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Tinción con sulforodamina B

Pasadas 48 horas de aplicado el tratamiento sobre las células se extrajo el medio de cultivo.

Posteriormente, se adicionó a cada pozo 60 l de solución de ácido tricloro acético (TCA) al

10% y se incubó por una hora a 4 ºC. Pasado el tiempo de incubación se desechó el TCA y

cada placa se lavó tres veces con 200 µl agua de grifo. Se pueden almacenar las placas por

tiempo indeterminado dejándolas secar completamente. A continuación se adicionó a cada

pozo 60 l de solución de SRB al 0.4 % en ácido acético al 1% incubándolo por 10 minutos

a temperatura ambiente. Posteriormente, se eliminó el colorante y se lavaron los pozos tres

veces disponiendo en cada uno 60 l de ácido acético al 1 %. Por último, se adicionaron

100l de solución de TRIS base 10 mM, pH 10.5. Es posible dejar reposar por 5 minutos y

posteriormente disolver con micropipeta. Leer la absorbancia de las placas a 550 a 570nm.

Nota: Si la intensidad del color es alta se puede leer la placa a una menor longitud de onda

(490–530 nm).

1. Ácido tricloro acético (TCA) al 10% en agua destilada


2. Ácido acético al 1% en agua destilada
3. sulforodamina B (SRB) al 0.4 % en ácido acético al 1%
4. TRIS base 10 mM, pH 10.5 en agua destilada

Nota: Depositar los desechos de TCA y de SRB en los contenedores destinados para tal fin.