Genética

Ingeniería genética y biotecnología

Tema 6 de Biología NS
Diploma BI
Curso 2013-2015
 Introducción
 Desde siempre, los humanos han intentado mejorar la producción de un
alimento, tanto por la calidad como por la cantidad. Por ello, se han
seleccionado razas o variedades de distintas especies.

 Estos individuos se han

cruzado de forma inducida
con el fin obtener buenos
resultados. La selección y
el cruzamiento de estos
individuos ha consistido
realmente en la selección y
combinación de
informaciones genéticas.
 Biotecnología
 Concepto: Conjunto de procesos industriales que utilizan microrganismos o
células procedentes de animales o vegetales para la obtención de productos
de interés.

 Aunque el término Biotecnología

es moderno, desde tiempos
inmemoriales se usan seres
vivos para lograr productos a
partir de una materia prima. Un
ejemplo de estos usos es la
obtención de cerveza a partir de
cereales utilizando levaduras
desde antes del año 6.000 a.C.

 Con la aplicación de la Biotecnología no sólo se persigue la obtención de

alimentos elaborados. También se consiguen medicamentos, mejora de
especies vegetales y animales, regeneración de medio ambiente dañado
e, incluso, proteínas humanas que ayudan a paliar enfermedades como
anemia, enanismo o diabetes. La consecución de estos logros se debe a la
aparición de las técnicas de ingeniería genética.
 Ingeniería Genética
 La Genética molecular ha sido la pieza central de los estudios de Biología
desde que James Watson y Francis Crick dieron a conocer la estructura del
ADN en 1953.

Video1
 A partir de 1970 se desarrolla un conjunto de técnicas que se denomina
ingeniería genética y que consiste en manipular y transferir el ADN de
un organismo a otro, obteniendo con ello una nueva variedad biológica con
nuevas características, o bien la corrección de defectos genéticos.
 Ingeniería Genética
 Entre las muchas y diversas técnicas que conforman la ingeniería
genética, se encuentran:

- Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR).

- Electroforesis de ADN en geles de agarosa.

- Electroforesis de proteínas en geles de acrilamida.

- Transferencia de genes mediante plásmidos y enzimas de restricción.

 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
 La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de
ingeniería genética desarrollada por Kary Mullis (Premio Nobel en 1993) y
consistente en la obtención de múltiples copias de una secuencia de
ADN concreta.

 Si recogemos una pequeña muestra de ADN, podemos usar la PCR para

amplificarla, ya que utiliza la enzima ADN polimerasa para hacer más copias
del ADN molde.
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
 La PCR consta de un ciclo de
tres fases: calentamiento,
enfriamiento y replicación:

1. Elevando la temperatura a 94ºC,

se desnaturaliza el ADN mediante
la rotura de los puentes de
hidrógeno.
2. Disminuyendo la temperatura a
54ºC, se promueve que se unan
(hibriden) primers/cebadores al
comienzo y final de la sección de
ADN que se quiere amplificar.
3. Elevando la temperatura a 72ºC,
las cadenas de ADN se mantienen
desnaturalizadas de manera que la
ADN polimerasa añade nucleótidos
complementarios amplificando la
secuencia del ADN específico.
Animación1
 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
Este ciclo es repetido más de 35 veces
5 3
Target

sequence para producir suficiente ADN para ser
Genomic DNA 3 5
usado en el laboratorio, ya que el ADN
Denaturation:
Heat briefly
5 3 es amplificado de forma exponencial.
to separate DNA
strands  La ADN polimerasa utilizada debe ser
3 5
termoestable, por lo que se usa la
enzima de la bacteria Thermus
Annealing:
Cool to allow
Cycle 1 primers to form
yields
2
hydrogen bonds
with ends of
Primers aqueaticus (taq polimerasa).
molecules target sequence

Extension:
DNA polymerase
adds nucleotides to
the 3 end of each New
primer nucleo-
tides
Web Sumanasinc

Cycle 2
yields
4
molecules
 La PCR se suele usar para amplificar
Cycle 3 una pequeña muestra de ADN
encontrada en el escenario de un crimen
yields 8
molecules;

para ser usado como evidencia en

2 molecules
(in white boxes)

perfiles de ADN.
match target
sequence
 Electroforesis de ADN
 La electroforesis en gel de agarosa es una técnica comúnmente usada en
biología molecular para separar los fragmentos que componen una mezcla de
ADN, que dependiendo de su tamaño, tendrán distinta velocidad de
desplazamiento en un campo eléctrico.
Mixture Longer
of DNA molecules
Cathode molecules
of differ-
ent sizes

Shorter
Power
molecules
source Gel

Glass
plates

Anode

 El gel conduce la electricidad, por lo

que los fragmentos de ADN, al
poseer carga negativa, se desplazan
en el gel hacia el electrodo positivo,
con mayor velocidad cuanto menor
sea su tamaño.
 Electroforesis de ADN

Las enzimas de
Se toma muestra de ADN La PCR amplifica el restricción cortan el
ADN para tener una ADN en fragmentos
cantidad suficiente de distinta longitud
En el primer pocillo se
carga un patrón de
pesos moleculares para
determinar el tamaño de
nuestros fragmentos.
Se añade al gel una
sustancia que produzca
fluorescencia bajo luz
UV, y permita identificar
los fragmentos.
Se emplea en técnicas de
análisis de ADN, como
buscar un número de bandas
compartidas (paternidad) o Las muestras son cargadas en pocillos
el total de coincidencias al comienzo del gel.
(evidencia crimen).
Web DNA Learning Centre
 Análisis de ADN
 En las regiones cromosómicas
intergénicas, especialmente cerca de
los centrómeros, existen
repeticiones polimórficas siempre
en parejas, es decir, una en cada
cromosoma homólogo.
 En el locus de un polimorfismo, se
localiza un número diferente
repeticiones de una misma secuencia
de nucleótidos.

 Estas repeticiones pueden ser regiones variables

de 9-80 nucleótidos repetidas en tándem
(VNTRs) o bien pequeñas repeticiones en
tándem de 2-8 nucleótidos (SNTs).
 Cada persona hereda el patrón de VNTRs y
SNTRs de sus padres, en un cromosoma
materno y otro paterno.
 Análisis de ADN
 La huella de ADN (DNA fingerprint) hace uso de estas variaciones o
polimorfismos consistentes en secuencias repetidas de ADN.
 La probabilidad de que 2 personas que no son genéticamente idénticas
tengan la misma huella de ADN es extremadamente improbable.
 Los marcadores polimórficos usados en la huella de ADN tienen muchos
alelos diferentes con cientos o miles de genotipos.
 Análisis de ADN Heavy
Fragmentos
DNA + enzimas de restricción Nitrocellulose weight
de restricción I II III
paper (blot)

Gel

Sponge
I Alelo II Alelo III Heterocigoto Paper
Alkaline towels
normal mutado solution
gen X gen X
Preparación de fragmentos de restricción. Gel electroforesis. Blotting.

Animación2

La sonda se une
mediante puentes de I II III
Sonda marcada hidrógeno a los fragmentos
radioactivamente I II III que contienen el gen X
para el gen X
se añade al Fragmento del
filtro de nylon Película
alelo mutante Revelada
del
Fragmento del paper blot
Paper blot alelo normal

Hibridación con sonda radioactiva. Autoradiografía.

 Análisis de ADN en evidencias criminales
 La electroforesis en gel de ADN se emplea en técnicas de
análisis del ADN, como el análisis forense, donde se usa la
huella de ADN obtenida a partir de tejidos o fluidos corporales.
 Análisis de ADN en evidencias criminales
1. Obtención de la huella de ADN o huella genética.

Web pbs-NOVA
 Análisis de ADN en evidencias criminales
2. Comparación de las huellas de ADN con la evidencia inculpatoria.
 Análisis de ADN en evidencias criminales
 ¿Qué sospechoso es el culpable de la violación?

 Debajo se comparan dos muestras de sangre

encontradas en un crimen con el ADN de la
victima y los sospechosos. ¿A quiénes
pertenecen?

Web dnai.org
 Análisis de ADN en pruebas de paternidad
 La electroforesis en gel de ADN también se emplea en pruebas de paternidad.

 Esta cuatro imágenes son

secciones del mismo gel
de electroforesis.
 El fragmento 1 es el mayor
(próximo al inicio). El
fragmento 15 es el menor.

 ¿Comparte el hombre
suficientes bandas con el
bebé como para ser
considerado su padre?

 El perfil de ADN es
mejor demostrando la
inocencia que la
culpabilidad.
 Análisis de ADN en pruebas de paternidad
 Para los siguientes niños A-F, indica cuál de ellos es fruto de ambos padres
(padre y madre).

 ¿Son los padres biológicos?

Análisis de ADN en exámenes del BI
Análisis de ADN en exámenes del BI-Mayo 2010
 Análisis de ADN y TdC
 Hay toda una serie de implicaciones sociales motivadas por los análisis de
ADN, como:
- Problemas de identidad de un hijo que descubre de improviso quién es su padre
biológico;

- Problemas de autoestima de quien descubre que no es padre de los que creía

sus hijos;

- Problemas en la relación de pareja si él

descubre que no fue quien engendró un
hijo;

- Alivio que supone para las víctimas de

delitos el hecho de que los delincuentes
sean identificados y condenados, en
algunos casos varias décadas después de
haberse perpetrado el delito.

 También es discutible la dificultad de evaluar la probabilidad de que dos

individuos tengan el mismo perfil, así como la admisión de un análisis de ADN
como prueba contundente en algunos casos judiciales famosos de los últimos
años. Web dnai.org
 Proyecto Genoma Humano
 Dicho proyecto, comenzado en 1990, constituyó un gran esfuerzo de
colaboración internacional que consiguió secuenciar completamente el genoma
humano en abril de 2003. Aparte de la cooperación internacional y la
información compartida, el PGH alcanzó resultados muy valiosos para la
Ciencia:
- Determinación del número de genes
(sólo 30 000) de nuestro genoma.
- Ubicación (loci) de genes específicos,
lo que ha permitido realizar investigación
dirigida para el diagnóstico, tratamiento y
farmacología.
- Descubrimiento de nuevas proteínas
y sus funciones.
- Comparación entre genes de
diferentes especies para obtener más
información acerca de la historia evolutiva.
- Nacimiento de la bioinformática:
Aplicación de tecnología informática en la
gestión y análisis de datos biológicos.
Web genome
 Proyecto Genoma Humano: Número de genes
 El PGH ha permitido conocer el número total de genes humanos, muy
inferior al que se pensaba en un primer momento, concretamente unos 30 000
genes.

 El genoma humano presenta

una densidad de genes muy
inferior a la que inicialmente se
había predicho, con sólo en
torno al 1,5% de su longitud
compuesta por exones
codificantes de proteínas.

 Del total de ADN extragénico,

aproximadamente un 70%
corresponde a repeticiones
dispersas, de manera que, más
o menos, la mitad del genoma
humano corresponde a
secuencias repetitivas de ADN.
 Proyecto Genoma Humano: Locus de los genes
 El PGH ha permitido conocer la localización de los genes humanos.

Web ncbi
Proyecto Genoma Humano: Diagnóstico médico
 El PGH ha impulsado la investigación médica y farmacéutica,
ayudándonos a ver las causas reales de las enfermedades.
 En un primer momento, se creyó que muchas
enfermedades, como el cáncer de pulmón, la
obesidad y discapacidad de aprendizaje, tenían
un origen genético.

 Al descifrar el genoma humano y localizar los

genes que fallan en el caso de muchas de
estas enfermedades, podemos conocer quien
posee un mayor riego bajo ciertas condiciones.

 ¿Cuáles son las implicaciones morales, éticas y

legales de este conocimiento? (TdC)

Web elmundo.es
 Proyecto Genoma Humano: Nuevas proteínas
 El PGH ha permitido conocer nuevas proteínas y sus funciones, algo
absolutamente necesario, ya que es lo que diferencia a dos tipos celulares de
una misma especie/individuo.
 Muchas proteínas una vez sintetizadas son
modificadas por la unión de otras
moléculas, tales como fosfatos, acilos,
azucares, lípidos, etc., moléculas que se
unen de forma estable y pueden modificar
radicalmente la actividad biológica de la
proteína.
 Entonces, si consideramos las
modificaciones post-transcripcionales
(edición de ARN) y post-traduccionales
(fosforilación, glicosilación, adenilación,
unión a lípidos, etc.) vemos que se pueden
originar proteínas de actividad biológica
muy diversa partiendo de un mismo gen.
Proyecto Genoma Humano: Relaciones evolutivas
 Investigaciones recientes indican que existen evidencias
genómicas que muestran que el cromosoma 2 humano
es en realidad una fusión de dos cromosomas
ancestrales, explicando por qué el otro gran simio tiene
24 pares de cromosomas, pero nosotros solo 23.

 Varias son las evidencias:

- Los cromosomas análogos (2p y 2q) en los grandes

simios no humanos, al acoplarse muestran un idéntico
patrón de bandeo que el cromosoma humano 2.
- Las secuencias teloméricas (extremos) de estos
cromosomas se localizan en el medio del cromosoma
humano 2 donde los cromosomas ancestrales se han
fusionado.

- El centrómero del cromosoma humano 2 se alinea con

el centrómero del cromosoma 2p del chimpancé.

Video2
 Proyecto Genoma Humano: Bioinformática
 El PGH le ha dado un grandísimo impulso a la bioinformática
(Genómica), al dar una visión completa del genoma.
 Escaneando un set completo de marcadores
genéticos, se puede completar la
investigación y diagnosis mucho más
rápidamente: Chip de ADN.

 Un chip de ADN (del inglés DNA microarray)

es una superficie sólida a la cual se une una
colección de fragmentos de ADN.

 Se usan para analizar la expresión diferencial

de genes, monitorizándose los niveles de
miles de ellos de forma simultánea. Su
funcionamiento consiste en medir el nivel de
hibridación entre la sonda específica y la
molécula diana, indicándose generalmente
mediante fluorescencia y analizándose por
análisis de imagen, lo cual nos indicará el
nivel de expresión del gen.
 Proyecto Genoma Humano: Bioinformática
 Suelen utilizarse para identificar genes con una expresión diferente bajo
condiciones distintas. Por ejemplo, para detectar genes que producen ciertas
enfermedades mediante la comparación de los niveles de expresión entre
células sanas y células que están desarrollando ciertos tipos de enfermedades.

Video3
 Transferencia de genes entre especies
 Cuando se transfieren genes entre distintas especies, la secuencia de
aminoácidos de los polipéptidos traducida a partir de dichos genes no varia
dado que el código genético es universal.
 Todos los seres vivos, salvo alguna
excepción, poseen el mismo código
genético, posibilitando que la
secuencia de bases (gen) pueda ser
transferida de un organismo a otro
sin que cambie su función.
 Por tanto, podríamos coger el gen
de la insulina de un humano e
insertarlo en un plásmido
bacteriano, de manera que la
bacteria pudiera ahora producir
insulina humana.
 Transferencia de genes entre especies
 En las técnicas de transferencia génica, se identifica en un organismo el gen
que codifica para una característica favorable y es transferido a otro
organismo.

 La transferencia de genes entre especies, puede usarse en:

- Farmacología; para producir grandes

volúmenes de una proteína deseada, como la
insulina o factores de coagulación.

- Agricultura; para modificar genéticamente

(adquiriendo características favorables),
organismos de interés agrícola como el arroz
dorado rico en nutrientes.

Video4
 Transferencia de genes entre especies
 La transferencia de genes implica los siguientes elementos:
- Un plásmido.
- Enzima de restricción.

- Enzima ADN ligasa.

- Célula hospedadora.
 Pasos en la transferencia de genes
Step 1. Extraer un plásmido bacteriano (o comprarlo comerciales) que posea un
gen de resistencia a un antibiótico.

Animación3

Step 2. Cortar dicho plásmido con una enzima de restricción (endonucleasas)

que reconoce unas secuencias específicas en el ADN.
 Endonucleasas de restricción
 Las enzimas o endonucleasas de restricción son aquellas que pueden
reconocer una secuencia concreta de entre 4 y 12 nucleótidos dentro de una
molécula de ADN y cortarlo en ese punto determinado, llamado sitio de
restricción.
 El mecanismo de corte de ADN se
realiza a través de la ruptura de dos
enlaces fosfodiéster en la doble
hebra, lo que da lugar a dos extremos
de ADN. Estos pueden ser romos
(cuando los enlaces rotos coinciden)
o cohesivos, que tienen tendencia a
volver a unirse de modo espontáneo.

Animación4
 Pasos en la transferencia de genes
Step 3. El gen de interés es cortado con la misma enzima de restricción,
generando extremos cohesivos, por lo que puede ser insertado en el plásmido
mediante la enzima ADN ligasa. Si el gen de interés es eucariota, como la
insulina, posee intrones, por lo que a partir de su ARNm aislado, se produce
ADNc mediante la enzima transcriptasa inversa, que posteriormente en forma
de doble cadena se inserta en el plásmido.
 Pasos en la transferencia de genes
Step 4. El plásmido con el gen de la insulina es introducido por transformación
en la bacteria (el hospedador). Para seleccionar los transformantes, se cultivan
en medio con antibiótico, de manera que solo las bacterias que hayan
incorporado el plásmido, sobrevivirán.
 Pasos en la transferencia de genes
Step 5. Las bacterias transformantes seleccionadas se cultivan en grandes
tanques de cultivo con el medio apropiado. Comienzan a dividirse, poseyendo
cada una de ellas el plásmido con el gen de interés (clonación) y a producir
insulina, la cual puede ser purificada.

Animación5
 Cultivos genéticamente modificados
 Cultivos de arroz transgénico (Golden rice) enriquecido en betacaroteno,
que puede convertirse en vitamina A en el organismo y prevenir la ceguera.
 Plantas de tomate transgénico con tolerancia a una mayor salinidad.
 Cultivos de maíz transgénico resistente a hongos de manera que los
agricultores no pierdan sus cosechas, o de remolacha azucarera tolerante
al herbicida glifosato.
 Animales genéticamente modificados
 Producción del factor de coagulación IX en la leche de ovejas
transgénicas, que es extraido y purificado para el tratamiento de
hemofílicos.
 Aspectos éticos de la modificación genética
 La idea de producir organismos genéticamente modificados es duramente
debatida y está muy dividida. Los beneficios potenciales de la ingeniería
genética son grandes, aunque debemos querer aceptar la responsabilidad de
sus riesgos y posibles consecuencias.
 Veamos un ejemplo concreto, el de un cultivo de
maíz genéticamente modificado para ser
resistente a la plaga de la oruga del taladro del
maíz. Esta oruga se distribuye por el tallo y hojas
del maíz, dañando los haces vasculares e
interrumpiendo el transporte de agua y nutrientes
a lo largo de la planta.
 El maíz Bt contiene un gen de la bacteria Bacillus
thuringiensis que produce una proteína tóxica
para la oruga del taladro.
 Aspectos éticos de la modificación genética
 Beneficios del uso del maíz Bt:
- Se reduce el daño causado por la plaga.
- Se reduce el uso de plaguicidas, ahorrando dinero.
- Un menor uso de plaguicidas, implica un menor impacto sobre el
medioambiente.
- Menor necesidad de revisiones periódicas para detectar signos de la plaga.

 Riesgos del uso del maíz Bt:

- Eliminará a otros insectos, alterando las redes tróficas de los ecosistemas.
- Los insectos pueden desarrollar resistencia a la toxina Bt, al estar
continuamente expuesta a ella, con las consiguientes consecuencias que
ello conlleva.
- Posibilidad de polinización cruzada, propagando el gen de producción de la
toxina Bt a otros cultivos o plantas silvestres.
 Clones
 Definición de clon: Grupo de organismos genéticamente idénticos o grupo
de células obtenidas a partir de una única célula progenitora.

 Incluye a los gemelos monocigóticos e individuos generados por reproducción

asexual.

 Y claro, el más comúnmente entendido significado del término clon es el

producto de la transferencia de un núcleo diferenciado.
 Clones usando células animales diferenciadas
 En 1996 nacía en el Instituto Roslin, en Escocia, una
oveja con el nombre de Dolly. Era el primer clon
cuyo material genético no procedía de un óvulo
fecundado.
 Se realizó utilizando una técnica conocida como:
Transferencia Nuclear Celular Somática
(SCNT), donde se extrae el núcleo de un óvulo
donado, y se le transfiere el núcleo de una célula del
organismo que se quiere clonar.
Video 5

 Utilizando sustancias químicas o una

descarga eléctrica suave, el óvulo se
verá forzado a dividirse; creando de
esta manera un nuevo embrión.
Posteriormente, este embrión será
transferido al útero del organismo
huésped.
Técnica de clonación usando células animales diferenciadas
(3)

(4)

(8)
(6)

(7)
(5)

(2)

(1)
 Tipos de clonación
 Existen dos tipos de clonación bien diferenciadas que se encuentran
reguladas por leyes distintas: clonación terapéutica y clonación reproductiva.
Tipos de clonación

 La clonación terapéutica es
llevada a cabo para cosechar
células madre embrionarias
que deberán ser utilizadas en
tratamientos médicos. Las
mismas puede ser usadas
para producir una gran
cantidad de diferentes células,
entre las que se incluyen
tejidos, músculos, etc.
 Tipos de clonación

Animación6

 La clonación reproductiva es llevada a cabo con la intención expresa

de crear otro organismo. Este organismo pasará a ser el duplicado
exacto de uno que ya existe o de uno que ha existido en el pasado. La
clonación de plantas o de animales, como la oveja Dolly entra en la
clasificación de clonación reproductiva.
 Aspectos eticos de la clonación terapéutica
 Por tanto, la clonación terapéutica consiste en la creación de un embrión
para proveer una línea de células madre genéticamente idénticas al paciente,
las cuales serán reprogramadas para producir el tipo de tejido deseado.

 Es legal en algunos países, como en España. Deben distinguirse las cuestiones

sobre clonación reproductiva de las cuestiones sobre clonación terapéutica.
Algunos grupos se oponen con vehemencia a ambos tipos de clonación.

 Posibles beneficios:  Argumentos en contra:

- Oportunidad de tener hijos - Objeciones religiosas a “jugar a ser Dios”

libres de una enfermedad mediante la creación de lo que muchos
genética. consideran vidas humanas.

- Riesgo reducido de rechazo a - Recomendaciones de la ONU contra la

trasplantes.
- No hay necesidad de esperar a
que un donante muera para dar
los órganos.
clonación reproductiva no ratificada por todos
los países (riesgo de clonación humana).
- La clonación humana podría facilitar la
creación de una raza superior.

- Existen éxitos en la clonación - Las técnicas son experimentales y no

terapéutica que la avalan. fiables, con el resultado de embriones y
bebés muertos.
Uso terapéutico de células madre y TdC
 La investigación con células madre
plantea problemas éticos.

 El uso de células madre embrionarias

implica la muerte del embrión en estadio
temprano, pero si se desarrolla la
clonación terapéutica con éxito se podría
aliviar el sufrimiento de los pacientes que
sufren distintas afecciones.
Uso de células madre iPS
 Usando cuatro genes, se ha conseguido
“reprogramar” células diferenciadas de un
individuo adulto y volver a su estado de célula
madre, restaurando su capacidad de división,
convirtiéndose en células madre
pluripotenciales inducidas (iPS).
 Con la utilización de este tipo de células madre
inducidas, puede reducirse la necesidad de
células madre embrionarias.

Video6