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TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

CAMPUS TUXTLA GUTIÉRREZ 21 de mayo 2019


INGENIERÍA BIOQUÍMICA
6. “A”
PRÁCTICA No 04: “EFECTO DE LOS FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL CRECIMIENTO
MICROBIANO”

CADÓ-GONZÁLEZ, SILVIO1, FONSECA-PÉREZ, JORGE DE JESÚS1*, FIGUEROA-DÍAZ,


AMAYRANI1, HERNÁNDEZ -MARTÍNEZ, KAREN MAGDALENA1, TORRES-TRINIDAD, VICTORIA
ANAHÍ1.
Instituto Tecnológico de Tuxtla Gutiérrez. Laboratorio de Microbiología. Carr.
Panamericana km. 1080, CP 29050, Tuxtla Gutiérrez, Chiapas, C.P. 29050, México.
*Correo electrónico: jorgefonseca10@outlook.es

RESUMEN
Las actividades de los microorganismos se ven muy afectadas por las condiciones
químicas y físicas del medio. En este estudio se analizó el efecto que tienen los
factores físicos: temperatura, pH y concentración de NaCl sobre sobre el
crecimiento de las cepas de E. coli y S. aureus, inoculadas en diferentes tubos en el
medio de caldo nutritivo. Así mismo, se evalúo el efecto de los factores químicos
que inhiben el crecimiento bacteriano y que son parte de la composición de
algunos productos que se usan comúnmente en el hogar o en la industria (cloro,
jabón,enjuague bucal, agua oxigenada, antibióticos,etc.) con la finalidad de
identificar el efecto biocida o biostático de estos agentes sobre el desarrollo
microbiano de las cepas antes mencionadas, inoculadas en cajas con agar
nutritivo.

INTRODUCCIÓN

Las actividades de los microorganismos se ven muy afectadas por las


condiciones químicas y físicas del medio. El conocimiento de los efectos
ambientales nos permite explicar la distribución de los microorganismos en la
naturaleza y hace posible diseñar métodos que controlen o potencien las
actividades microbianas. A este respecto se pueden considerar muchos
factores ambientales, pero hay cuatro factores que tienen una
función destacada en el control del crecimiento microbiano: la temperatura, el
pH, la disponibilidad de agua y el oxígeno. Los microorganismos pueden ser
eliminados, inhibidos o muertos por agentes físicos, procesos físicos o agentes
químicos. Es unos de los factores físicos ambientales más importantes, que
influyen en el crecimiento.
Un agente físico es una condición física o propiedad física que causa un
cambio. La temperatura, la presión y la radiación son ejemplos de agentes
físicos que actúan sobre los microorganismos. Los filtros los retienen. Mediante
los procesos físicos se causan cambios en los microorganismos, por ejemplo, la
esterilización y la incineración que los conducen a la muerte. En la higienización,
por ejemplo, el lavado, los desprende de los materiales. La temperatura es uno
de los factores físicos ambientales más importantes, que influyen en el
crecimiento y afecta la sobrevivencia de los microorganismos en dos formas.
Primero, si aumentamos la temperatura, las reacciones químicas y enzimáticas en
la célula se realizan más rápidamente y por lo tanto el crecimiento es más rápido.

Segundo, tanto las proteínas como los ácidos nucleicos y otros componentes
celulares son sensibles a altas temperaturas y pueden ser irreversiblemente
inactivos.

Generalmente al aumentar la temperatura dentro un límite dado, el crecimiento y


las funciones metabólicas aumentan hasta un punto en que se inactivan y
entonces las funciones cesan.
Cada organismo tiene sus temperaturas cardinales que se refieren a la mínima,
óptima y máxima a la cual crecen. La temperatura optima generalmente está más
cerca de la máxima que de la mínima.

En base a lo anterior, los microorganismos se clasifican de acuerdo a su


temperatura optima de crecimiento en: psicrófilos, mesófilos y termófilos.

Un agente químico es una sustancia (sólido, líquido o gas) que se caracteriza por
una composición molecular definida y que causa una reacción en los
microorganismos, por ejemplo, los compuestos fenólicos, los alcoholes, el cloro, el
yodo y el óxido de etileno. Dependiendo de la concentración y del tiempo de
exposición, los daña o los mata. El pH y la salinidad, son factores químicos que
afectan el crecimiento de los microorganismos.

Cada microorganismo tiene un intervalo de pH, dentro del cual el crecimiento es


posible, generalmente hay un pH optimo bien definido.
La mayoría de ambientes naturales tienen valores de pH entre 5 y 9, pocas especies
pueden crecer en pH menores de 2 o mayor de 10.
De acuerdo a su pH óptimo de crecimiento los microorganismos se clasifican
en: Acidófilos, neutrófilos y alcalófilos.

Todos los organismos requieren de agua para vivir, la adición de un soluto en un


medio puede influir en la disponibilidad de agua para los microorganismos. Así,
podemos tener organismos que requieren de altas concentraciones de sales para
desarrollar llamados halófilos y los que pueden crecer en altas concentraciones de
sales pero que no las requieren necesariamente, llamados halófilos facultativos.

Otros organismos son capaces de desarrollarse en altas concentraciones de azúcar


y se les llama sacarofílicos.
A los halofílicos y sacarolíticos se les puede considerar tipos de microorganismos no
habituales comprendidos dentro de los organismos osmofílicos.

OBJETIVO
Determinar la sensibilidad microbiana a diferentes agentes físicos y químicos,
evaluando su crecimiento.

METODOLOGÍA

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
FACTORES NIVEL DE CARACTERÍSTICAS DE CRECIMIENTO
FÍSICOS/CEPAS CRECIMIENTO
TIEMPO 24 horas TURBIDEZ PELÍCULA SEDIMIENTO
4 +  - 
28 ++   
°C 37 ++   
42 +   -
55 +   
2 +  - 
pH 5 +  - -
7 ++   
9 ++   
1 ++  - 
4 ++ - - 
% NaCl 7 + - - 
10 - - - -
15 - - - -
FORMACIÓN DE HALOS DE INHIBICIÓN
No. DE CAJA Agentes Sustancia activa del Cepa Cepa
químicos compuesto E. coli S. aureus
evaluados
Cloro Hipoclorito de sodio 0.7 cm Todo el
cuadrante
Benzal Cloruro de benzalconio 1.4 cm Todo el
cuadrante
1 Pinol Formol, NaOH y Lauril Sulfato No hubo 2.5 cm
(Desinfectantes) de Sodio. inhibición
Gel Alcohol etílico,triclosán No hubo No hubo
antibacterial inhibición inhibición
Alcohol Alcohol Etílico (70% v/v) No hubo 0.7 cm
Desnaturalizado inhibición
2 Merthiolate Cloruro de benzalconio 2 cm Todo el
Antisépticos/ Desinfectantes cuadrante
Agua Oxigenada Peróxido de Hidrógeno No hubo No hubo
inhibición inhibición
3 Microdacyn Ácido hipocloroso, Cloro libre No hubo No hubo
Antisépticos (0.085%), inhibición inhibición
Violeta de Violeta de metilo 1 cm 1.2 cm
Genciana
Antibiótico Clindamicina No hubo Todo el
inhibición cuadrante
4 Isodine Yodopovidona 1.4 cm Todo el
Otros (antiséptico) cuadrante
Microdyn Plata ionizada al 0.35% 0.8 cm 2 cm
(Desinfectante)
Jabón de trastes Alquil sulfato de 0.8 cm 2.3 cm
sodio(tensoactivo),óxido de
5 amina
Antibacterianos/Detergentes Jabón para Lauril éter sulfato de sodio, No hubo 0.7 cm
manos NaCl inhibición
Enjuague bucal Triclosán,etanol,clorohexidina 1.6 cm 3.3 cm

En el cuadro 02 se muestran los resultados obtenidos a las 48 horas de inoculación de las


cepas E. coli y S. aureus , se expresan los valores del díametro de formación de los halos
inhibitorios.
En la Caja 1 (A y B) se evaluó el efecto de los
desinfectantes: Cloro,Benzal y Pinol. En la
Figura --- se muestran la inhibición provocada
por cada agente, en las cepas de E. coli y S.
aureus respectivamente.
El cloro comercial evaluado (Cloralex); tiene
Hipoclorito de Sodio como sustancia activa; es
un halógeno que actúa como un agente oxidante que atraviesa la membrana plasmática
oxidando las enzimas que contengan grupos sulfihidrilo (-SH). Producen ácido hipocloroso
y, luego, oxígeno atómico. El resultado es la oxidación de materiales celulares y la
destrucción de bacterias vegetativas y hongos, aunque no de esporas. (FUENTE)
El Benzal es un desinfectante, tensioactivo, bactericida e inhibidor de la actividad viral. La
sustancia activa es el Cloruro de Benzalconio. Su acción se ha atribuido a la inactivación de
las enzimas productoras de energía, desnaturalización de las proteínas celulares esenciales
y la ruptura de la membrana celular.
El “Pinol” comercial es un limpiador multiusos que actúa como desinfectante debido a las
sustancias activas que posee (Formol, NaOH y Lauril Sulfato de Sodio.). Principalmente el
formol o formaldehído es un aldehído que inactiva proteínas por la formación de enlaces
covalentes con grupos funcionales (-NH2, -OH, -COOH y –SH), actuando como agente
biocida. A su vez, el Lauril sulfato de sodio es un surfactante que actúa como agente
catiónico al desnaturalizar proteínas, causar inhibición de enzimas y destrucción de la
membrana citoplasmática.
En la evaluación de estos 3 productos, se obtuvieron halos de inhibición más pequeños en
la cepa E. coli con respecto a los halos de inhibición formados en las cajas inoculadas con la
cepa S. aureus comparando al efecto del Cloro y Benzal. En cuanto al efecto de “Pinol” esté
solo actuó inhibiendo a S. aureus.

En la Caja 2 (C, D) se evaluó el efecto de


productos que actúan como antisépticos y
desinfectantes: gel antibacterial, alcohol y
Merthiolate. En la Figura se muestra el
efecto de dichos productos, en la cepa E.
coli y S aureus, respectivamente.
El gel antibacterial es un producto
antiséptico empleado para detener la propagación de gérmenes (germicida). Los dos
alcoholes germicidas más comunes usados para su elaboración son el etanol y el
isopropanol, empleados normalmente en una concentración del 70 a 80 %. Actúan
desnaturalizando las proteínas y, quizás, disolviendo los lípidos de membrana. Sin embargo,
no fue posible observar efecto inhibitorio en ninguna de las dos cepas bacterianas.
El alcohol se encuentran entre los desinfectantes y antisépticos más utilizados. Son
bactericidas y fungicidas, pero no esporicidas; destruyen también algunos virus con
envoltura lipídica. Actúan desnaturalizando proteínas y disolviendo lípidos de
membrana. Tiene uso antiséptico y desinfectante, a concentraciones de 95° y 60 °. La acción
germicida sólo fue visible en la cepa S. aureus.

El Merthiolate es un antiséptico, desinfectante auxiliar en heridas superficiales de la piel;


tiene como principio activo al cloruro de benzalconio, el cual es un surfactante que
desnaturaliza a las proteínas y destruye la membrana citoplasmática. De los tres
antisépticos este producto fue el más efectivo en la inhibición de las dos cepas bacterianas,
aunque el efecto fue mayor sobre la cepa S. aureus; prácticamente inhibiendo todo el
cuadrante.

En la Caja 3 (E,F) se evaluó el efecto de


productos que actúan como antisépticos:
agua oxigenada, Microdacyn y Violeta de
Genciana. En la Figura se muestra el
efecto de dichos productos, en la cepa E.
coli y S aureus, respectivamente.
El agua oxigenada es un poderoso
oxidante. La descomposición catalítica del agua oxigenada hace que se utilice como
desinfectante, pues el oxígeno formado es el que oxida y mata a los microorganismos. Los
iones peróxido y superperóxidos que se producen como subproducto del metabolismo son
indeseables por lo oxidantes y reactivos que son, generadores de radicales libres y
causantes, por tanto, de graves daños en las células. Las cepas estudiadas en esta práctica
presentaron resistencia al efecto de este producto.
El Microdacyn tiene como sustancia a dos halógenos (Cloro y ácido hipocloroso). Los
halógenos destruyen los microorganismos al oxidar los constituyentes celulares y formar
compuestos de yodo con las proteínas celulares. En concentraciones elevadas, puede
incluso destruir algunas esporas. No se presentó ningún halo de inhibición en ninguna de
las cepas.
La violeta de genciana es un colorante biológico con actividad antiséptica. Es
bacteriostático (inhibe el crecimiento) y bactericida (destruye las bacterias) contra muchos
microorganismos, incluyendo algunos hongos, que causan enfermedades en la piel y las
membranas mucosas. El principio activo es el colorante violeta de metilo, que actúa en una
combinación específica con ácidos nucleicos principalmente, desnaturalizando las proteínas
de los microorganismos. Este fue el único antiséptico con efecto; inhibiendo el crecimiento
de ambas cepas bacterianas.
En la Caja 4 (G y H) se evaluó el efecto de
diferentes productos de uso común,
(Isodine y Microdyn), así como el efecto
del antibiótico Clindamicina. En la Figura
--- se muestran la inhibición provocada
por cada agente, en las cepas de E. coli y
S. aureus respectivamente.
La clindamicina se usa para tratar ciertos tipos de infecciones bacterianas, incluyendo
infecciones de los pulmones, la piel, la sangre, etc. La clindamicina pertenece a una clase de
medicamentos llamados antibióticos de lincomicina. Su acción consiste en retardar o
detener el crecimiento de las bacterias Su acción es predominantemente bacteriostática,
aunque a dosis elevadas puede ser bactericida. Inhibe la síntesis de proteínas uniéndose a
las subunidades 50S de los ribosomas bacterianos y evitando la formación de uniones
peptídicas.
Según la literatura (FUENTE) la clindamicina tiene efecto activo frente a los
microorganismos aerobios Gram positivos: S. aureus y S. epidermidis, estreptococos
neumococos; Bacillus anthracis, etc. Tal como fue observado en la práctica, la cepa S.
aureus se inhibió ante tal antibiótico.
La mayor parte de las bacterias aerobias Gram-negativas, incluyendo las enterobacterias,
son resistentes a clindamicina. Los hongos, levaduras y virus son también resistentes a
clindamicina. Debido a ello E. coli que es una bacteria miembro de la familia de las
enterobacterias no presentó inhibición ante tal antibiótico.
El Isodine tiene como sustancia activa a la yodopovidona que es un yodóforo, complejo
inestable de yodo elemental unido a sustancia tensoactiva como la polivinilpirrolidona. La
cantidad de yodo es baja, pero es liberada cuando la solución es diluida. Los yodóforos
retienen la actividad del yodo, el cual tiene un espectro muy amplio de actividad germicida,
ya que actúa contra una gran variedad de bacterias, hongos, virus, protozoarios y esporas.
La mayor parte de estos microorganismos no desarrolla resistencia al yodo. La
yodopovidona tiene el mismo espectro de actividad que el yodo elemental. Su acción
germicida se atribuye a que el ion yodo liberado forma compuestos irreversibles con el
nitrógeno amínico y heterocíclico, oxida grupos sulfhidrilos y satura dobles ligaduras y
residuos tirosínicos de los microorganismos susceptibles. El yodo al ser un halógeno
destruye los microorganismos al oxidar los constituyentes celulares y formar compuestos
de yodo con las proteínas celulares. En la práctica, ambas cepas presentaron halos de
inhibición, aunque su efecto fue más notable con S. aureus.
El microdyn es un producto comercial utilizado como desinfectante de alimentos. La
sustancia activa presente en este producto es plata ionizada al 0.35%. Los cationes de plata
(Ag+ ) son compuestos efectivos usados como agentes antimicrobianos. Para ser eficaces,
los iones de plata deben interaccionar con el microorganismo y penetrar en él. La plata se
introduce en el interior de la célula a través de unos transportadores de metales presentes
en su membrana; en la permeabilidad gaseosa de la membrana (respiración celular) y una
vez en el interior de la célula, alteran su sistema enzimático, inhibiendo su metabolismo y
producción de energía y modificando su material genético. El resultado es que el
microorganismo pierde rápidamente toda capacidad de crecer y reproducirse. De esta
manera se evita el desarrollo de microorganismos patógenos como 'Salmonella',
'Legionella', 'Escherichia coli' y 'Staphylococcus aureus', entre otros. Tal como lo registrado
en la bibliografía (FUENTE) ambas cepas presentaron halos de inhibición.

En la Caja 5 (I y J) se evaluó el efecto de


diferentes detergentes de uso común,
(jabón para trastes y jabón para manos),
así como el efecto del enjuague bucal de la
marca Listerine. En la Figura --- se
muestran la inhibición provocada por cada
agente, en las cepas de E. coli y S. aureus
respectivamente.
El jabón para trastes tiene como principio activo al alquil sulfato de sodio(tensoactivo) y al
óxido de amina. El alquil sulfato de sodio forma parte del grupo de los fenoles, que actúa
como desinfectante y bactericida al dañar la integridad estructural de la membrana
citoplasmática (es decir, la disposición ordenada de lípidos y proteínas), de modo que
intervienen en su función, ejerciendo interferencia en los procesos de transporte y
metabolismo energético. Su acción fue efectiva en ambas cepas microbianas.
El jabón para manos forma parte del grupo de los detergentes. Los detergentes [latín
deterger, limpiar] son moléculas orgánicas que actúan como agentes humectantes y
emulsionantes porque poseen tanto extremos hidrófilos polares como hidrófobos no
polares. La sustancia activa lauril éter sulfato de sodio es un surfactante, que hace al jabón
de manos un detergente de tipo catiónico provocando interacción con la membrana
citoplasmática cargada y una probable inactivación o destrucción de enzimas. La acción del
detergente sólo fue observada en los halos de inhibición en la cepa S. aureus.
El enjuague bucal utilizado en la práctica fue de la marca “Listerine”, el cual contiene como
sustancias activas a triclosán,etanol y clorohexidina. El triclosán es un potente agente
antibacteriano y fungicida; pertenece al grupo de los fenoles. Actúa como como agente
desinfectante puesto que se difunde a través de la membrana citoplásmica bacteriana e
interfiere su metabolismo lipídico. En las dosis de uso normales actúa como un biocida, y
en dosis menores tiene efecto bacteriostático. El resto de los agentes activos están descritos
anteriormente (alcohol y halógeno). El efecto del enjuague bucal fue visible en ambas cepas
con los respectivos halos de inhibición.
CONCLUSIÓN

BIBLIOGRAFÍA

ANEXOS