wz zx 39 BIOLOGIA CELULAR MOLECULAR iypRsipaD PROGRAMA DE MEDICINA SIMON BOLIVAR A OE 4 ELECTROFORESIS4.4. BIOLOGIA CELULAR MOLECULAR PROGRAMA DE MEDICINA MATERIALES Y METODOS Camara de electroforesis horizontal Transiluminador Micropipetas DNA Buffer de carga Bromuro de etidio Agarosa Buffer TAE (8 tris-acetato-EDTA) a ° UNIVERSIDAD SIMON BOLIVAR Se prepara el gel de agarosa al 2% en TAE 1X. Se funde la agarosa por calentamiento y cuando esté completamente disuelta se vierte en el molde, se le coloca el peine, y se deja /ez se haya formado el gel de forma adecuada se retira el ‘loca en la cdmara de electroféresis que contiene buffer enfriar hasta que solidifique. Una v peine cuidadosamente y el gel se c TAE suficiente para cubrir el gel completamente. TAE 200m ae AGAROSA Zor Figura 11 Para sembrar la muestra se mezclan en una placa: (Buferes de carga (Solucién Loadding Buffer) tienen tres propésitos: Hf 2. - 5 microlitros de ADN. = 1 microlitro de bromuro de etidio - 8 microlitros de buffer de carga Incrementan la densidad de la muestra (Sucrosa), asegurando que el ADN baje en forma pareja dentro del pozo. Adicionan color a la muestra simplificando el proceso de carga. a!“Ae uniyersipap BIOLOGIA CELULAR MOLECULAR SIMON BOLIVAR — PROGRAMA DE MEDICINA SSS Guus ata samen oH Lanoutons 3. Contienen colorantes como el azul de bromofenol y el xylencianol que en un campo eléctrico se mueven hacia el dnodo a una velocidad constante. Una vez preparadas las muestras y sembradas en el gel se procede a conectar la camara de electroforesis a una fuente de poder y se deja correr aproximadamente 45 minutos a 80-100 voltios. Cuando se haya terminado el corrido se desconecta el equipo y se retira cuidadosamente el gel para llevario al cuarto oscuro y observarlo en el trasiluminador de luz UV para observar intensidad de fluorescencia al compararlo con los marcadores mole- culares usados. Debe recordar que la fluorescencia es lineal con la concentracién del ADN.