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Universidad de Sonora

Departamento de Ciencias Químico Biológicas


Bioquímica I
Reporte de Laboratorio
Practica 1
EQUIPO#6
Fraijo Domínguez Elvia Verania
Gallegos Rios Ruth Sarai
Alvarez Monteverde Andrea
Valenzuela Castillo Francisco Jesus
INTRODUCCION

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrógeno y oxígeno


(C, H, O) e incluyen algunas de las moléculas más relevantes en la vida de los
organismos. Son polihidroxialdehídos o cetonas y sus polímeros y existen en
tres categorías principales distinguibles por el número de unidades de azúcar
que los forman: monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los
polisacáridos liberan a la hidrólisis centenares o millares de monosacáridos;
mientras que los oligosacáridos producen de dos a l0 monosacáridos y los
monosacáridos mismos son las unidades mínimas de los carbohidratos que ya
no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a que su estructura
química semeja formas hidratadas del carbono y se representan con la fórmula
Cn (H2O)n.

PRINCIPALES CARBOHIDRATOS EXISTENTES EN LA


NATURALEZA:

MONOSACARIDOS:
Gliceraldehido (Aldotriosa), Dihidroxicetona (cetotriosa). (3 carbonos).
· Treosa y Eritrosa (Aldotetrosa), Eritrulosa (cetotetrosa). (4 carbonos).
· Ribosa, Xilosa, Aribinosa (Aldopentosas), ribulosa, xilulosa
(cetopentosas) (5. Carbonos).
· Glucosa, Manosa, Galactosa (Aldohexosas), Fructosa, sorbosa
(cetohexosas) (6. Carbonos).
· Heptulosa (cetoheptosa) (7. Carbonos).

OLIGOSACARIDOS:
Maltosa, Lactosa, Sacarosa (Disacáridos) (12 C)
· Rafinosa, Melezitosa (Triosacáridos) (18 C)
· Estaquiosa (Tetrasacáridos) (24 C)
· Verbascosa (Pentasacárido) (30 C)

POLISACARIDOS:
Almidón, Glucógeno, Celulosa, Insulina, (Homopolisacaridos).
· Acido Hialurónico, Heparina, Condroitinas, (Heteropolisacáridos).

CARBOHIDRATOS REDUCTORES:
Son aquellos carbohidratos (fundamentalmente monosacáridos y
polisacáridos), que tienen su grupo funcional aldehído o cetona libre o
potencialmente libre. Libre si la molécula existe en forma abierta,
potencialmente libre si la molecula existe en forma cíclica los carbohidratos
reductores se llaman asi por que tienen la propiedad de reducir las soluciones
alcalinas de cobre, que luego al calentarse producen un precipitado de oxido
cuproso que es de color rojo ladrillo, perfectamente identificado.
Todos los monosacáridos, aun si existen en forma cíclica son reductores.
Los disacáridos que tengan hidroxilo del carbono anomérico de alguno de los
monómeros libre, también serán reductores, aun cuando mas lentamente, por
ejemplo la Maltosa y la Lactosa, pero aquellos que estén unidos por sus 2
carbonos anoméricos, como la sacarosa, no serán reductores, amenos que se
rompa la unión y salgan libres de los monómeros. A medida que el numero de
monómeros aumenta, las características reductoras se ban asiendo mas y mas
leves. De ahí que los polisacáridos, a pesar de tener su ultimo monómero con
grupo funcional potencialmente libre, en la practica nunca lo son. Pero si los
polisacáridos se hidrolizan, entonces si se mostraran las características
reductoras de sus monómeros constituyentes.
MATERIAL NECESARIO:
1 gradilla. 1 vaso de precipitado de 100 ml.
2 pipetas de 5 ml. 1 probeta de 50 o 100 ml.
2 pipetas de 1 ml. 2 pinzas para tubo de ensaye.
Mechero, tripie y tela 15 tubos de ensaye de 18x150.
de asbesto.
1 vaso de precipitado
de 600 ml.

PROCEDIMIENTO:
Reacción del Fheling:
1.- con el vaso de precipitados de 600 ml., tripie y tela de asbestos, instale un
baño de agua; y prenda su mechero para calentar el agua hasta la ebullición.
2.- coloque en su gradilla, cinco tubos de ensaye de 18x150, y márquelos del 1
al 5.
3.- pipetee 5 ml de glucosa al tubo 1; 5.0 ml de fructosa al tubo 2; 5.0 ml de
sacarosa al tubo 3; 5.0 mil de lactosa al tubo 4; 5.0 ml de maltosa al tubo 5.
4.- agregue 5 ml del reactivo fehling, ya preparado, a cada uno de los cinco
tubos.
5.- cuando el agua del baño este hirviendo, coloque los cinco tubos al mismo
tiempo, dentro del vaso, y anote el tiempo.
6.- una vez que aparezca el precipitado característico de color rojo ladrillo en
la mayoría de los tubos, (uno a tres minutos), saque todos los tubos del agua
hirviendo, y colóquelos en su gradilla.
7.- anote sus resultados, indicando cuales fueron los carbohidratos que dieron
positiva la reacción y el tiempo en que apareció el precipitado. Los tubos con
reacción positiva serán los que contienen carbohidratos reductores.
8.- una vez anotados sus resultados lave inmediatamente los tubos donde hubo
precipitado, pues si se tarda, luego no se podrá quitar la mancha del
precipitado.

Reacción de Barfoed:
1.- Repita los pasos dos y tres de la reacción anterior.
2.- agregue 5.0 ml del reactivo barfoed, ya preparado, a cada uno de los cinco
tubos.
3.- Coloque los cinco tubos al mismo tiempo en el agua hirviendo y anote el
tiempo.
4.- Espere hasta 10 minutos, observando cuidadosamente la aparición de
precipitados, y el tiempo en que esto sucede. Anote sus resultados indicando
que tubos fueron positivos para la prueba. Esos serán los que contengan
carbohidratos Disacáridos.

NOTA:
En caso de existir Monosacáridos y Disacáridos mezclados en el mismo tubo
de ensaye, aparecerá un precipitado en uno a tres minutos, que corresponderá
al monosacárido. Se filtra ese precipitado, y se continúa el calentamiento para
observar la aparición de un segundo precipitado, que corresponderá al
Disacárido, en unos cinco a 10 minutos.

REACCION DE SELIWANOFF:
1.- Coloque en su gradilla 3 tubos de ensaye y márquelos.
2.- Pipetee 1 ml. de xilosa al tubo 1; 1 ml de glucosa al tubo 2; y 1 ml de
fructosa al tubo 3.
3.- Agregue 5 ml. del reactivo SELIWANOFF, ya preparado a cada uno de los
3 tubos.
4.- Coloque los 3 tubos al mismo tiempo en el baño de agua a ebullición.
5.- Anote sus resultados en cuanto a aparición de color y tiempo. Aquellos
tubos que den positivo la prueba serán los que contengan cetohexosas.

REACCION DE BIAL:
1.- Coloque en su gradilla 3 tubos de ensaye y márquelos.
2.- Pipetee 0.5 ml. de xilosa en el tubo 1; 0.5 ml. de glucosa en el tubo 2; y 0.5
ml. de fructosa en el tubo 3.
3.- Agregue 5 ml. del reacctivo de BIAL, ya preparado a cada uno de los 3
tubos.
4.- Coloque los 3 tubos al mismo tiempo en el baño de agua hirviendo.
5.- Anote sus resultados, indicando que tubos dieron positivo la reacción, que
será los que contengan carbohidratos pentosas.

RESULTADOS

Reacción de Fheling
Glucosa Primero en reaccionar
Fructuosa Reacciono
Sacarosa No reacciono
Lactosa Reacciono
Maltosa Reacciono

A los aproximados 30 segundos todos los tubos empezaron a tornarse de un


color rojizo. Excepto el tubo 3 que fue el de la sacarosa.

Ilustración 1Tubos con color rojizo Ilustración 2 Tubos reaccionando


Reacción de Barfoed
Glucosa Precipitado
Fructuosa Precipitado
Sacarosa Precipitado
Lactosa Precipitado
Maltosa Precipitado

Todos los tubos reaccionaron dando un precipitado, no tan visible como en la


reacción de Fheling. De un color oscuro. El tubo en dar primero el precipitado
fue el de la fructuosa (Tubo 2) a los 2 minutos, seguido de este fue el que
contenía glucosa (Tubo 1). Después se dieron el tubo con sacarosa y lactosa
entre el minuto 3 al 4:30. El último en reaccionar fue el de maltosa y fue el
que daba menos precipitado.

Ilustración 4Observacion de la variacion de


Ilustración 3Observacion del tiempo de reaccion
precipitado
Reacción de Seliwanoff
Xilosa No reacciona
Glucosa No reacciona
Fructuosa Reacciona

Al minuto de introducir los 3 tubos, la fructuosa empieza a tornarse en un


color entre rojo y rosa. Un color sandia intenso al final.

Ilustración 5Color rojo sandia


Reacción de Bial
Xilosa Reacciona
Glucosa No reacciona
Fructuosa Reacciona

Fue la reacción más tardada de las 4, para empezar a ver reacciones pasaron 5 minutos.
Dejamos los tubos 10 minutos en los cuales tuvimos cambios en el tubo de Xilosa que se
tornó verde y en el tubo de fructuosa que se torno amarillo.

Ilustración 6Color amarillo , nada y el verde


CONCLUSION
Entendimos que para identificar carbohidratos es necesario aprender cómo funciona las
reacciones, además de su comportamiento al mezclarse con dichos carbohidratos, además,
aprendimos las diferencias entre los reactivos.

CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de fehling?
Está formado por dos soluciones acuosas que son: sulfato de cobre cristalizado y sal
seignette o tartrato mixto de potasio y sodio; es importante tener en cuenta que
ambas se guardan separadas hasta el momento en el que vayan a ser utilizadas para
de esa manera evitar la precipitación del hidróxido de cobre.
Su acción se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos
el cual se oxida a ácido y se reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de
cobre, formando un precipitado de color rojo.
El reactivo de Fehling se fundamenta principalmente, en su reacción, la oxidación
de cobre, el poder reductor de los azúcares, sea este en monosacáridos,
polisacáridos, aldehídos, y en ciertas cetonas.

2. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Barfoed? La Reacción de Barfoed es


un ensayo químico utilizado para identificar azúcares reductores además se la utiliza
también para diferenciar a los azúcares monosacáridos de los disacáridos mediante
el tiempo de aparición del precipitado rojo ladrillo (Cu2O).
0 - 5 min Azúcar Monosacárido
5 - 30 min Azúcar Disacárido
Se basa en la reducción del cobre II (en forma de acetato) a cobre I (en forma de
óxido)
3. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Seliwanoff? La prueba de Seliwanoff
es una reacción para diferenciar cetosas de aldosas; aunque ambas dan la reacción.
Los azúcares son distinguidos a través de su función como cetona o aldehído.
En esta prueba de Seliwanoff, se utiliza el ácido clorhídrico en la reacción de
deshidratación (del monosacárido) y el resorcinol (1,3-dihidroxibenceno) en la
reacción de condensación del derivado del furfural (el hidroximetilfurfural). Esta es
una prueba cualitativa; es decir el medio pasa de incoloro a rojo, para las
cetohexosas y aldohexosas.
El hidroximetilfurfural (producto de la deshidratación) se forma más rápidamente a
partir de cetohexosas y más lentamente a partir de aldohexosas. El tratamiento
prolongado de más de quince minutos de duración, provoca la isomerización de la
glucosa (aldohexosa) en fructosa (cetohexosa), por lo que también la glucosa puede
dar la prueba positiva.
4. ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Bial? esta prueba se basa en la
formación de furfural, al hacer reaccionar pentosas con HCl y posteriormente con
orcinol. El furfural es un aldehído electrofilico, en presencia de ácido, adiciona
fenoles (con pérdida de agua) produciendo sustancias altamente coloreadas, las
pentosas originan una coloración azul-verde. En la prueba de Bial no se contó con la
ribosa, procedimos a realizar la prueba con fructosa y sacarosa. Tanto la fructosa
como la sacarosa al no ser pentosas no dan una coloración positiva, sin embargo las
hexosas al reaccionar con el reactivo de Bial originan una coloración verde, café o
café-rojiza, razón por lo cual en la fructosa se observó una coloración café rojiza
oscura y en la sacarosa una coloración similar pero clara.
5.- ¿ Cual es la diferencia entre el reactivo de Fehling y el de Barfoed en cuanto a
su composición y su efecto de los carbohidratos?
Yo pienso que la diferencia entre estos 2 reactivos es que el reactivo de fehling tomo un
color verde y el de barfoed un color rojo.

6.- ¿Que obtendríamos con el reactivo de Fehling si no se calentara la solución?


No cambiarian de color si no se calentaran.

8.- ¿Que carbohidratos dan positiva la reacción de Seliwanoff en tiempo mas


corto que carbohidratos te dan positiva en tiempos mas largos?
La Fructosa

9.- Se podría usar la prueba de Seliwanoff para distinguir sacarosa de fructosa?


¿Porque si o porque no? ¿Cual seria la técnica?
Si, porque la fructosa es la única que reacciona con el reactivo de Seliwanoff.

10.- Porque para la prueba de Bial hay que evitar el exceso de calentamiento?
R=

11.- Tengo tres frascos, uno con glucosa otro con manosa y otro con fructosa a los
tres les añado hidróxido de socio 0.5 N. que obtengo como producto en cada uno de
los tres frascos y porque?
Se obtienen enodioles intermediarios, se adiciona un grupo OH a cada uno de los
carbonos. Es medio básico, posiblemente habrá un precipitado por reducción.
12.- Que productos obtengo al tratar la ribosa con acido concentrado y porque?
R=

13.- En un frasco tengo glucosa y en otro manosa, y los quise tratar con álcali 0.01
N., pero me equivoque de frasco y lo que añadi fue acido clorhídrico 0.01 N. que
sucederá en cada frasco?
No sucedería nada, los monosacáridos no reducen en medio acido.

14.- En el laboratorio había un frasco rotulado lactosa mas fructosa, y otro


rotulado glucosa mas ribosa, pero al hacerse la limpieza del laboratorio se cayeron
las etiquetas y ahora no se sabe cual es cual. Que se puede hacer para poderlos
etiquetar correctamente?
Tomar una muestra de cada uno de los frascos y agregarles a cada uno el reactivo de
BARFOED y aquel que de positivo será la glucosa+ribosa.

INVESTIGACIÓN:
Investigue bibliográficamente que determinan las siguientes reacciones, y como se hace
la prueba en cada caso.
1. Reacción de Molish.
R= Es una reacción que tiñe cualquier carbohidrato presente en una disolución; es
llamada así en honor del botánico austríaco Hans Molisch.

Se utiliza como reactivo una disolución de α-naftol al 5% en etanol de 96º. En un tubo


de ensayo a temperatura ambiente, se deposita la solución problema y un poco del
reactivo de Molisch. A continuación, se le añade ácido sulfúrico e inmediatamente
aparece un anillo violeta que separa al ácido sulfúrico, debajo del anillo, de la solución
acuosa en caso positivo.

2. Reacción de Folin.
R= Es una mezcla de fosfomolibdato y fosfotungstato, usado para la determinación de
antioxidantes fenólicos y polifenólicos.1 Funciona midiendo la cantidad de sustancia
analizada que se necesita para inhibir la oxidación del reactivo.
4. Reacción del acido mucico.
El ácido múcico, se obtiene por la oxidación del azúcar de la leche (lactosa), la dulcita,
la galactosa, la quercita y la mayoría de las variedades de goma natural que incorporan
ácido nítrico.

5. Reacción de Benedict.
R= En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores
(aquellos que tienen su OH anomérico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y
celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+,
que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.
El reactivo de Benedict consta de:
Sulfato cúprico;
Citrato de sodio; Carbonato anhidro de sodio. Además se emplea NaOH para alcalinizar
el medio.
6. Reacción de Nylander.

7. Reacción de Tollens.
R= Es un complejo acuoso de diamina-plata, presentado usualmente bajo la forma de
nitrato. Recibe ese nombre en reconocimiento al químico alemán Bernhard Tollens.
Se usa en el complejo diamina-plata(I) es un agente oxidante, reduciéndose a plata
metálico, que en un vaso de reacción limpio, forma un "espejo de plata". Éste es usado
para verificar la presencia de aldehídos, que son oxidados a ácidos carboxílicos.

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