AGENTES ANTICANTE DE LA PLANTA. XII.

1 ELUCIDACIÓN DE
AISLAMIENTO Y ESTRUCTURA DE NUEVAS QUINONES
CITOTÓXICAS DE TABEBUIA CASSINOIDES
M. MADHUSUDANA Roa y DAVID G. I. KINGSTON; Departamento de Química, Instituto
Politécnico de Virginia y Universidad Estatal, Blacksburg, Virginia 24061
Ass Tucr-Se describe el aislamiento de las tres nuevas furonaftaquinonas citotóxicas 1, 2
y 3 (o 4) de T. cassinuides. Los compuestos se caracterizaron por RMN 1H, uv, ir y ms.
También se reporta la síntesis de quinonas 1.

Como parte de un estudio sistemático de fuentes botánicas para la actividad

anticancerígena, un extracto alcohólico de la corteza del tallo de Tabebuia cassinoides
(Lam.) DC. (Bignoniáceas) fue examinado. Este extracto mostró una actividad leve pero
reproducible en el bioensayo in vivo de P-388 (T / C 127 y 125 a 200 mg / kg en dos pruebas
separadas), y así se inició una investigación a gran escala del mismo en un intento de aislar
el constituyente antileucémico.
La partición del extracto de etanol (54 g) entre cloroformo y agua dio una fracción de
cloroformo (6,8 g) que muestra T / C 132 a 50 mg / kg en el ensayo P-388. El reparto de la
fracción de cloroformo entre 90% de metanol acuoso y hexano produjo una fracción de
hexano inactivo y una fracción soluble en metanol (3,6 g) con T / C 122 a 50 mg / kg y una
ED60 de 27 pg / d en el cultivo de células KB. ensayo. La purificación adicional de la fracción
de metanol por cromatografía en gel de sílice dio como resultado una pérdida de actividad
in vivo, y las reextracciones posteriores de la muestra de corteza de tallo original produjeron
extractos que fueron uniformemente inactivos en el ensayo in vivo P-388. Sin embargo, la
primera fracción eluida de la columna mostró una citotoxicidad significativa en el ensayo de
cultivo de células KB (ED50 1.9 pg / ml), y la purificación de esta fracción mediante
cromatografía y recristalización produjo las tres nuevas naftaquinonas citotóxicas 1-3 (o 4.

2 ACETIL-4H,9H-NAFTO(3,2-b) FURAN-4,9-DIONA

(+)-2-(1-HIDROXETIL)-4H,9H-NAFTO
.

Peroxido de Benzilo

El compuesto 1, C14H8O4, era una sustancia cristalina de color naranja con un ED50 de
1.0 pg / ml en el ensayo de cultivo de células KB. Su espectro de 'H nmr en CDCla era
bastante simple con dos múltiples de dos protones centrados en 6 8.2 y 7.8 ppm, un singlete
de un protón en 7.60 ppm y un singlet de tres protones en 2.70 ppm. Su espectro de ir
mostró absorciones a 1690 y 1670 cm-1 y su espectro uv fue característico de las
naftaquinonas. Para el artículo anterior ver referencia 1. 600.
Sep-Oct 19821 Rao y Kingston: Quinones citotóxicos 60 1
La naturaleza quinonoide del compuesto 1 se demostró tanto por su ir como por sus datos
espectrales uv, que se corresponden con los espectros de las naftaquinonas conocidas
(con la excepción de que el compuesto 1 no muestra la absorción uv a aproximadamente
440 nm dada por algunas naftaquinonas (2) ), y por su acetilación reductora al
tetrahidrodiacetato 7. Estos datos solo concuerdan con la formulación de la quinona como
2-acetil-4H, 9H-nafto [2,3-b] furan-4,9-diona (1) . La única estructura alternativa razonable
sería el derivado 3-acetilo, pero se esperaría que el protón en la posición% de este
compuesto tenga un cambio químico de alrededor de 8,5 a 9 ppm basado en los cambios
en los compuestos modelo (3). Así, aplicando las diferencias de desplazamiento químico
calculadas para 2 y 3-acetilfurano (3) a los desplazamientos químicos de los protones 2 y
3 de 4H, 9H-nafto [2,3-b] furan-4,9-diona ( 4) arrojó un valor predicho de 7.96 ppm para el
protón 3 del derivado 2-acetilo y 8.65 ppm para el protón 2 del derivado 3-acetilo.
Claramente, el cambio observado de 7.60 ppm es más consistente con la primera
alternativa.

El segundo compuesto aislado fue una sustancia cristalina amarilla, C14H1004, con un
ED60 de 2.0 pg / ml en el ensayo de cultivo de células KB. Su espectro de RMN de 1H en
CDC1, mostró una absorción a 6 8.2 (2H, m), 7.7 (2H, m), 6.84 (1H, s), 5.06 (1H, q), 2.9
(1H, bd s) y 1.68 (3H). , d) ppm, y su espectro uv era típico de una naftaquinona. Estos
datos indican que el compuesto tiene la estructura 2- (1-hy droxyet hyl) -4H, 9H-napht ho
[2,3-b] f uran-4, g-dione (2). La confirmación de la naturaleza secundaria de la función
hidroxilo se obtuvo por acetilación al monoacetato 5, que dio un espectro de 1H RMN que
muestra un cuarteto a 6,04 ppm, lo que indica un cambio de acilación característico de
aproximadamente 1 pprn para el protón de un alcohol secundario. El problema estructural
restante se refería a la naturaleza del centro quiral en la cadena lateral de la quinona 2. La
medición de la rotación específica dio un valor de 0 'dentro del error experimental, pero la
pequeña cantidad de muestra disponible hizo posible que una pequeña rotación pudiera
Han pasado sin ser detectados. El derivado de (+) a-metoxi-a-trifluorometilfenilacetato (6)
de la quinona se preparó de esta manera (5), y su espectro de 'H nmr mostró dos dobletes
de intensidad tres mitades cada uno para la señal de metilo a 1.87 ppm, y dos singlets para
el protón de furano a 6.90 y 6.78 ppm. Estos datos indicaron que la quinona 2 era
efectivamente racémica. Esta conclusión no excluye su condición de producto natural, ya
que se sabe que otros productos naturales, como la shikalkin (8) de naftaquinona, aparecen
como racematos (2)

El tercer compuesto se obtuvo en forma de agujas de color naranja, p.f. 156.5-157.5 ', y
mostró una actividad de 1.0 pg / d en el ensayo de cultivo de células KB. Su espectro de
masas indicó la presencia de un átomo de oxígeno adicional en comparación con el
compuesto 2, y su espectro de 'H nmr en CDCll mostró absorciones a 6 12.18 (1H, s), 7.75
(IH, dd, J = 2Hz, ~ Hz), 7.60 (1H, dd, J = 8, ~ Hz), 7.26 (IH, dd, J = ~ Hz, ~ Hz), 6.83 (1H,
s), 5.04 (1H, q, J = 6Hz), 2.4 (1H , bd) y 1.64 (3H, d, J = 6Hz) ppm. Su espectro uv fue
similar al de las otras naftaquinonas examinadas. El tratamiento con hidróxido de sodio
acuoso dio un color violeta, como se observó con juglone. Los datos proporcionados
anteriormente indican que este tercer compuesto es una naftaquinona.
602 Diario de productos naturales pol. 45, No. 5
que contiene un grupo peri-hidroxilo y un sistema de protones ABX aromático, junto con el
mismo sistema de furano sustituido que en la quinona 2. El compuesto es ópticamente
inactivo, y por lo tanto el centro quiral de la cadena lateral es racémico, como con la quinona
2. Las dos estructuras las quinonas posibles se restringen entonces a 3 y 4, en las que el
grupo hidroxilo adicional ocupa la posición 5 o la posición &. No se puede hacer una
elección entre estas dos estructuras sobre la base de los datos disponibles, ya que el átomo
de oxígeno del furano puede interactuar con el sistema quinona directamente y por
conjugación a través del doble enlace del furano; La comparación de los datos espectrales
con los de los compuestos de modelos simples da resultados ambiguos. Un intento de
preparar el derivado 2,3-dihidro por hidrogenación no tuvo éxito, produciendo una mezcla
de productos que incluía material de partida sin reaccionar. La falta de una muestra saciosa
impidió cualquier investigación adicional en este sentido. La estructura 3 se prefiere por
razones biogenéticas y por analogía con compuestos tales como lambertellin y a-
caryopterone (10) (6).

La estructura de la quinona 1 fue confirmada por su síntesis por la ruta que se describe a
continuación. El diacetato 11, preparado por acetilación reductiva de la quinona
correspondiente (7), se acetiló con un exceso de cloruro de acetilo y cloruro de aluminio en
cloruro de metileno (no se encontraron otras condiciones satisfactorias). El acetil diacetato
12 resultante se hidrolizó (condiciones Zempl) y se dejó oxidar en aire para producir un
material idéntico ('H nmr, hplc, pf) con la quinona original 1.
La observación de que las quinonas 1 y 2 muestran una actividad significativa en el cultivo
de células KB puede ser significativa, ya que el compuesto relacionado lapachol (9), que
tiene un valor EDSO de 4.4 pg / d en el cultivo de células KB (€ 9, mostró suficiente en Goo
actividad para llegar a un ensayo clínico en el Instituto Nacional del Cáncer. Se ha afirmado
que en la serie de quinonas, la actividad contra las células KB a niveles inferiores a 1 pg /
d parece correlacionarse con la actividad en el sistema de leucemia linfoide L-1210 in vivo
( 8). La cantidad limitada de compuesto 1 disponible para pruebas in vivo no permitió realizar
una determinación completa de su actividad, se encontró que no es tóxico pero está inactivo
en el ensayo de leucemia linfocítica P-388 a dosis de hasta 35 mg / kg. Sin embargo, es
muy probable que varios derivados de 1 puedan prepararse con una citotoxicidad mejorada,
y es posible que estos derivados muestren una mayor actividad in vivo. La aparición de
naftaquinonas en varios miembros del género Tabebuia i s bien conocido, y el lapachol (9)
es uno de los constituyentes principales de varias especies de Tabebuia (2). La biosíntesis
de la quinona 1, por lo tanto, puede ocurrir a través de la ciclación del lapachol para
deshidratar + iso-a-lapachone (13) (9), seguida por la escisión oxidativa del grupo metileno
exocíclico y la deshidrogenación del anillo dihidrofurano. Las quinonas 2 y 3 (o 4) podrían
luego derivarse mediante la simple transformación reductiva y la transformación oxidativa
de la quinona 1. Aunque las tres quinonas son compuestos relativamente simples, no han
sido reportados previamente en la literatura.

RIESGOS Y MÉTODOS EXPERIMENTALES: los materiales y métodos fueron

generalmente los mismos que los descritos anteriormente (10). Los espectros de masas se
registraron en un espectrómetro de masas de cromatografía de gases Varian-MAT 112 y
los espectros de RMN 1H en un espectrómetro de RMN Varian EM-390 con SepOc t 19821
Rao y Kingston: Quinones citotóxicos 603 tetrametil silano como patrón interno. Los
extractos, fracciones y compuestos se probaron bajo los auspicios del Programa de
Investigación y Desarrollo de Medicamentos del Instituto Nacional del Cáncer (11). Un
aislado se considera activo si muestra un EDsa <4 pg / ml en el cultivo de células KB y / o
un valor T / C> 125 en la forma P-388 in vivo. El material vegetal, PR 47208, fue recolectado
por el Laboratorio de Botánica Económica, Administración de Ciencia y Educación, BARC-
East, U.S.D.A., Beltsville, Maryland. Un espécimen de cupón está en depósito en el
Herbario del Arboretum Nacional, Servicio de Investigación Agrícola, U.S.D.A., Washington,
D.C.

AISLAMIENTO Y PROPIEDADES DE QUINONES IsoumoN.-Secado Tubebuiu

cassinmdes (0,5 kg) se molió en un molino de martillo y se extrajo con 95y de etanol a
temperatura ambiente y luego a 50 ". Los extractos de etanol combinados se evaporaron y
se repartieron como se describe en el texto para fracción soluble en metanol (3.6 9). La
repetición de la extracción a una escala mayor (5 kg de material vegetal) produjo 50 g de
fracción de metanol en bruto, que se sometió a cromatografía en gel de sílice con elución
con cloroformo de metanol, 9 La primera fracción principal eluida (5.4 g) fue citotóxica (EDro
1.9 pg / ml en el cultivo de células KB). La purificación de una porción de esta fracción (0.58
g) por tratamiento con éter y la recristalización del residuo de cloroformo el metanol produjo
quinona 1. La purificación de una segunda porción de esta fracción (0,5 g) se realizó
mediante cromatografía en gel de sílice, tlc preparativa (acetato de etilo-hexano, 80:20) y
separación final de la mezcla resultante de quinonas 2. y 3 (o 4) por HPLC preparativa [EM
Labs RP-8 embalaje, CHaCN-HtO (40:60)]. QUINONE 1.-Quinone 1 cristalizó a partir de
metanol en forma de agujas de color naranja, pf 224-5 '(25 mg). (Encontrado: C, 69.99; H,
3.14. Calc. Para Cl4H804: C, 70.00, H, 3.36%); espectro uv X max (EtOH) nm (log e), 253
(4.36), 272 (4.28), 341 (3.28); ms, m / z (intensidad relativa) 240 (M +, 89), 225 (100), 157
(20), 141 (12), 129 (11), 113 (28), 76 (12), 53 (11) , y 43 (19).
TETRAHIDRODACETATO 'I.-Quinone 1 (25 mg), se calentó con anhídrido acético (2 ml),
acetato de sodio (100 mg) y polvo de Zn (50 mg) a 140' durante 2 horas. La mezcla de
reacción se filtró en agua con hielo y el filtrado se procesó de la manera habitual para
producir un producto bruto. La purificación de este material por ptlc [cloroformo-metanol (99:
1)] y hplc [columna Partisil M9, cloroformo-hexano (1: 2)] produjo tetrahidrodiacetato 7 puro
como el producto de reacción principal. Cl8HI6O6re quires 328); espectro de IR (CHC13)
17-1770 cm-1 (vs), 1720 cm-1 (m); Espectro de RMN 1H (CDCl3): S = 7,8 (2H, m), 7,45
(2H, m), 5,18 (1H, dd), 3,45 (2H, m), 2,47 (3H, s), 2,44 (3H, s) y 2.32 (3H, s) ppm; ms, m /
z (intensidad relativa) 328 (M +, 9), 286 (34), 244 (loo), 202 (44), 201 (16), 115 (lo) y 43
(94). QUINONE $ .- Quinone 2 cristalizó a partir de metanol como agujas amarillas, pf 140-
142 '(10 mg). Cl4HlOO4 requiere 242.06); [a] D = o (CHC13); espectro uv X max (EtOH)
nm (log e) 250 (4.44), 275 inf. (4.10), 340 (3.27); ms, m / z (intensidad relativa) 242 (M +,
42), 240 (a), 227 (loo), 225 (51), 224 (23), 200 (56), 199 (43), 171 (25) , 115 (35), 113 (21),
105 (38) y 104 (18). ACETATO 5 .-- Quinona 2 se acetiló (ActO / pyr), y el producto se
purificó por tlc preparativo [acetato de etilo-hexano (40:60)] para producir acetato 5. 'H
espectro de RMN (CDClg) 6 = 8.2 (2H, m), 7.7 (2H, m), 6.87 (1H, s), 6.04 (IH, q, J = 7 Hz),
2.13 (3H, s) y 1.68 (3H, d, J = 7 Hz) PPm.

METHOXY® -TRIFLCOROMETHYLPHENYLACETATE 6 .- (+) Ácido metoxya-

trifluorometil-fenilacético (1,0 g) se calentó a reflujo con cloruro de tionilo (5 ml) durante 24
h. El cloruro de tionilo se eliminó (evaporador rotatorio) y el cloruro de ácido destilado en un
aparato Kugelrohr a 70 "y 1 mm. Quinone 2 (10 mg), disuelto en cloroformo (1 ml), se trató
luego con cloruro de ácido (8 gotas). ) y piridina (8 gotas). La mezcla de reacción se dejó
reposar a temperatura ambiente durante 24 horas y se trató de la forma habitual. El producto
bruto se purificó por tlc preparativo [gel de sílice, cloroformo-metanol (98: 2)] El producto
aislado tenía un espectro de RMN 1H que mostraba 6 = 8.2 (2H, m), 7.8 (2H, m), 7.7 (5H,
c), 6.90 (1 / 2H, s), 6.78 (1 / 2H, s) , 6.27 (1H, q), 3.54 (3H, dos s), 1.9 (3 / 2H, d), 1.84 (3 /
2H, d) ppm. QUINONE 3 (o 4) .- Quinone 3 (o 4) cristalizado de metanol como agujas
amarillo anaranjado, pf 156.5-157.5 "(10 mg). CI ~ HIOOZ requiere 258.05); [a] D = o
(CHClr); espectro uv X max (EtOH) nm (log e) 235 (inf., 4.28), 247 (4.41), 300 (3.81), 398
(3.71); espectro IR (CHC13) 3450, 1672 (s), 164O (vs) cm-1; ms, m / z (intensidad relativa)
258 (M +, 74), 243 (retrete), 216 (37), 215 (39), 187 (17), 123 (32) y 121 (24).

(+) ~ -METHOXY ~ -TRIFLCOROMETHYLPHENYLACETATE 6 .- (+) El ácido a-metoxya-

trifluorometil-fenilacético (1,0 g) se calentó a reflujo con cloruro de tionilo (5 ml) durante 24
h. El cloruro de tionilo se eliminó (evaporador rotatorio) y el cloruro de ácido destilado en un
aparato Kugelrohr a 70 "y 1 mm. Quinone 2 (10 mg), disuelto en cloroformo (1 ml), se trató
luego con cloruro de ácido (8 gotas). ) y piridina (8 gotas). La mezcla de reacción se dejó
reposar a temperatura ambiente durante 24 horas y se trató de la forma habitual. El producto
bruto se purificó por tlc preparativo [gel de sílice, cloroformo-metanol (98: 2)] El producto
aislado tenía un espectro de RMN 1H que mostraba 6 = 8.2 (2H, m), 7.8 (2H, m), 7.7 (5H,
c), 6.90 (1 / 2H, s), 6.78 (1 / 2H, s) , 6.27 (1H, q), 3.54 (3H, dos s), 1.9 (3 / 2H, d), 1.84 (3 /
2H, d) ppm. QUINONE 3 (o 4) .- Quinone 3 (o 4) cristalizado de metanol como agujas
amarillo anaranjado, pf 156.5-157.5 "(10 mg). CI ~ HIOOZ requiere 258.05); [a] D = o
(CHClr); espectro uv X max (EtOH) nm (log e) 235 (inf., 4.28), 247 (4.41), 300 (3.81), 398
(3.71); espectro IR (CHC13) 3450, 1672 (s), 164O (vs) cm-1; ms, m / z (intensidad relativa)
258 (M +, 74), 243 (retrete), 216 (37), 215 (39), 187 (17), 123 (32) y 121 (24).

SÍNTESIS DE QUINONE (1) DIACETATO DE ACETÍLICO (12) .- El diacetato 11 (200 mg),

preparado por acetilación reductiva de la uinona correspondiente (7), se trató con cloruro
de aluminio (8 g) y cloruro de acet 1 (5 ml) Cloruro de metileno (50 ml) en condiciones de
reflujo durante un total de 7 h. El producto se descompuso con HCl diluido y la porción
orgánica se extrajo con cloruro de metileno y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice.
La elución con cloroformo-acetato de etilo produjo una fracción bruta que cristalizó en
cloroformo-hexano para obtener el diacetato de acetilo 12 (10 mg), pf 176-7 "; (Encontrado:
C, 65.88; H, 4.09. Calc. Para CI ~ HII y : C, 66,28; H, 4,29); Espectro de RMN 1H: 6 7,98
(2H, m), 7,53 (2H, m), 7,47 (1H, s), 2,63, 2,60 y 2,57 ppm (3H cada uno, s); ms, m / z 326
(M +), 284, 242, 225, 199, 171, 105; espectro uv X max (EtOH) nm (log e) 220 (4.48), 265
(4.53) y 332 (4.26); espectro IR (CHC13): 1780, 1692, 1565, 1370, 1190, 1170 y 1045 cm-
1 QUISONE (1) .- Se disolvió diacetato de acetilo 12 (5 mg) en metanol (5 ml) y se trató con
unos pocos gotas de una solución diluida de metóxido de sodio en metanol. La mezcla se
dejó reposar durante 3 horas y luego se trató por neutralización, dilución con agua y
(Encontrado: M + 328. (Encontrado: M + 242.09. (Encontrado: M + 258.02. 604 Journal of
Natural Products [vol. 45, No. 5 Extracción con cloroformo. La purificación del producto
crudo por hplc (acetonitrilo-agua (40:60) en LiChrosorb RP-8, x "x 25 cm) produjo la quinona
1 como el único producto principal, pf 220". El producto tenía un tiempo de retención idéntico
en hplc como material natural, y su espectro de 1H nmr mostraba las mismas absorciones
que el producto natural. AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen al Dr. James A. Duke
y al personal del Economic Botany Laboratory, USDA, por el material de la planta, y a la
Sra. J. Yousten por la asistencia con las extracciones de la planta. El apoyo financiero del
Instituto Nacional del Cáncer (subsidio CA-12831) es reconocido con gratitud