Marco teórico

Una medida de prevención de enfermedades transmitidas por el agua corresponde al

mantenimiento de la calidad microbiológica del agua de consumo humano. De hecho, la
contaminación microbiológica es, en la mayoría de los casos, el factor que limita la consecución de
una buena calidad de las aguas de consumo humano. Los aspectos legales del riesgo sanitario
asociado al tratamiento de agua de consumo humano se basan en la calidad del agua fijada por el
ministerio de salud en la resolución 12186 de 1991 del 20 de septiembre de 1991 y la resolución
2115 de 22 de junio de 2007 del ministerio de la protección social ministerio de ambiente, vivienda
y desarrollo territorial.

Dichas regulaciones establecen los límites de contaminación microbiana permitidos en aguas

tratadas y aguas embotelladas. La presencia de microrganismos en la fuente de agua de consumo
humano que pueden significar un riesgo para la salud humana; dentro de estos se encuentran las
especies bacterianas cuyo origen fecal es conocido, en especial los del grupo de los coliformes.
Debido a que existen en gran número en el intestino humano y sobreviven más tiempo en el agua
que otros organismos patógenos (Garza 2019) .

Las bacterias coliformes forman parte del medio ambiente, en la tierra, la vegetación, así también
como en los intestinos de los mamíferos. Las bacterias coliformes no son susceptibles a causar
enfermedades, pero su presencia indica que el suministro de agua puede ser vulnerable a la
contaminación por microorganismos más dañinos (Pullés 2014) .

Este grupo de organismos pertenecen a la familia Enterobacteriacea, y se caracterizan por ser

bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, no esporulados, fermentadores de lactosa a 35 °C
con producción de gas y ácido láctico de 24 a 48 h de incubación y pueden presentar actividad de la
enzima β-galactosidasa. Constituyen aproximadamente el 10 % de los microorganismos intestinales
de los seres humanos y otros animales .

Escherichia coli (E. coli) es el único miembro del grupo de coliformes totales que se encuentra sólo
en los intestinos de mamíferos, incluyendo seres humanos. La presencia de E. coli en el agua indica
contaminación fecal reciente y la posible presencia de patógenos causantes de enfermedades, tales
como bacterias, virus y parásitos. Aunque la mayoría de las cepas de bacterias E. coli son inofensivas,
algunas cepas, tales como E. coli 0157: H7 (Office of the Chief Medical Officer of Health. Government
of New Brunswick, 2016), pueden causar enfermedades graves.

De esta manera el factor biológico más importante para garantizar la pureza del agua es llevar un
control microbiológico adecuado que permita establecer los parámetros aceptados para
considerarse como producto inocuo; estos parámetros deberán permitir validar el estado del
producto asumiendo que el agua de marcas comerciales que se distribuye está libre de
microorganismos patógenos, pues en ocasiones pueden no estar de acuerdo a las normas
nacionales establecidas para su control de calidad, como se menciona en éste y otros estudios; por
ejemplo, el realizado con mil muestras en 103 marcas diferentes de aguas purificadas llevado a cabo
por la “Natural Resources Defense Council of United States (NRDC)” en 1999 que encontró que los
niveles de patógenos superaba al de la norma vigente.
Microorganismos indicadores de calidad de agua.

Los coliformes totales son las Enterobacteriaceae lactosa-positivas y constituyen un grupo de

bacterias que se definen más por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios
taxonómicos. Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para
fermentar la lactosa con producción de ácido y gas, más o menos rápidamente, en un periodo de 48
horas y con una temperatura de incubación comprendida entre 30-37ºC. Son bacilos gramnegativos,
aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Del grupo <<coliforme>> forman parte varios
géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. Se encuentran en el intestino del
hombre y de los animales, pero también en otros ambientes: agua, suelo, plantas, cáscara de huevo,
etc.

Una elevada proporción de los coliformes que existen en los sistemas de distribución no se debe a
un fallo en el tratamiento en la planta, sino a un recrecimiento de las bacterias en las conducciones.
Dado que es dificil distinguir entre recrecimiento de coliformes y nuevas contaminaciones, se
admite que todas las apariciones de coliformes son nuevas contaminaciones, mientras no se
demuestre lo contrario.

E. coli: Escherichia coli: Bacilo gram negativo, capaz de desarrollarse en presencia de sales biliares u
otros agentes (tensoactivos) que tengan propiedades similares e inhibitorias del crecimiento y que
son capaces de fermentar la lactosa a temperaturas de 35°C +/- 2°C, con producción de ácido, gas y
aldehído en un lapso de 18 a 48 horas. Oxidasa negativa, no esporógena y reduce el nitrato a nitrito.
También es capaz de producir indol a partir de triptofano a una temperatura de 44°c +-05 en un
tiempo de 21+/- 3 horas. Poseen la enzima B-glucoronidasa, la cual es detectada por medios
cromógenos o fluorógenos.

Los métodos de laboratorio para determinar la carga microbiana

Se usa el recuento de bacterias mesofílicas y coliformes totales en placa y sin embargo dada la
sensibilidad del método de NMP para el grupo coliforme, ya que detecta como mínimo 1 bacteria
por mililitro es la más empleada la cual se lleva a cabo en tres etapas: prueba presuntiva,
confirmativa y completa. La aplicación más ventajosa de la cuenta de mesofílicos aerobios es para
evaluar la eficiencia de un proceso de tratamiento de agua, cuando esta se ha manejado
correctamente durante su procesamiento y envasado, se ha almacenado en empaques o tanques
limpios y protegidos contra contaminaciones; el recuento de estas arroja cantidades muy bajas
generalmente menos de 50 UFC/ml. Por otro lado, la estimación de organismos coliformes fecales
permite evaluar los riesgos de contaminación fecal reciente en el agua. El agua para beber no debe
contener bacterias coliformes en un número que haga pensar en la contaminación con aguas
residuales de origen fecal (Garza 2019) .

Sin embargo, la filtración por membrana utilizada en nuestra practica de laboratorio presenta
ventajas como alto poder de reproductividad y la posibilidad de examinar grandes volúmenes de
muestra. En este mecanismo se atrapan en la superficie de la membrana microorganismos cuyo
tamaño es mayor que el tamaño del poro 0.45 um, esto gracias a que una bomba eléctrica ejerce
una presión diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Las bacterias quedan en la
superficie de la membrana y luego está es llevada a un medio de enriquecimiento selectivo, que
para esta práctica utilizamos el medio de cultivo Chromocult el cual promueve el crecimiento y la
identificación. El medio original recomendado por la nueva ISO 9308-1 (2014) agar para coliformes
Chromocult, es un medio de cultivo cromógeno diferencial para el análisis microbiológico de
muestras de agua. En un plazo de 24 horas este medio permite la detección, la diferenciación y la
enumeración simultáneas de E. coli y bacterias coliformes del agua potable (Carrillo y Lozano 2008).

Coloración de Gram

La Tinción de Gram es una técnica que permite observar las bacterias. Las bacterias son
microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser humano. En muchos casos
forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro entorno sin ocasionar ningún peligro para la
salud. En otras situaciones, las bacterias pueden ser patógenas, es decir, producen infecciones de
diversos tipos: cutáneas, abdominales, óseas, etc (Pastor et al. 2015) .

Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes clasificaciones atienden
a diversos criterios y características bacterianas: morfología, metabolismo, presencia de pared
celular, etc. Una de las maneras de diferenciar a las bacterias es en base a la presencia de una pared
celular. Así, hay bacterias con una pared gruesa (formada por peptidoglicanos) y otras con una pared
mucho más delgada.

La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una técnica muy sencilla
que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una gran utilidad en medicina. La tinción
de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para observarlas mejor bajo el
microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen
de una forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram
negativas. Están formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y
una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen
incoloras (Fernández-Santisteban 2017).

Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran número de
capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta intenso al
microscopio y se clasifican como Gram +. La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que
permite determinar el tipo de antibiótico, así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser
capaz de atravesar la pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se
seleccionará el antibiótico más eficaz. En el caso de las bacterias gram positivas los complejos
insolubles se quedan atrapados entre las capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin
disolver y dando la coloración morada característica al observarlas al microscopio. En cambio, en las
bacterias gram negativas estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al microscopio se
verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si se ha añadido la fucsina al final de la técnica
de tinción de Gram (Fernández-Santisteban 2017).

Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el Staphylococcus, el Streptococcus
y el enterococo. Ejemplos de bacterias gram negativas son la Escherichia coli y la Pseudomona
aeuruginosa. Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la muestra, el
protocolo de tinción y además el hecho de que algunas bacterias no presentan pared celular (Carrillo
y Lozano 2008).
Referencias

Carrillo, E.M., y A.M. Lozano. 2008. «VALIDACIÓN DEL MÉTODO DE DETECCIÓN DE COLIFORMES
TOTALES Y FECALES EN AGUA POTABLE UTILIZANDO AGAR CHROMOCULT». : 97.

Fernández-Santisteban, María Teresa. 2017. «Determinación de coliformes totales y fecales en

aguas de uso tecnológico para las centrífugas». : 5.

Garza, Jesús M. 2019. «Evaluación de la calidad microbiológica de cuatro diferentes marcas de

agua embotellada comercializadas en el estado de Nuevo León». : 15.

Pastor, Alejandra, Patricia Varela, Virginia Bianchi, y Patricia Durando. 2015. «CALIDAD
BACTERIOLÓGICA DEL AGUA DEL RÍO SAN JUAN EN ZONAS ALEDAÑAS A LA
DESEMBOCADURA DEL ARROYO LOS TAPONES (SAN JUAN, ARGENTINA)». Natura
Neotropicalis 1(46): 7-24.

Pullés, Marlen Robert. 2014. «Microorganismos indicadores de la calidad del agua potable en
cuba». 45: 13.