INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA:
BIOQUIMICA GENERAL
ALUMNOS:
GARCIA RUIZ EDGAR DANIEL
HERNANDEZ HERNANDEZ ALEXA FERNANDA
VIRUEÑA FRANCO
3FV1 SECCIÓN: 2
OBJETIVOS
Comprobar el efecto de la concentración del sustrato sobre
la velocidad de la reacción enzimática.
Determinar la constante de Michaelis-Menten.
INTRODUCCION
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones
químicas que son catalizadas por las enzimas, uno de sus
objetivos de estudio es el efecto de la concentración del
sustrato al ser enfrentado una enzima, en esta ocasión
debemos de comprender que tanto la velocidad de la
reacción como la concentración de un sustrato son
proporcionales siendo de primer orden, pero al incrementar
poco a poco la concentración del sustrato la velocidad
aumenta y deja de ser proporcional, entonces decimos que
se tiene una reacción de orden mixto. Cabe mencionar que
una reacción de primer orden es aquella donde la velocidad
de reacción depende únicamente del reactivo, es decir, del
sustrato, mientras que una reacción de orden mixto es
donde la rapidez inicial de la reacción disminuye y deja de
ser aproximadamente proporcional a la concentración del
sustrato cuando está aumenta la rapidez de la reacción llega
a ser, esencialmente independiente de la concentración del
sustrato, en ese intervalo de concentraciones las reacciones
de orden son en función del sustrato. En esta parte
experimental es donde la enzima se encuentra saturada con
su sustrato, en este punto la velocidad ya no depende de la
concentración inicial de la enzima, si no que ahora es de
orden cero y se alcanza la velocidad conocida como
máxima.
Algunos investigadores intentaron aproximar la velocidad
máxima para la concentración del sustrato, con la cual la
velocidad de la reacción enzimática alcanza la velocidad
máxima. Entre ellos encontramos a Leonor Michaelis y Maud
Menten, los cuales se dedicaron a investigar la mitad de la
velocidad máxima al cual bautizaron como la constante de
Michaelis-Menten (Km).
En medio de valores conocidos de pH y a temperatura cada
enzima tiene una constante especifica, la cual sirve para
identificación.
Tiempo después un par de investigadores más desarrollaron
el diagrama de Lineweaver-Burk, el cual es una herramienta
gráfica para calcular los parámetros cinéticos de una
encima, adaptando la cinética de Michaelis-Menten, usando
los recíprocos de los valores obtenidos pueden llegar a la
siguiente ecuación:
𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆]
𝑉𝑂 =
𝐾𝑚 + [𝑆]
Dónde:
Vo= velocidad de reacción
Km=Constante de Michaelis-
Menten
Vmax= Velocidad máxima
Esta representación permite identificar la constante y la
velocidad máxima, donde el punto de corte con el eje de las
coordenadas es el equivalente del inverso de la velocidad
máxima y el de las aristas es el valor del inverso de la
constante.
Algunos inconvenientes de este método es que requieren los
dobles inversos y pequeños errores en ese pueden conducir
a grandes errores y a altas concentraciones de ambos
reactantes, los puntos de interés terminan en desorden al
inicio de la gráfica.
RESULTADOS
Abs 0 0.52 0.52 0.51 0.54 1.14 1.24
6 9 3 5 0 2
AR 5 1 2 3 5 8 10
(µmol)/
2 ml
V (UI)
[S] M
ANALISIS DE RESULTADOS:
De acuerdo a los resultados obtenidos de absorbancia se
pudo obtener por medio de la interpolación en nuestra curva
tipo de azucares reductores, la cantidad de azucares
reductores que se tenían en cada una de nuestras muestras
problemas; con este resultado, se calculó la velocidad de
reacción para cada tubo y se realizó la gráfica
correspondientes, una vez hecho esto podemos observar
que la concentración de sustrato influye en la velocidad de
reacción debido a que cuento éste se encuentra a mayor
concentración, la velocidad de reacción es mayoritaria, sin
embargo hay un punto máximo en el cual, después de éste
la enzima comienza a disminuir su actividad enzimática
debido a que ya no hay más sustrato con cual reaccionar por
lo cual se desnaturaliza la enzima perdiendo la actividad
enzimática
Se midió la actividad de la enzima usando concentraciones
crecientes de sustrato, se llega ha observar un
comportamiento especial llamado cinética de Michaelis –
Menten, en donde a bajas concentraciones de sustrato la
velocidad de reacción enzimática es directamente
proporcional a la concentración a la concentración del
mismo, siendo una reacción de primer orden. A mediana
concentraciones de sustrato, la velocidad de la reacción
enzimática ya no es directamente proporcional a la cantidad
del sustrato, aunque sigue aumentando la velocidad, lo que
corresponde a una reacción de orden mixto. A elevadas
concentraciones de sustrato, la velocidad de la reacción
enzimática ya no aumenta mas, por más sustrato que se le
adicione, indicando una saturación de la enzima con su
sustrato y siendo una reacción de orden cero. A medida que
aumenta la concentración de sustrato, la velocidad inicial
aumenta hasta que la enzima esta completamente saturada
por el sustrato
CONCLUSIONES:
- Entre mayor cantidad de sustrato, mayor será la actividad
enzimática hasta un punto determinado.
Bibliografía:

-Voet, D; Voet, J.G; Pratt, W.C; Gismondi, M.I;

Fundamentos de bioquímica/fundamental of
biochemistry, 2a ed; Medica Panamericana; España;
2007; pp. 508-509
- Thomas Peter Benet, bioquímica, Ed
Reverte, 2da Edición, España (1982) PP.
126-127