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AÑO DE LA LUCHA CONTRA LA CORRUPCIÓN E IMPUNIDAD”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS

E.A.P BIOTECNOLOGÍA

ÁREA:

Microbiología General

TEMA:

ACTIVIDADES BIOQUIMICAS DE LOS MICROORGANISMOS METABOLISMO

DOCENTE:

Blgo. Mblgo. Villanueva Carlos José Manuel

INTEGRANTES:

- Aguilar Algarate Angela


- Carranza Condeso Braulio
- Cotrina Alvitres Andersson
- Mogollón Aguirre Velit
- Orué Estrada Anabel
- Portilla Castillo Angie
- Ramos Muro Nicol
- Sanchez Ylquimiche Jhohan
- Valerio Barroso Sayur

2019
PRACTICA N°6

ACTIVIDADES BIOQUÍMICAS DE LOS MICROORGANISMOS. METABOLISMO

GENERAL

I. INTRODUCCION
Las bacterias se encuentran en casi todos los ambientes e intervienen en varios
procesos biológicos. El crecimiento microbiano requiere la formación de estructuras
complejas como proteínas, ácidos nucleicos, polisacáridos y lípidos a partir de
elementos preformados en el medio de crecimiento o ser sintetizados por la propia
célula, a su vez, este crecimiento necesita de una fuente de energía para ser llevado
a efecto, todo este proceso se designa con el nombre de metabolismo, que se define
como todas las transformaciones químicas que ocurren en una célula (Díaz &
Rodríguez Pérez, 2001).
Cuando este va dirigido a la síntesis de macromoléculas se le nombra biosíntesis o
anabolismo, el cual requiere de un aporte de energía que proviene del metabolismo
degradativo o catabolismo; la forma química usual en que se encuentra la energía es
el adenosín-trifosfato (ATP), el cual es generado por diversos mecanismos como la
fotosín-tesis y a partir de compuestos inorgánicos y orgánicos. Estos elementos
constitutivos o macromoléculas tienen su génesis en unos pocos precursores
denominados metabolitos focales: glucosa-6-fosfato, fosfoenolpiruvato, oxalacetato
y α-cetoglutarato, estos se interrelacionan y originan compuestos intermediarios:
fosfatos de azúcares, piruvato, acetil CoA, aspartato, glutamato, etc.; y productos
terminales como: aminoácidos, bases pirimidínicas, polisacáridos, lípidos, entre
otros. La formación de una macromolécula se produce por los siguientes
mecanismos:
1. Dirigidos por una plantilla: ADN y proteínas. a) ADN: sirve como modelo para
la autorreplicación y formación de los ARN (mensajero, ribosomal y de
transferencia). b) Proteínas: el ARNm sirve de modelo para la síntesis de proteínas.
2. Dirigidos por enzimas: lípidos y carbohidratos. Estos elementos se
autoensamblan y originan diversas estructuras celulares como: ribosomas, pared
celular, flagelos, membranas, etcétera. Es necesario que todo el proceso anterior
(biosíntesis) sea regulado en su velocidad y actividad de las vías para que resulte
equilibrado. El metabolismo es un complejo proceso donde pueden utilizarse
diversas vías o rutas para asimilarse un compuesto simple y una sola de ellas puede
poseer varios mecanismos de control (Díaz & Rodríguez Pérez, 2001).
II. OBJETIVOS
Demostrar e interpretar la acción degradativa de un microorganismo sobre un
determinado sustrato contenido en un medio de cultivo específico.

III. MATERIALES
3.1. MATERIAL BIOLÓGICO
Cutivos puros bacterianos de:
Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Proteus vulgaris,
Staphylococcus aureus.
Placas de petri con agar almidón
Tubos de ensayo con Caldo glucosa rojo de fenol incluida una campana de
Durham.
Tubos de ensayo con agar gelatina
Tubos de ensayo con caldo urea
Placas de petri con agar tributirina

3.2. MATERIAL DE LABORATORIO


Asa bacteriológica calibrada
Asa bacteriológica en punta
Mechero de alcohol.

IV. PROCEDIMIENTO
4.1. DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN

Dividir una placa de agar almidón en tres sectores.

Con el asa bacteriológica en punta previamente esterilizada por flameado coger


la muestra del cultivo puro bacteriano 1.

Sembrar en el centro de uno de los sectores por PUNTURA.

Sembrar los cultivos puro bacteriano 2 y 4 en los otros sectores


respectivamente.

Rotular e incubar a 37°C por 24 horas.

Leer la hidrólisis del almidón cubriendo la superficie de la placa con solución de


lugol.
FERMENTACIÓN DE LA GLUCOSA

Sembrar por SUSPENSION el cultivo puro bacteriano 1 en un tubo con CALDO

GLUCOSADO.

Sembrar de la misma forma anteriormente descrita los cultivos puros bacterianos


2 y 4.

Incubar a 37°C por 24 Horas..

Observa los tubos en cuanto al cambio de color y formación de gas.

4.2. DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS NITROGENADAS

LICUEFACCIÓN DE LA GELATINA

Sembrar por PICADURA PROFUNDA en tubos con agar gelatina los cultivos
puros bacterianos 2 y 3 respectivamente.

Incubar por a 37°C entre 24 a 48 horas.

Transcurrido el tiempo de incubación colocar ambos tubos en refrigeración por 2


horas. observar la licuefacción de la gelatina en cada uno de los tubos.

HIDRÓLISIS DE LA UREA

Sembrar por SUSPENSION en tubos con caldo urea inclinado los cultivos puros

Bacterianos 2, 3 y 4.

Incubar a 37°C por 24 hrs.

Observar la formación o no de un color rojo cereza.

4.3. DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS LIPIDICAS

HIDRÓLISIS DE LÍPIDOS

Dividir una placa de agar Tributirina en tres sectores.

Con el asa bacteriológica en punta previamente esterilizada por flameado coger


la muestra del cultivo puro bacteriano 2.

Sembrar en el centro de uno de los sectores por PUNTURA.

Sembrar los cultivos puro bacteriano 3 y 5 en los otros sectores


respectivamente.
Rotular e incubar a 37°C por 24 horas.

Leer la hidrólisis de la tributirina.

V. DISCUSIONES
Según Alfred Jorgensen-fermentación Industrial:
Los polisacáridos, como el almidón son demasiados largos para ser transportados al
interior de la célula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan esos
polímeros hasta oligosacáridos o monosacáridos que puedan usarse como sustratos
para crecer. Las colonias de bacterias que atacaron el almidón están rodeadas por
una zona incolora que fue obtenido en el laboratorio.
Ambos resultados están relacionados. En la hidrolisis de almidón, se inacularon con
la placa con agar y almidón al microorganismo, estios fueron escherichia coli,
bacilus subtilis y proteus vulgaris; la observación fue que el bacilius subtilis fue
resistente al colorante y pudo hidrolizar al almidón formándose un halo transparente
alrededor del almidón, la solución de lugol se le agrega para observar la reacción de
los microorganismos tienen para producir una enzima que hidrolice al almidón.

La urea es un compuesto orgánico nitrogenado que se transforma por algunos


microorganismos del suelo, los cuales producen la enzima ureasa. Como resultado
de esta actividad microbiana el nitrógeno es liberado al suelo en forma inorgánica.
Cuando esta reacción ocurre en medio de cultivo se alcaliniza y el indicador permite
percibir visualmente el cambio en acidez del medio. En la prueba del hidrolisis de
urea utilizaremos tres cultivos puros: escherichia coli, proteus vulgaris y
pseudonomas fluorescentes con urea y rojo fenol como indicador. La liberación de
amonio eleva el pH, intenso color rojo lo cual solo se observó en la muestra.

La gelatina es una proteina que se obtiene por hidrolisis parcial del coalgeno y
proporciona un sustrato util para determianr la acción de la enzimas proteolíticas
de los microorganismos. La hidrolisis de la proteina es importante porque se
obtienen aminoacidos y producen amoníaco, fosfatos utiles para el suelo. En la
licuación de gelatina, se inacularon dos tubos de microorganismos escherichia
coli, y pseudonomas fluorescentes, el tubo que contenía la siembra E. coli no
hidrolizo, el gel se mantuvo gelificado. El que contenía la siembra de Pseudomonas
fluorescentes, si hidrolizo, dio positivo, la licuefacción se dio a la perfección.
VI. CONCLUSIONES
 Concluimos esta práctica habiendo cumplido nuestro objetivo, en su desarrollo,
se demostró la acción degradativa de un microorganismo en un medio de cultivo
específico, para ello utilizamos la degradación en carbohidratos, sustancias
nitrogenadas y lipídicas.
 En la hidrólisis de lípidos se observó la presencia de un halo (zona clara) eso
quiere decir que sí se degradó la tributirina dando positivo la muestra.
 En la degradación para sustancias lipídicas pasó lo mismo, el resultado final dio
positivo visualizando un color grosella o fucsia.
 Se evidenció el desarrollo de diferentes microorganismos en diferentes
sustratos.
 Los microorganismos pueden degradar a casi todo tipo de sustancias orgánicas
o inorgánicas, también en su manera de actuar y bajo qué condiciones estrictas
(aerobias, anaerobias, etc.).
 Se llegó a entender cómo actúan los mecanismos de estos microorganismos que
se valen de enzimas para degradar el sustrato presente en el exterior para así poder
absorberlos y realizar sus distintas vías metabólicas necesarias para su supervivencia.

VII. ANEXOS

CUESTIONARIO:

1. ¿Qué importancia tiene la acción degradativa de un determinado sustrato


por parte de un determinado microorganismo?
Las bacterias actúan sobre las proteínas, glúcidos y lípidos (moléculas voluminosas)
para convertirlas en fragmentos más pequeños y así puedan penetrar a través de
membrana citoplasmática, mediante la participación de ex enzimas.

2. Mencioné cual es la razón de añadir indicadores ácido base algunos medios


de cultivos. Ejemplos.
El ácido reacciona con la glucosa mayor concentración de glucosa en un medio de
cultivo se verán con mayor facilidad los resultados. El escherichia coli tiene la
capacidad para crecer en un medio simple definido pues su capacidad para crecer en
un medio simple definido significa que es capaz de sintetizar todos los componentes
celulares a partir de una única fuente de carbono, en este caso la glucosa.
Ejemplos

 Medio definido para escherichia coli (glucosa 4-10gr).


 Medio definido para leuconostoc mesenteroides (glucosa 25gr).
 Medio de cultivos para escherichia coli y leuconostoc mesenteroides
(glucosa 15gr).

3. Mencioné las diferentes formas de siembras realizadas en cada uno de los


procedimientos y en que se diferencian.

4. Describa los fundamentos de cada uno de los resultados obtenidos en cada


procedimiento por medio de un cuadro sinóptico o mapa conceptual.

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN:


Los polisacáridos, como el almidón son demasiado largos para ser transportados
al interior de la célula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan
esos polímeros hasta oligosacáridos o monosacáridos que pueden usarse como
sustratos para crecer.
FERMENTACION DE LA GLUCOSA:

Las bacterias o anaeróbicas facultivas a menudo fermentan carbohidratos a ácidos


orgánicos y gas .estos puedes detectarse incluyendo en el medio un indicador de ph y
una campana Durham.Se pueden ensayar diferentes azucares como sustrato para
diferenciar especies sobre todo bacterias entéricas.

LICUEFACCION DE LA GELATINA:

La mayoría de los polímeros son demasiado grandes para ser transportados


dentro de las células. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que
hidrolizan esos polímeros transportando al interior de la célula en monómeros
que les sirven para crecer.

HIDROLISIS DE LA UREA:

Este enzima hidroliza la urea y origina amonio lo que producirá un


incremento de pH que puede detectarse con un indicador.

La bacterias se inoculan en un medio con glucosa-peptona y urea al 2%.


Como indicador de pH se utiliza rojo fenol.

HIDROLISIS DE LIPIDOS:

En la hidrolisis de lípidos (en este caso tributaria), se debe a la rotura


de los enlaces esteres que unen los ácidos grasos a alcoholes como la
glicerina o glicerol. Esto gracias a la segregación de una enzima
llamada lipasa.
VIII. BIBLIOGRAFIA

 Manual de Prácticas de Microbiología Básica y Microbiología de Alimentos. Luis


Roberto Alarcon.Pagina 36-37
 Microbiología Clínica Práctica. Pedro Gracia Martos , Fernando Paredes Salido, María
Teresa Fernández del Barrio. Pagina 117

 (s.f.). Obtenido de
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/aura/Principios_Metabolismo_microbiano.pd
f

 Díaz, R. d., & Rodríguez Pérez, C. M. (enero de 2001). Metabolismo Microbiano. En A. L.


Hernández, M. M.-D. Vivanco, & J. L. Silva, Microbiología y Parasitología Médicas (págs.
37-44). Ciudad de La Habana: Ciencias Médicas. Obtenido de ResearchGate:
https://www.researchgate.net/publication/288670427_Metabolismo_microbiano