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Guía de práctica N° 1

Bioseguridad, técnicas de desinfección y esterilización

Apellidos : ………………………..…………………..
BALTAZAR HUAROC
Sección : ………………………..………………...
Nombres : …………………………………………….
JOSE LUIS
Fecha : 02 /10 /2019 20 Duración: 45 MIN
Docente : Mg. C. D. Edna M. Yangali Gamarra
Tipo de Práctica: Individual (X) Grupal ( )

1. Indicaciones:

Cada estudiante identificará, describirá y expondrá el uso adecuado de los materiales,


reactivos y/o equipos del laboratorio que se le asigne, tomando en cuenta estrictamente las
medidas de bioseguridad.

2. Procedimientos:

2.1. Identifique y describa cada uno de los equipos, materiales y reactivos con que se
cuenta en el laboratorio.

 Autoclave: El autoclave es un aparato que permite


elevar la presión y la temperatura con lo que se
consigue un aumento en la temperatura de ebullición
del agua. El esterilizador a vapor está diseñado para
realizar un ciclo de esterilización completo y controlado
mecánicamente. El control realizado por el
microprocesador, asegura la correcta secuencia de
operación para cada tipo de carga.
 Horno de esterilización: La esterilización por calor
seco produce la destrucción de los microorganismos por
oxidación de sus componentes celulares Entre las ventajas
de este método de esterilización están que no deja
residuos, y es un método rápido y económico. Además
permite la esterilización de materiales no miscibles con el
agua como es el caso de polvos, aceites y grasas. Su
principal desventaja es que sólo debe emplearse para
esterilizar materiales termoestables.
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 Estufa eléctrica: Aparato que se usa para calentar un
producto como lo es los medios de cultivo, ya sea para
fundirlos o prepararlos.
Teniendo en cuenta el diseño que posee la estufa de
calentamiento, perilla de ajuste de energía , Parrilla y
Quemador, solo en este equipo se lleva a cabo el
calentamiento y o fusión de medios de cultivo, este debe
tener la capacidad de calentar el medio de cultivo de una
manera controlada manual, sin que este se pierda por la
ebullición
 Refrigerador: Cámara que permite garantizar un
almacenamiento en frió, la temperatura a menos se
especifique otras cosas debe ser de +3 o C +/- 2 o C,
excepto la conservación de muestras de análisis en donde
la temperatura deberá ser de +2+/-2 o C.
Se emplea para el almacenamiento de medios de cultivos
no inoculados y reactivos, muestras de análisis.

 Jarra de anaerobiosis: Se basa en un sistema


de generación de atmósfera para crear óptimas
condiciones de seguridad y rapidez para el
crecimiento de microorganismos anaerobios
(Anaerogen), microarofilos (campigen).

 Mechero Bunsen: Fue diseñado con el


propósito de obtener una llama que proporcione
máximo calor. El mechero se utiliza para crear y
mantener una zona de protección en los
alrededores de un área de trabajo.

2.2. Describa el uso correcto de los equipos, materiales y reactivos usados en ésta práctica
tomando en cuenta cada una de las medidas de bioseguridad apropiada.

AUTOCLAVE Es un equipo que se utiliza para la


esterilización de material tanto de limpio
como contaminado que se basa en la
producción de vapor contenido a altas
presiones.

CAMARA DE ANAEROBIOSIS Es una cámara con atmosfera controlada


por medio de gases especiales para el
cultivo de bacterias anaerobias.
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INCUBADORA Se usa para mantener a una temperatura
constante los cultivos microbiológicos y
asegurar el crecimiento de los
microorganismos.

CUENTA COLONIAS Se utiliza para aumentar la vista de las


colonias en la caja de Petri con el fin de
facilitar la identificación microscópica y el
conteo.

BAÑO MARIA Es un aparato que se utiliza para


desgelificar los medios de cultivo y
mantenerlos a una temperatura
constante.

GRADILLA Utensilio que sirve para colocar tubos de


ensayo este utensilio facilita el manejo de
los tubos de ensayo.

PINZAS PARA TUBO DE ENSAYO Permite sujetar tubos de ensayo.

ASA DE SIEMBRAS Se usan para inocular muestras o bacterias


puras en los medios de cultivo.

PIPETEADOR Se usa para absorver liquido a travez de la


pipeta.

JERINGAS Se utilizan para tomar eh inocular


sutancias.

CUBETAS PARA TINCION Se usan para contener los colorantes y


sumergir en ellas el material a teñor.

PORTA OBJETOS Se usan para depositar en ellos las muestras


que están sobre el portaobjetos.

CUBRE OBJETOS Se usan para cubrir las muestras que están


sobre el porta objetos.

CAJAS PETRI Se usan para contener los medios de


cultivo donde posteriormente se realiza la
siembra.

MECHERO BUNSEN Son utensilios metálicos que permiten


calentar sustancias estos presentan una
base de tubo una chimenea un collarin y
un vástago.
Con la ayuda del collarin se regula la
entrada de aire para lograr
calentamientos adecuados debemos
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regular la flama cuidadosamente.

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ESCOBILLAS Es esencial para el lavado de material de
vidrio los más comunes se utilizan para
tubos de ensayo buertas y balones.

CRISTAL VIOLETA Empleados como indicadores de Ph y


colorantes.
LUGOL Es una disolución de yodo molecular.
ALCOHOL ACETONA Sirve para realizar la decoloración de los
gram positivos.
SAFRANINA Es un colorante biológico de contraste que
se utiliza en la tinción de gram.
ACEITE DE INMERCION Aumentar la resolución de un microscopio
mediante la inmersión.

3. Resultados

4. Conclusiones

5. Sugerencias y /o recomendaciones

6. Cuestionario previo a la práctica:


6.1. Elabore una relación de los principales agentes físicos utilizados en microbiología

 Temperatura
 Desecación
 Radiaciones
 Ondas Sonoras
 Presión Hidrostática
 Presión osmótica

6.2. Enumere las características y propiedades de los agentes químicos más usados que
actúan sobre las bacterias.

 Cloro
 Hipoclorito de sodio
 Dióxido de cloro
 Cloraminas
 Peroxido de hidrogeno
 Ionizacion cobre/plata
 Bromo

6.3. Detalle los mecanismos de acción de cada uno de los agentes físicos y químicos, sobre
las células procariotas y eucariotas.
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6.4. Elabore un cuadro comparativo de los diferentes niveles de bioseguridad de los


laboratorios de microbiología.
6.5. ¿Cuál es el nivel de bioseguridad al que pertenece nuestro laboratorio?

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6.6. Mencione 5 reglas básicas de higiene y seguridad en el laboratorio
6.7. Mencione 5 elementos de protección personal
6.8. Mencione 3 de los procedimientos ante emergencias

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Guía de práctica N° 2
Descripción, manejo de equipo y material de laboratorio
Apellidos : ………………………..…………………..
BALTAZAR HUAROC
Sección : ………………………..………………...
Nombres : …………………………………………….
JOSE LUIS
Fecha : 02 /10/2019 20 Duración:.
Docente : Mg. C. D. Edna M. Yangali Gamarra
Tipo de Práctica: Individual (X) Grupal ( )

1. Indicaciones:
Cada grupo de trabajo deberá llevar para la práctica agua estancada y chicha de jora
madura para la observación de microorganismos (MO) al ejercitar el uso del microscopio
óptico compuesto.
Grafique cada uno de los materiales y equipos de uso en el laboratorio.
Pregunte sobre cualquier procedimiento y uso de materiales y/o equipos en el cual tenga
duda de su uso.

2. Procedimientos:

2.1. Identifique cada uno de los materiales, reactivos y equipos a usar en el laboratorio
de microbiología.

2.2. Describa el uso adecuado de cada uno de los materiales, reactivos y equipos a
usar en el laboratorio.

DIBUJO NOMBRE USO


Medir pequeñas masas. Las
balanzas analíticas modernas,
que pueden ofrecer valores de
precisión de lectura de 0,1 µg a
BALANZA 0,1 mg, están bastante
ANALITICA desarrolladas de manera que no
es necesaria la utilización de
cuartos especiales para la
medida del peso.
Conocer la masa de los objetos,
normalmente las balanzas
granatarias tienen una
capacidad para medir entre 2 y
2,5 kg con una precisión de hasta
BALANZA 0.1 o 0.01 g, puede llegar a tomar
medidas mucho más grandes
que las demás, permite hacer
mediciones de una manera
mucho más sencilla y rápida

Esterilizar material y medios


contaminados, con el fin de
eliminar, de forma confiable los
microorganismos que de otra
forma estarían presentes en
objetos que se utilizan en
AUTOCLAVE actividades de diagnóstico,
tratamiento o investigación en
instituciones de salud hospitales y
laboratorios.
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Medir la acidez y alcalinidad que
poseen las sustancias a través del
PH que estas poseen. Un
potenciómetro es un resistor al
que se le puede variar el valor de
su resistencia. De esta manera,
indirectamente, se puede
controlar la intensidad de
POTENCIOMETRO corriente que hay por una línea si
se conecta en paralelo, o la
diferencia de potencial de
hacerlo en serie.

Purificar el agua corriente,


mediante procesos controlados
de vaporización y enfriamiento. El
destilador permite obtener agua
de gran pureza, a partir del agua
potable como la suministrada
DESTILADOR normalmente por los servicios de
acueducto de los centros
urbanos.

Realizar incubaciones en
CAMARA DE anaerobiosis ya que en su soporte
ANAEROBIOSIS de acero inoxidable se pue den
instalar las bolsas de generación
de atmósfera libre de oxígeno.

Mantener y hacer crecer cultivos


microbiológicos o cultivos
celulares, regulando factores de
crecimiento viables como por
INCUBADORA ejemplo la temperatura, la
humedad y la ventilación.

Secar y esterilizar recipientes de


vidrio, los cuales provienen de un
lavado de laboratorio.
La esterilización que se hace
efectiva dentro de esta estufa es
denominada calor en seco y solo
HORNO se realiza con temperatura de 180
grados Celsius durante el tiempo
de 2 horas. El proceso de este es
que el vidrio al ser calentado, por
un aire de temperatura alta,
elimina la posibilidad que se
encuentre cualquier actividad
biológica.

Consiste en mantener, en un
ambiente controlado (espacio
refrigerado) diversos fluidos y
sustancias, para que los mismos se
NEVERA conserven en buenas
condiciones (mientras más baja
sea la temperatura, menor
actividad química y biológica).
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Sirve para contar colonias de
bacterias y microorganismos que
por lo general crecen en una
placa de agar. Las principales
ventajas que ofrece este
instrumento se encuentran en el
conteo fácil, rápido y seguro de
CUENTA COLONIAS las colonias bacteriológicas, así
como su fácil manejo .El contador
de colonias permite la
visualización de colonias
bacterianas en un fondo oscuro,
ya sea con o sin sistema de
iluminación, uniforme y brillante .

Realizar pruebas serológicas y


procedimientos de incubación,
aglutinación, inactivación,
biomédicos, farmacéuticos y
hasta industriales. Por lo general,
se utilizan con agua, pero
BANO MARIA también permiten trabajar con
aceite. Los rangos de
temperatura en los cuales
normalmente son utilizados están
entre la temperatura ambiente y
los 60 °C.

Aumentar el tamaño de los


objetos que son realmente muy
pequeños y que no se pueden ver
a simple vista, a su vez puede ser
MICROSCOPIO monocular, binocular entre otros.

Observar organismos o tejidos en


cultivo sin una preparación
previa, favoreciendo el
MICROSCOPIO monitoreo del estado de
ÓOPTICO INVERSO crecimiento, comportamiento y
demás parámetros involucrados
en el desarrollo del cultivo.

Separar células de los medios de


cultivo.
La micro centrífuga es una versión
CENTRIFUGA más pequeña de las centrifugas.
REFRIGERADA Es compacta, se coloca sobre la
mesa y procesa muestras de
hasta 2 ml. Es muy útil para
precipitar ADN y otras sustancias
que se trabajan en volúmenes
pequeños.
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DIBUJO NOMBRE USO
Sostener y almacenar gran cantidad de
GRADILLA tubos de ensayo, de todos los diámetros y
formas.

Sostener diferentes objetos de vidrio


(embudos de laboratorio, buretas) realizar
montajes más elaborados (aparato de
destilación). Se sujetan mediante una doble
PINZAS PARA TUBO nuez a un pie o soporte de laboratorio o, en
caso de montajes más complejos (línea de
DE ENSAYO Schlenk), a una armadura o rejilla fija.

DIBUJO NOMBRE USO

Mezclar o revolver por medio de la agitación


de algunas sustancias. También sirve para
AGITADOR DE VIDRIO. introducir sustancias líquidas de alta
reacción por medio de escurrimiento y evitar
accidentes.

Se emplea para transportar o arrastrar o


trasvasar inóculos (pequeño volumen que
contiene microorganismos en suspensión)
ASA DE SIEMBRAS desde la solución de trabajo también
llamada “solución madre” al medio de
cultivo (sólido o líquido) o de un medio a otro
(resiembra).

Succionar líquidos a través de la pipeta sin


tener que hacerlo directamente con la
boca. Los pipeteadores vienen de distintos
PIPETEADOR tipos. La mayoría pueden servir muestras
individuales. Pero vienen los que pueden
servir muestras múltiples, por medio de
multicanales: pipetas que sirven 8 o 12
muestras a la vez.

Disponer objetos para su examen


microscópico. El objeto a observar suele
disponerse sobre este artefacto para
PORTAOBJETOS después situarse en el microscopio y ser
observado. También disponibles
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cubreobjetos para cubrir la muestra


observada.

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Se coloca sobre un objeto que va a ser
observado bajo microscopio, el cual se suele
encontrar sobre un portaobjetos.
CUBREOBJETOS

Se utiliza en los laboratorios principalmente


para el cultivo de bacterias, mohos y otros
microorganismos, soliéndose cubrir el fondo
con distintos medios de cultivo (por ejemplo
agar) según él microorganismo que se
quiera cultivar. Es utilizado para poder
observar diferentes tipos de muestras tanto
biológicas como químicas, las cuales se
CAJAS DE PETRI encuentran encerradas dentro de la placa.
Es utilizado para el cultivo de bacterias y
otras especies relacionadas. También es
utilizado para masar sólidos en una balanza.

Tomar pequeñas cantidades de compuestos


o sustancias sólidas, especialmente las
ESPATULA granulares.

Calentar o esterilizar muestras o reactivos


MECHERO BUNSEN químicos. Es un instrumento de vidrio o metal,
destinado a proporcionar combustión.

2.3. Grafique cada uno de los materiales y equipos indicando detalladamente sus
partes.
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2.4. Con un gotero ubique una gota de agua estancada en un porta objetos, una
gota de chicha de jora en otra lámina porta objetos, cubra con un cubre objetos y siga
paso a paso el manejo del microscopio para lograr observar adecuadamente el
preparado.

2.5. Se les entregaran una lámina fijada y coloreadas para observarlos al microscopio
con la lente de inmersión. Ubique en la lámina portaobjeto una gota de aceite de
inmersión y observar con la lente respectiva, siga paso a paso las recomendaciones
para un buen uso y manejo del microscopio.

3. Resultados y observaciones:
Las observaciones y resultados de esta práctica se califican después de observar cómo
trabajan los estudiantes en equipo durante el desarrollo del resto de sus prácticas.

4. Conclusiones

Durante la realización de la práctica se pudo observar la importancia que tiene conocer


los equipos y materiales de laboratorio, su uso y manejo, ya que de esto dependerá la
buena ejecución de la práctica y la obtención de resultados más confiables y al mismo
tiempo conocer las propiedades de las sustancias a utilizar en el laboratorio, así como
también las medidas de primeros auxilios que deberán ser prestados en caso de
accidentes.

5. Cuestionario previo a la práctica


5.1. ¿Qué utilidad tiene la incubadora?
Sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares,
regulando factores de crecimiento viables como por ejemplo la temperatura, la
humedad y la ventilación.
5.2. ¿Qué utilidad tiene la jarra anaeróbica?
Es un recipiente ideal para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su
soporte de acero inoxidable se pueden instalar bolsas de generación de
atmósfera libre de oxígeno.
5.3. Explique el funcionamiento del autoclave.
Usan la alta presión y temperatura del vapor para matar patógenos. Para que
el autoclave sea efectivo los materiales a esterilizar deben ser saturados con
vapor. ... No existe algo como la “esterilización parcial”. La esterilización con
vapor funciona mediante desnaturalización de proteínas.
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5.4. ¿Para qué se utiliza el sistema de refrigeración en microbiología?


Es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiológicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura,
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la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido
de dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior. Las
incubadoras son esenciales para una gran cantidad de trabajos experimentales
en biología celular, la microbiología y en biología molecular y se utilizan para
cultivos celulares, tanto bacterianos como de células eucariotas.
5.5. ¿De cuántos sistemas se compone el microscopio?
Un microscopio compuesto es un complejo instrumento que se forma con tres
sistemas el óptico, el luminoso y el mecánico.
5.6. ¿Qué es poder de resolución?
Llamamos Poder de Resolución a la capacidad de un sistema óptico para
diferenciar entre dos puntos o líneas muy próximos entre sí.
5.7. ¿Cuáles son los objetivos más utilizados en la práctica microbiológica?
10x, 40x y 100x.
5.8. ¿Por qué se llama objetivo de inmersión y en que difiere el objetivo de inmersión
de los otros objetivos?

El objetivo es el elemento más importante y complejo del microscopio óptico. Es


importante porque en el objetivo es donde se produce la mayor parte del
aumento aportado por el microscopio. Su complejidad radica en el hecho de
que para cumplir con su función necesita distintas lentes de alta calidad y
precisión.

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Guía de práctica N° 3
Tinción y morfología de bacterias y hongos

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Fecha : / /2019 20 Duración:.
Docente : Mg. C. D. Edna M. Yangali Gamarra
Tipo de Práctica: Individual (X) Grupal ( )

1. COLORACIÓN DE BACTERIAS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES (BAAR) POR EL METODO DE ZIEHL


NEELSEN.

1.1 MATERIALES:
o Esputo positivo de enfermos tuberculosos.
o Batería de coloración: fucsina fenicada, azul de metileno al 0.3%, alcohol-ácido
nítrico al 33% o ácido clorhídrico al 3%.
o Batería Gram: cristal violeta, safranina, lugol, y alcohol-acetona.
o Láminas portaobjetos limpias, asa de siembra, lápiz marcador, gradilla.
o Microscopio y aceite de cedro, papel lente y solución desinfectante (fenol al 5%).
o Mechero de alcohol.
1.2 PROCEDIMIENTO:
o Muy cuidadosamente, tomar con el asa de siembra, un poco de esputo evitando
la formación de aerosoles.
o Extender sobre la lámina, sin legar a los bordes.
o Introducir el asa en un recipiente con arena. Seguidamente quemar el asa para
eliminar excedente de inóculo.
o Cubrirla preparación con colorante fucsina. Calentar tres veces hasta el
desprendimiento de vapores blancos. Evitar que hierva. A la evaporación por
calentamiento, agregar más colorante para una acción constante. (5 min)
o Diferenciar con alcohol ácido hasta que corra incoloro.
o Lavar con agua corriente.
o Re-colorear con azul de metileno durante un minuto.
o Lavar con agua corriente, prolongar el lavado para arrastre de los precipitados.
o Secar al ambiente o a la llama del mechero.
o Observar al microscopio con lente de inmersión y aceite de cedro.
o Resultados: los BAAR se observarán como bacilos delgados y un poco alargados,
teñidos uniformemente de rojo o con granulaciones rojo intenso sobre fondo rosado
del bacilo. La flora acompañante aparecerá teñida de azul.

2. COLORACIÓN DE HONGOS Y LEVADURAS

2.1 MATERIALES:
o Placas Petri con cultivo de hongos filamentosos.
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o Chicha de jora madura.


o Batería de coloración: Azul de lactofenol, azul de algodón, azul de metileno.
o KOH al 10 %.
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o Láminas portaobjetos limpias, asa de siembra, lápiz marcador, gradilla.
o Microscopio y aceite de cedro, papel lente y solución desinfectante (fenol al 5%)
3.2 PROCEDIMIENTO:
o Sobre porta objeto limpio y seco depositaremos 2 gotas de azul de lactofenol.
o Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente y pegarla en el extremo del asa
estéril, con cuidado pasaremos el extremo de la cinta adhesiva por el borde exterior
de la colonia, pegaremos la cinta adhesiva en el porta objetos que tiene el
colorante, retirando con cuidado el asa.
o Añade una gota de colorante sobre la cinta adhesiva y cubra la preparación con
un cubreobjetos. Observa al microscopio.
o Sobre otro porta objeto ubique una gota de chicha de jora, agregue una gota
de azul de metileno y observe al microscopio.

6. Resultados

La muestra de esputo
mucopurulenta, proveniente
de árbol bronquial, es la que
asegura mayor probabilidad
de que se puedan observar
bacilos

PREPARACION DE LA MUESTRA

ORDENAMOS LAS
MUESTRAS

MARCAMOS LOS
PORTAOBJETOS

PARTIMOS EL APLICADOR

SELECCIONAMOS LA
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PARTICULA MAS
PURULENTA

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DEPOSITAMOS EN EL
PORTA OBJETOS

EXTENDEMOS LA
MUESTRA
UNIFORMEMENTE
FIJAMOS EL EXTENDIDO
CUANDO ESTE
TOTALEMENTE SECO

TINCION DE ZIEHL NEELSEN

CUBRIMOS CON FUCSINA


FILTRADA

CALENTAMOS HASTA QUE


EMANEN VAPOR 3 VECES
DURANTE 5 MINUTOS

LAVAMOS CON AGUA

CUBRIMOS CON
DECOLORANTE POR 3
MINUTOS

LAVAMOS CON AGUA

CUBRIMOS CON AZUL DE


METILENO DURANTE 1
MINUTO

LAVAMOS CON AGUA

SECAMOS AL AIRE LIBRE


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COLORACION DE HONGOS Y LEVADURAS

Sembramos la chicha de jora en una placa de agar extracto


de levadura/malta.

1. Incubamos a T° de ambiente por 3 días.


2. Al finalizar observamos la colonización elevada, opaca, grande y bien
definida.
3. Con el aza de siembra recogemos parte de la colonia e vertimos una
gota de azul de lactofenol en una lámina y cubrimos con un cubre
objetos.
4. Observamos en el microscopio.
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1.1. Describa ¿Cuáles son las técnicas para preparar un frotis?
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o
cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen
agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.
1.2. Describa la técnica de Gram y su fundamento
La tinción de Gram es la técnica de coloración más sencilla y más útil en microbiología
diagnóstica. Esta técnica fue creada por el médico danés Hans Christian Gram en 1884,
quien logró clasificar a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a
la composición de la pared celular.
Esta es una técnica que presenta 4 pasos fundamentales: tinción, fijación con el
mordiente, decoloración y contratinción. Por tanto, esta técnica además de colorear a las
bacterias, también permite diferenciarlas.
1.3. Describa la técnica que debe utilizarse cuando las bacterias son ácido-alcohol
resistente.
Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan por
sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene
ceras.
CUBRIMOS CON FUCSINA
FILTRADA
CALENTAMOS HASTA QUE
EMANEN VAPOR 3 VECES
DURANTE 5 MINUTOS
LAVAMOS CON AGUA
CUBRIMOS CON DECOLORANTE
POR 3 MINUTOS
LAVAMOS CON AGUA
CUBRIMOS CON AZUL DE
METILENO DURANTE 1 MINUTO
LAVAMOS CON AGUA
SECAMOS AL AIRE LIBRE
1.4. ¿Qué es una bacteria ácido alcohol
resistente? Mencione dos nombres de bacterias y que enfermedades ocasionan.
Organismo que, una vez teñido de rojo con carbolfucsina, resiste la decoloración con
mezclas de ácido y de etanol; p. ej., Mycobacterium spp y algunas especies
de Nocardia. Así, en el diagnóstico clínico de Mycobacterium spp se hace uso de esta
propiedad para identificar las micobacterias en muestras de esputo teñidas con tinción de
Ziehl-Neelsen. Se piensa que la ácido-alcohol resistencia de estos organismos deriva de
la peculiar composición lipídica de su pared celular y, específicamente, de la presencia
de ácidos micólicos en ella.

1.5. ¿Cuáles son las tinciones que se utilizan para observar hongos?
La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis
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bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa para el diagnóstico de


enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas tintoriales
específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el

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diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción
de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los
hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad
fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de
etiología infecciosa.
1.6. ¿Cuál es la técnica de tinción para observar Cándida albicans?
Tincion Gram.

 ENCENDEMOS EL MECHERO
 1 GOTA DE AGUA EN EL PORTA OBJETOS
 ESTERILIZAMOS LA AZA DE SIEMBRA
 TOMAMOS MUESTRA DEL CULTIVO
 REALIZAMOS FROTIS
 USAMOS VIOLETA GENCIANA X 1 MINUTO
 LAVAMOS CON AGUA DESTILADA
 USAMOS LUGOL COMO MORDIENTE
 LAVAMOS CON AGUA
 DECOLORAMOS CON ALCOHOL ACETONA
 LAVAMOS CON AGUA
 DECOLORAMOS CON ZAFRANINA
 LAVAMOS CON AGUA
 SECAMOS A T° AMBIENTE
 MICROSCOPIO

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Guía de práctica N° 4
Medios de cultivo, técnicas de siembre y morfología de
bacterias y hongos
Apellidos : ………………………..…………………..
Sección : ………………………..………………...
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Fecha : / /2019 20 Duración:.
Docente : Mg. C. D. Edna M. Yangali Gamarra
Tipo de Práctica: Individual (X) Grupal ( )

1. INDICACIONES:
• Limpiar y esterilizar el área de trabajo.
• Prender los mecheros,
• Identificar y organizar el material dentro del área de trabajo,
• Rotular los tubos y cajas Petri,

2. PROCEDIMIENTO:

2.1 Sembrar en estría cruzada la placa de agar sangre.

Combinación de agar base generalmente agar


nutritivo se utiliza para ver la capacidad
hemolítica de los microorganismos patógenos
por lo que se considera un medio diferencial.

2.2 Sembrar para cultivo puro en placa de agar tripticasa soya.

Mezcla de dos o más bacterias en solución


salina o agua de peptona. Cultivos puros de
bacterias.

2.3 Sembrar por picadura en tubo con tripticasa soya


2.4 Sembrar en medio líquido con caldo cerebro-corazón
2.5 Sembrar en cada uno de los medios provistos por el alboratorio.

3. CUESTIONARIO PREVIO A LA PRÁCTICA

1.7. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo? Ejemplos


 SEGÚN SUS CUALIDADES FISICAS:
 Liquidos
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 Solidos
 Semisolidos

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 SEGÚN SU ORIGEN
 Naturales
 Sintéticos
 Semisinteticos
1.8. Mencione qué microorganismos se cultivan en cada uno de los medios
mencionados anteriormente.

3.1 Mencione los factores de crecimiento microbiano


3.2 Describa y dibuje los aspectos más comunes de las diversas colonias microbianas sobre
medio sólido.

Guía de práctica N° 5
Aislamiento de staphylococcus y streptococcus

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Sección : ………………………..………………...
Nombres : …………………………………………….
Fecha : / /2019 20 Duración:.
Docente : Mg. C. D. Edna M. Yangali Gamarra
Tipo de Práctica: Individual (X) Grupal ( )

Procedimientos:

1.1 A partir de los cultivos puros, realizar un frotis y teñido con la técnica de Gram y
observar al microscopio.
1.2 Sembrar los cultivos de Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis en
agar sangre y agar estafiloco 110. Incubar a 37ºC durante 24 horas. Observar la
hemólisis producida y el viraje de color de medio.
1.3 Sembrar las mismas cepas en agar manitol salado, caldo BHI, agar chocolate.
Incubar a 37ºC durante 24 horas y observar los cambios.
1.4 Prueba de la catalasa: con asa de siembra, recoger del centro del cultivo, y
colocar la muestra sobre un portaobjetos limpio, agregar con una pipeta Pasteur,
una gota de H2O2 al 30%. Observe los cambios.
1.5 A partir del cultivo de estreptococos beta, alfa, y gamma hemolíticos, hacer un
frotis y teñirlos con la técnica de Gram. Observar al microscopio.
1.6 Sembrar los cultivos de estreptococos en agar sangre. Incubar a 37ªC +/- 2ºC y
observar la hemólisis producida.

2. Resultados y observaciones:
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3. Conclusiones

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4. Sugerencias y /o recomendaciones

5. Cuestionario previo a la práctica


5.1 ¿Qué tipo de pigmento producen las cepas de estafilococos y estreptococos?
5.2 ¿Cuáles son las infecciones estafilocócicas del tracto respiratorio y de la piel?
5.3 ¿Por qué los estafilococos presentan resistencia a la penicilina?
5.4 Dependiendo de su acción hemolítica, ¿cómo se clasifican los estreptococos?
Describa la clasificación de Lancefield.

2-10-2019

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