UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MÉDICA

BIOQUIMICA CLINICA I- AÑO ACADÉMICO 2019
CUARTO CICLO

PRÁCTICA NRO 13

AMILASA

OBJETIVOS

 Conocer y aplicar la técnica para la determinación de actividad enzimática de la amilasa.

 Determinar los niveles de amilasa en muestras normales y patológicas.

INTRODUCCIÓN

La amilasa, enzima del grupo de las hidrolasas, se produce principalmente en la fracción exocrina del
páncreas y en las glándulas salivales.
Su acción se dirige particularmente a escindir los enlaces α 1-4 glucósidicos de los polisacáridos como
almidón y glucógeno, siendo el producto final de la acción de la enzima sobre estos polisacáridos la
formación de dextranos, maltosa y algunas moléculas de glucosa.

La lesión de las células acinares (que se produce en la pancreatitis) o la obstrucción del flujo del
conducto pancreático (resultado de un carcinoma pancreático) hacen que esta enzima pase al sistema
linfático y luego a los vasos sanguíneos.

Uso diagnóstico

La determinación de amilasa se lleva a cabo para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades de

páncreas y de abdomen agudo. Un aumento anormal del nivel sérico de amilasa se produce al cabo de
12 horas del inicio de la enfermedad.

En pacientes con pancreatitis aguda, la amilasa sérica se encuentra aumentada, alcanzando los valores
más elevados entre las 24 y 30 horas posteriores a la lesión, declinando nuevamente para volver a los
niveles normales entre 48 y 72 horas después de la lesión inicial.
Del mismo modo se ve aumentada en este caso la excreción urinaria de la enzima, persistiendo la
hiperamilosuria 3 a 5 días luego de que la actividad sérica ha alcanzado los niveles normales.

La determinación sérica de la amilasa no es específica para trastornos pancreáticos. También es

posible encontrar valores aumentados en pacientes con ulcera gástrica o duodenal perforada,
obstrucción intestinal, obstrucción de conductos biliares, pancreatitis crónica, carcinoma de cabeza de
páncreas, en general cualquier caso de “abdomen agudo” o intervención quirúrgica en regiones
proximales al páncreas.

MÉTODOLOGIA
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Existen varios procedimientos para el ensayo de la actividad de la amilasa en suero/orina.
 Métodos amilo clásicos:
o Turbidimétricos
o Nefelométricos
o Iodométricos que miden la disminución del color azul producido por la reacción del yodo
con el almidón. método de yodo-almidón.

 Métodos sacarogénicos que miden la producción de azucares reductores como maltosa y

glucosa después de incubar el suero del paciente con almidón.
o Método de reducción de cobre. Samogy.
o Método de reducción de ferrocianuro.
o Método de reducción del ácido pícrico.
o Método cromogénico.

Método de Yodo almidón (Iodométrico) (Caraway, 1959)

Se mide la hidrólisis del sustrato de almidón por la alfa-amilasa del suero, saliva o de la orina en
condiciones estandarizadas, mediante la diminución del color azul en el tubo problema después de
añadir yodo; se comparan las lecturas colorimétricas con un testigo en el cual se ha inhibido la hidrólisis
enzimática.
La disminución de color respecto al sustrato control (sin muestra) es la medida de la actividad
enzimática. Se mide a 640 nm.
Se expresan en Unidades amiloiditicas (UA/dl) comparables con Unidades Sacarogénicas (Samogyi)/dl.

Principio del método en la Práctica. Amilokit de Wiener

El sustrato, almidón tamponado, se incuba con la muestra, produciéndose la hidrólisis enzimática. Esta
se detiene por el agregado de reactivo de iodo, que al mismo tiempo produce color con el remanente de
almidón no hidrolizado.
La disminución de color respecto de un sustrato color (sin muestra) es la medida de la actividad
enzimática, que se expresa en unidades Amilolíticas (Smith y Roe) /decilitro (UA/dl), comparables con las
Unidades Sacarogénicas (Samogy)/decilitro.

Muestra: Suero- saliva - orina

Reactivos:
 Reactivo A: solución de almidón 500 mg/l, tamponada a ph 7 con buffer fosfato 0.1 mol/l en
ClNa 0.15 mol/l.
 Reactivo B: solución 0.001 eq/l de iodo en ácido clorhídrico 0.002 mol/l.
 Control

PROTOCOLO DE TRABAJO. Wiener

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 Mta Control Mta suero Mta saliva
REACTIVO A 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Pre incubar todos los tubos a 37°C por 5 minutos. Luego agregar:

Muestra 20 ul 20 ul
Incubar a 37ºC por 7 minutos y medio exactos, agregar:
REACTIVO B 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Mezclar por agitación suave. Retirar los tubos del BM y agregar:
Agua destilada 8. 0 ml 8. 0 ml 8. 0 ml
Mezclar por inversión. Leer en espectrofotómetro alrededor de 640nm, llevando a cero el aparato con agua
destilada.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

Amilasa (UA/dl) = C-D/ C x 1000

 Una unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1
micromol de sustrato por minuto bajo condiciones especificas.

 Una Unidad (UA) es la cantidad de enzima contenida en 100ml de muestra, que puede hidrolizar
10 mg de almidón en 30 minutos, en las condiciones de la reacción.

Valores referenciales: < 120 UA /dl (en suero)

< 260 UA/ hora

Interferencias:
 Hemoglobina
 Bilirrubina
 Lipemia

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INFORME

1. Reporte sus datos de absorbancias y los cálculos para la determinación de la actividad

enzimática de amilasa en las muestras de suero y saliva. Interpretar los resultados.

2. Investigue sobre el uso diagnóstico de la determinación de amilasa en orina.

3. Investigue y describa el fundamento de algún otro método para determinación de Amilasa,

diferente al método iodométrico realizado en la práctica.

4. Elabore una red semántica sobre la enzima AMILASA.