del medio: partiendo de un medio líquido
es posible modificar la consistencia añadiendo
productos como la albumina es importante conocer
dicha consistencia para tener en cuenta el método de
siembra que se aplica para cada caso y las herramientas
necesarias para esta labor.
luz ambiental: la mayoría de microorganismos de un
cultivo de bacterias crecen mucho mejor en presencia
de oscuridad que de luz algunas utilizan las fuentes de
luz como un medio en el cual se puede obtener energía.
Temperatura: es importante tener en cuenta el
microorganismo que se desea cultivar debido a que las
bacterias se desarrollan mejora en una temperatura de
26° c y en líneas generales los patógenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho más cortos,
alrededor de 37ºc. al igual que los hongos
Humedad y pH: un mínimo de humedad en medio y
atmosfera es necesario para el desarrollo, así como un
pH neutro.
esterilidad: una de las condiciones más importantes e
indispensables es fundamental recordar que todos los
medios de cultivo han de estar perfectamente estériles
para evitar la aparición de formas de vida que puedan
alterar, enmascara o impedir el crecimiento, así como
las condiciones idóneas del ambiente laboral.
3. describa de manera ordenada los pasos a seguir
para realizar una siembra
Siembra por estría
• prender el mechero de bunsen
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• destapar la caja de Petri cerca del mechero
• tomar el asa y flamear hasta que se ponga al
rojo vivo, dejar enfriar y tomar la muestra con la unta
del asa
• ya con a muestra estriar aproximadamente ¼ de
la superficie total del agar, las estrías deben ser varias
y muy juntas
• si se realiza siembra masiva no es necesario
flamear el asa nuevamente
• flamear el asa nuevamente
• jalar estrías de la primera parte y proceder con
el estriado a un lado esta vez ya sin tocar las primeras
estrías, las estrías deben ser menos y estar más
separadas.
• Proceder con el estriado de la siguiente parte
sin flamear el asa, las estrías deben ser menos y estar
más separadas que la segunda vez.
• Estriar la última parte del agar, teniendo en
cuenta que deben estar las separadas y en menor
cantidad.
• Tapar la caja de Petri y escribir los datos
necesarios (nombre del microorganismo, nombre del
medio, dilución de la muestra, nombre del grupo y
fecha)
Siembra de hongos
• se enciende el mechero de bunsen
• se destapa la caja
• se flama el asa de punción al rojo vivo
• se toma la muestra y se procede a insertarla en
la caja de Petri sin tocar el fondo de esta, ubicando una
punción en el centro y otras 4 en los puntos cardinales.
• Se tapa la caja de Petri y se marca con los datos
necesarios (nombre del hongo, nombre del medio,
dilución de la muestra, nombre del grupo y fecha)
Siembra en tubos
• se enciende el mechero de bunsen
• se destapa el tubo
• se flama el asa de punción al rojo vivo
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• se toma la muestra y se procede a insertarla en anaerobios. Explique cómo se observa el crecimiento

el sin tocar el fondo de esta aproximadamente más de
la mitad sin tocar las paredes
• Se tapa el tubo y se marca con los datos
necesarios (nombre del hongo, nombre del medio,
dilución de la muestra, nombre del grupo y fecha)
4. ¿en qué agar se realizó la siembra y cuál es su
composición?
Microorganismos
Agar nutritivo: contiene extracto de carne, peptona y
agar
de cada uno de estos en el caldo de tioglicolato.
Aerobios estrictos: presenta un mayor desarrollo de los
microorganismos en la parte superior del agar o el
medio de cultivo es decir la zona con mayor presencia
de O2 en el medio.
Anaerobios estrictos: presenta un crecimiento en la
parte más baja del tubo siendo esta la que menor
contenido de oxígeno tiene.
Anaerobios facultativos: su desarrollo se es uniforme
a lo largo del agar con una mayor presencia en la
superficie, esto debido a que se desarrollan más rápido
en un medio con presencia de O2

Caldo nutritivo: contiene extracto acuoso de carne

adicionado de peptona al 1% y cloruro de sodio al
0.5%
Tioglicolato: hidrocloruro de hemina, vitamina k y
sangre o suero.
5. ¿Qué es un inoculo?

Término colectivo para referirse a los

microorganismos o sus partes (esporas, fragmentos
miceliales, etc.) capaces de provocar infección o
simbiosis cuando se transfieren a un huésped. El
término también se usa para referirse a los organismos
simbióticos o patógenos transferidos por cultivo.
6. Según los requerimientos de O2 ¿Cómo se
clasifican los organismos? Explique cada una de estas
clases
Según su requerimiento de O2 los organismos pueden
clasificarse en tres tipos
• Aerobios estrictos: organismos que dependen
del oxígeno, pero que no pueden sobrevivir a altas
concentraciones de este.
• Anaerobios estrictos: organismos que no
pueden sobrevivir o desarrollarse en presencia de
oxígeno.
• Anaerobios facultativos: organismos que
pueden desarrollarse y sobrevivir tanto en ausencia
como en presencia de oxígeno.
7. El medio de tioglicolato permite el crecimiento
de microorganismos aerobios, facultativos y
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