Resumen

La cromatografía liquida de alta eficacia o high performance liquid chromatography (HPLC)

es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química
analítica. El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla
basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y
la columna cromatográfica. En la práctica realizada utilizamos esta eficaz técnica para
cuantificar el contenido de cafeína presente en una bebida energizante marca “Volt” en
sus dos diferentes presentaciones. En las etiquetas de estas bebidas se indica que el
contenido de cafeína es de 72 y 64 mg en 200 ml para el Volt Verde y Azul respectivamente.
Los resultados obtenidos fueron 73,68 y 67.91 mg en 200 ml de muestra para el Volt Verde
y Azul respectivamente. Se obtuvo un error de 2,33% y 6,10% para el Volt Verde y Azul
respectivamente, ambos errores fueron por exceso.

Principios de la técnica
En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una columna
que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las
interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y
estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto
rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la
volatilidad o la estabilidad térmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromoléculas y especies iónicas, productos naturales
lábiles, materiales poliméricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de alto
peso molecular. Con una fase móvil líquida interactiva, otro parámetro se encuentra
disponible para la selectividad, en adición a una fase estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y más posibilidades para la separación.
HPLC preparativa
Es la técnica escogida para aislamiento y purificación de productos de valor en las
industrias químicas y farmacéuticas así como en la biotecnología y la bioquímica. La
cromatografía preparativa comprende un amplio rango de aplicaciones, desde el
aislamiento de 1µg de muestra para identificación espectroscópica hasta el aislamiento
de un compuesto puro de una mezcla de 100 g.

Aplicaciones
Campos de Aplicación de HPLC
 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos
 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
 Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos, propulsores,
colorantes
 Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrógenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
 Separación y purificación de metabolitos
 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de
orina
 Purificación y separación de enantiómeros
 Purificación de compuestos naturales
Resultados
Tabla 1: Curva de Calibración

Concentración
Área
(ppm)
20 296794
40 812283
60 1143524
80 1538994
100 2121248

Tabla 2: Resultados para las muestras de Volt azul y verde

Contenido de
Contenido de
cafeína en
Concentración cafeína en
Muestra Área 200ml %Error
(5ml en 50ml) 200ml Teórico
Experimental
(mg)
(mg)
Volt Verde 675906 36.84 73.68 72 2.33
Volt Azul 612700 33.95 67.91 64 6.10

Grafica 1: Curva de calibración

Area vs Concentracion
2500000

y = 21878x - 130117
2000000 R² = 0.9913

1500000
Area

1000000

500000

0
0 20 40 60 80 100 120
Concentracion (ppm)
Ejemplos de calculo
Se tomó 5ml de cada bebida energizante y se diluyó a 50ml, para obtener la concentración de
cafeína en esta muestra se utilizó la ecuación obtenida de la curva de calibración.

𝐴𝑟𝑒𝑎 = 21878 × 𝐶 − 130117

Para la muestra de Volt Verde:
675906 + 130117
𝐶= = 36.84 𝑝𝑝𝑚
21878
Esta es la concentración para la muestra disuelta, corrigiendo los volúmenes obtenemos:
50𝑚𝐿
𝐶𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 = 36.84 𝑝𝑝𝑚 × = 368.42 𝑝𝑝𝑚
5𝑚𝐿
Pasando la concentración a masa para 200 ml:

𝑊𝑐𝑎𝑓𝑒𝑖𝑛𝑎 = 368.42 𝑝𝑝𝑚 × 200 𝑚𝐿 = 73.68 𝑚𝑔 𝑒𝑛 200 𝑚𝐿

Calculando el %Error, el valor teórico es 72 mg en 200 mL

72 − 73.68
%𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | × 100% = 2.33% 𝑒𝑛 𝑒𝑥𝑐𝑒𝑠𝑜
72
Conclusiones
 Se logró cuantificar la masa de cafeína presente en una bebida energizante de la marca
Volt en sus dos presentaciones Verde y Azul, obteniéndose los resultados: 73,68 mg en
200 ml y 67,91 mg en 200 ml respectivamente.
 La técnica no presento interferencias debido a que ninguna de las dos presentaciones
contenía Taurina, el cual es un interferente en la cuantificación de cafeína.
 El porcentaje de error pequeño se debe a error en la medición en la alícuota para la
disolución de la muestra o a error propio del equipo. De todas maneras, este error se
encuentra en un rango aceptable.
 Se comprobó la eficacia del método ya que se obtuvo valores muy cercanos a los
teóricos.