Capacidad probiótica de

microorganismos autóctonos de
Patagonia para el control de patógenos
de usual ocurrencia en acuicultura

La acuicultura es uno de los sectores de producción de alimento de más rápido crecimiento que
provee actualmente casi la mitad de todo el pescado para consumo humano. Con la acuicultura
intensiva en expansión a nivel mundial, los riegos asociados a la aparición y transmisión de
bacterias patógenas aumentan. Un probiótico para acuicultura es un suplemento microbiano
vivo que proporcionado a través de la dieta o en el agua beneficia la condición de los peces
modificando la flora asociada a los mismos y al ambiente, mejorando el valor nutricional de los
alimentos, la respuesta inmunológica de los peces, la eficiencia reproductiva, y la calidad del
agua y del ambiente que los rodea. El objetivo de esta Tesis fue aislar cepas bacterianas
autóctonas de ambientes acuáticos de la región patagónica y estudiar sus propiedades
probióticas in vitroe in vivo, para evaluar su potencial utilidad en acuicultura. A partir de muestras
del tracto gastrointestinal de organismos acuáticos de Patagonia se obtuvieron 149
aislamientos. Utilizando la técnicade la doble capa, se detectaron 58 aislamientos con actividad
antimicrobiana contra alguno de los patógenos indicadores Aeromonas salmonicidasubsp.
salmonicida, Lactococcus garvieae, Yersinia ruckeri yCarnobacterium piscicola. De dichos
aislamientos, las únicas cepas cuya actividad antimicrobiana fue del tipo extracelular fueron T4,
T15 y M5, y sólo contra C. piscicola. Estas cepas correspondieron al género
Carnobacterium(99,93% homología en la secuencia del gen ARNr 16S con Carnobacterium
maltaromaticumDSM 20345(T)). Además, se sumó al estudio la cepa H16,previamente aislada
y parcialmente caracterizada, conactividad antimicrobiana extracelular contra A. salmonicida
subsp. salmoniciday V. alginolyticus. La secuencia del gen ARNr 16S de H16 mostró 100% de
homología con la de Lactobacillus pentosusJCM 1558(T). Carnobacteriumsp. T4,
Carnobacteriumsp. T15, Carnobacteriumsp. M5 y Lactobacillus pentosusH16 mostraron baja
resistencia a los antibióticos y ausencia de actividad hemolítica, las cuales son características
positivas en cuanto a la seguridad microbiológica de estas cepas. La actividad antimicrobiana
contra V. alginolyticusy A. salmonicidasubsp. salmonicidapresentada por H16 estuvo asociada
con la producción de ácidos orgánicos. En cambio,la actividad antimicrobiana presentada por
las cepas T4, T15 y M5 contra C. piscicolafue causada por la producción de
bacteriocinas.Debido a la producción temprana del agente antimicrobiano y a su mayor título de
inhibición, T4 fue elegida entre las cepas del género Carnobacteriumpara continuar los estudios.
Así, las propiedades probióticas de T4, H16 y Lactococcus lactisTW34 (una cepa proveniente
de la colección del laboratorio) fueron evaluadas en ensayos in vitroe in vivo. T4, H16 y TW34
mostraron tolerancia a la bilis de trucha arco iris (TAI) y resistencia a pH ácido, sugiriendo que
podrían adaptarse a las condiciones del tracto digestivo de los peces. Además, las tres cepas
fueron capaces de adherirse al mucus de TAI. La capacidad de adhesión al mucus es una
condición favorable para posibilitar la colonización del intestino del pez. En particular, H16 fue
capaz de inhibir la adhesión de V. alginolyticusy A. salmonicidasubsp. salmonicidaal mucus de
TAI, bioencapsularse en nauplios de Artemia franciscanay protegerlos de la infección con V.
alginolyticus. Estos resultados sugieren que H16 se podría administrar a través de portadores
vivos, por ejemplo, en el cultivo de larvas. En ensayos in vivoutilizando el pez cebra como
modelo, después de 14 días de administración de T4, H16 o TW34, los recuentos de bacterias
totales disminuyeron en el intestino de los peces probablemente a expensas de las
enterobacterias y Vibrio spp. que disminuyeron en promedio un orden y medio orden de
magnitud, respectivamente. En cambio, las bacterias ácido lácticas (BAL) aumentaron
aproximadamente dos órdenes de magnitud en los tres grupos tratados. T4 y TW34 se
recuperaron del intestino sólo durante su administración mientras que H16 se recuperó 48 h
después de la suspensión de su administración, con una abundancia similar a los valores
registrados en el período de administración. Esto demostraría la capacidad de colonización del
intestino del pez cebra de H16. En ensayos de crecimiento del pez cebra, también los recuentos
de BAL en el intestino de los peces cebra fueron mayores y los de Vibriospp. y enterobacterias
menores que los del grupo control sin probiótico, luego de 90 días de tratamiento con T4, H16
o TW34. A su vez, el peso corporal promedio de los peces en los tratamientos con T4 o H16 fue
significativamente mayor que en el control. Particularmente, los peces tratados con H16
presentaron una mayor tasa de crecimientoespecífica, un mejor factor de condición y un menor
factor de conversión del alimento, comparadocon el control. Así, el presente estudio demostró
que existen microorganismos en los ambientes acuáticos de la región patagónica que cumplen
con los criterios de selección de probióticos. Además, las cepas T4, H16 y TW34 lograron
modificar la microbiota intestinal del pez cebra, promoviendo la población beneficiosa de BAL y
disminuyendo otros grupos bacterianos conocidos por incluir patógenos oportunistas. La
evaluación in vivodemostró que las cepas L. pentosusH16 y Carnobacteriumsp. T4 tuvieron
efectospositivos sobre el crecimiento del pez cebra. Por lo tanto, estas cepas son prometedoras
para futuros estudios de desarrollo de alimentos probióticos para acuicultura.

URI
http://rdi.uncoma.edu.ar:8080/handle/123456789/14646
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