Cambios en la actividad de la enzima α- amilasa durante la germinación

La estimación de la actividad enzimática se efectúa midiendo la desaparición del almidón en el

medio de la incubación. La concentración de almidón se determina basándose en su propiedad de
formar un color azul con el iodo, siendo la absorbancia proporcional a la concentración de almidón
entre unos valores de aquella entre 0,3 y 1,5 al menos.

1. Se requieren semillas de Cereales (cebada, maíz) puesta a germinar durante 12 horas, 2,

3, 4, y 5 días.
2. Preparar una solución de almidón soluble: pesar 140 mg de almidón y 29 mg de cloruro
cálcico. Disolver en 100 ml. de agua, hervir durante 1 minuto y dejar enfriar. Preparar
inmediatamente antes de usar.
3. Preparar una solución de iodo-ioduro: disolver 0,6 g de iodo sublimado y 6 g de ioduro
potásico en 100 ml de agua destilada.
4. Tomar cinco semillas de cada grupo, de acuerdo con su edad. Separar y conservar
solamente el endospermo con sus cubiertas. Triturar cuidadosamente en mortero con
pequeña cantidad de arena y una solución tampón acetato 50 mM (pH 4,8). Filtrar a través
de gasa. Aforar a 25 ml. con la solución tampón.
5. Colocar en tubos de centrifuga parte del extracto crudo obtenido (equilibrarlos tubos) y
centrifugar a la máxima velocidad durante 5 minutos. Decantar el sobrenadante y
conservarlo en tubos de ensayo.
6. Pipetear en un tubo de ensayo 1ml de tampón.