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POLARIMETRÍA

Mg. Sc. Ing. Flor de María Vásquez Castillo


Introducción
 Para la caracterización y/o cuantificación de
azúcares se dispone de diversas técnicas
instrumentales: refractometría, polarimetría,
espectrofotometría, cromatografía, etc.
 Dentro de ellas, la polarimetría es una de las
técnicas más antiguas y de mayor uso por su
facilidad de manejo, bajo costo y rapidez en
la obtención de los resultados.
LUZ POLARIZADA
 Es la luz cuyos rayos están orientados en una dirección.
 La luz común, natural y sin reflejar, se comporta como si consistiera de un
gran número de ondas electromagnéticas vibrando en todas las direcciones
posibles, alrededor de la dirección de propagación.
 Si por algún medio se separa de la conglomeración natural solo aquellos
rayos vibrando en un plano particular, se tiene entonces la LUZ
POLARIZADA
LUZ POLARIZADA
 La polarización se consigue
haciendo pasar la luz a través
de un cristal de calcita, variedad
cristalina de carbonato cálcico.
Cristal de calcita
 Si la luz polarizada atraviesa
después un cristal de cuarzo, se
puede observar que a su salida
ha sufrido una rotación a la
derecha o a la izquierda.

Cristal de cuarzo
LUZ POLARIZADA
 Si un cristal de cuarzo hace girar la
luz hacia la derecha, otro que sea
su imagen especular lo hará rotar
hacia la izquierda.
 Las disoluciones que contienen un
isómero óptico actúan sobre la luz
polarizada de la misma forma que
el cristal de cuarzo.
 Cada isómero hace girar el plano
de polarización de la luz.
 La magnitud absoluta de la rotación
es la misma (Griffin, 1972).
LUZ POLARIZADA
.

LUZ POLARIZADA
ACTIVIDAD ÓPTICA
 La luz polarizada se caracteriza porque
vibra en un solo plano, pero hay algunas
sustancias que hacen que este plano
gire, en ese caso decimos que la
sustancia es ópticamente activa.
 Existen pares de compuestos orgánicos
que tienen la misma fórmula molecular,
las mismas propiedades físicas (punto
de fusión, solubilidad, etc.) y que
parecen tener idénticas estructuras,
pero poseen diferentes efectos sobre la
luz polarizada, es decir son ópticamente
activos y se denominan isómeros
ópticos.
ACTIVIDAD ÓPTICA
 Se trata de un fenómeno que tiene lugar tanto en
estado sólido como en disolución. Este
comportamiento es característico, por ejemplo, en
sustancias que contienen azúcar (zumos, miel, etc) y
en algunos líquidos como la esencia de trementina.
 Las moléculas de estos compuestos tienen átomos de
carbono unidos a cuatro átomos o grupos de
átomos distintos, y existen dos clases de ordenación
geométrica posible, ambas son imágenes especulares
no superponibles.
ACTIVIDAD ÓPTICA
 La actividad óptica es la propiedad que tienen
ciertas moléculas de hacer girar el plano de
luz polarizada.
 Un compuesto es ópticamente activo en
solución, cuando su estructura no puede
hacerse coincidir con la de su imagen
reflejada, es decir, cuando el compuesto no
posee un plano o centro de simetría.
ACTIVIDAD ÓPTICA
 Si un átomo de carbono tetraédrico está
unido a 4 grupos sustituyentes diferentes,
se dice que es asimétrico y produce una
actividad óptica.
ACTIVIDAD ÓPTICA
• Por ejemplo, el ácido
mesotartárico y otros
componentes “meso” no son
ópticamente activos.
• La actividad óptica no está
limitada a los átomos de
carbono, sino que puede
ocurrir en cualquier Ácido
mesotartárico
compuesto tridimensional
asimétrico (Willard, 1982)
ACTIVIDAD ÓPTICA
 Dos estructuras especulares no superponibles de
la misma molécula se denominan enantiómeros,
cada uno de ellos hace girar el plano de la luz
polarizada hacia un lado diferente, derecha o
izquierda.
 Si se mezclan dos enantiómeros en igual
proporción, resulta una mezcla denominada
racémica que no presenta actividad óptica
porque se compensan los dos efectos.
ACTIVIDAD ÓPTICA
 En la vida cotidiana
encontramos algunos símiles
de enantiómeros, por
ejemplo la mano izquierda es
la imagen especular de la de la
mano derecha y ambas no son
superponibles; también los
zapatos tienen una relación
enantiómera, una zapatería
sería una mezcla racémica.
¿Cómo puede detectarse la rotación
del plano de la luz polarizada?
 Se detecta y se mide por medio de un
instrumento denominado polarímetro,
que consta de:
 una fuente luminosa,
 un polarizador,
 un tubo para contener la muestra a
examinar y
 un segundo polarizador denominado
analizador.
Polarímetro
Esquema de un Polarímetro
Polarímetro
 Cuando el tubo está vacío, observamos que
el máximo de luz alcanza el ojo cuando los
dos polarizadores están orientados de tal
manera que ambos dejan pasar la luz en el
mismo plano.
 Si giramos el polarizador más cercano al ojo
observaremos que la luz se amortigua y
alcanza un mínimo cuando esté
perpendicular a su posición primitiva.
POLARÍMETRO
 Ajustamos los polarizadores de forma que pase el
máximo de luz, es cuando el instrumento da una
lectura de 0º .
 Si el tubo de muestra contiene una sustancia
ópticamente activa, el plano de polarización de la
luz habrá girado a medida que pasa a través del
tubo.
 Para detectar de nuevo el máximo de luz el
observador tendrá que hacer girar el eje del
analizador en dirección de las manecillas del reloj
o en dirección contraria.
POLARÍMETRO
 Si el analizador gira en dirección de las manecillas del reloj, se dice que
la rotación es positiva (+).
 Si la rotación es contraria a la de las manecillas del reloj, se dice que la
rotación es negativa (-).
 Se dice también que una substancia que hace girar la luz polarizada
plana en la dirección de las manecillas del reloj es dextrorrotatoria o
dextrógira (R) y la que hace girar la luz polarizada plana en dirección
opuesta es levorrotatoria o levógira (S).
POLARÍMETRO
POLARÍMETRO
 No solamente podemos determinar que el
compuesto ha girado el plano y el sentido de
giro, sino también la magnitud de éste viendo
el número de grados que debemos rotar
para ajustar la luz.
 La medida puede realizarse igualmente si
ajustamos los polarizadores en lugar de al
máximo de luz al mínimo,
colocándolos inicialmente con sus ejes
perpendiculares.
ROTACIÓN ÓPTICA
 La rotación óptica viene a ser el giro en un
cierto ángulo que sufre el plano de
polarización (con respecto a determinada
posición del mismo plano) de la luz
polarizada cuando ésta atraviesa una
sustancia orgánica (substancias ópticamente
activas), entre ellas los azúcares en estado
líquido o en solución.
Rotación específica 
 La “rotación específica” es un término empleado
para expresar las rotaciones producidas por
diversas sustancias, refiriéndolas a las mismas
condiciones, de tal manera que puedan ser
comparables entre si.
 Se define como “el ángulo de rotación que
produciría un líquido que en 1cm3 contuviera 1 g
de sustancia activa, cuando el rayo de luz
polarizada atravesara una capa de él de un dm de
espesor”. La rotación especifica se suele indicar
con el símbolo , cuando se refiere, como de
ordinario, a la luz amarilla del sodio y a la T° de
20°C, con: D
Rotación específica 
 La rotación específica, , para sustancias activas liquidas no
diluidas y cuya rotación (a) se ha medido a una T° diferente de
20°C, viene dada por la siguiente fórmula:

  = a
ld
Donde:
a= Angulo de desviación a la derecha (+) o a la izquierda (-)
observado a la T° del experimento, expresado en grados
de círculo y decimales de los mismos
l= longitud de la capa líquida en dm
d= peso específico del líquido a la T° del experimento, referido al
agua a 4°C.
Rotación específica 
 Para sustancias activas examinadas en
disolución (en disolvente inactivo), el poder
rotatorio específico viene dado por la
fórmula:
  = 100 a
lc
Donde:
c= concentración de la sustancia, en
gramos/100 ml de solución
Rotación específica 
 Si “p” es el tanto por ciento en peso (g/100g) de
sustancia activa en la solución y “d” el peso
especifico de la misma solución a la T° de la
observación (referido al agua a 4°C), entonces “c”
(g/100 ml) será igual a “p” x “d”, quedando la
fórmula anterior de la siguiente manera:

  = 100 a
lpd
POLARIMETRÍA
 Es una técnica de análisis basada en la
capacidad que tienen ciertas moléculas para
hacer girar el plano de polarización de la luz.
Estas moléculas se dice que tienen actividad
óptica.
 La polarimetría implica la medición del
cambio de la dirección de vibración de la luz
polarizada cuando interactúa con materiales
ópticamente activos.
FACTORES QUE AFECTAN LAS
DETERMINACIONES POLARIMÉTRICAS
La rotación exhibida por una sustancia
ópticamente activa depende de:
1. La T°
2. La concentración del material ópticamente
activo
3. El disolvente utilizado
4. La longitud de onda de la luz empleada
5. La longitud del tubo de medición
6. La mutarrotación
1.Temperatura
 La variación en la rotación específica con la T° es
aproximadamente lineal, pero el coeficiente de
temperatura difiere ampliamente de una
substancia a otra.
 Por ejemplo, la rotación específica de soluciones
de ácido tartárico puede variar hasta 10% por
grado; para la sacarosa, por el contrario, la
variación es menor de 0.1% por grado. (Willard,
1986).
 Según Maier (1968), una variación de 1°C puede
originar un error de hasta 0.016 grados angulares.
1.Temperatura
 Las variaciones de T° causan expansión y contracción del líquido y
un cambio consecuente en el número de moléculas activas en el
trayecto de la luz.
 Los cambios de T° tienen varios efectos sobre la rotación de una
solución o de un líquido.
 Un incremento en la T° aumenta la longitud del tubo; también
disminuye la densidad, reduciendo así el numero de moléculas
involucradas; causa cambios en el poder rotatorio de las
moléculas en si mismas, debido a asociaciones o disociaciones,
aumento de movilidad de los átomos y afecta otras propiedades
(Willard, 1982).
1.Temperatura
 Las mediciones polarimétricas normalmente se hacen a
20°C.
 El efecto de la T° puede expresarse con la siguiente
ecuación:
c' = c20 + Z (t − 20)
Donde:
Z= coeficiente de temperatura de rotación
t= Temperatura en °C

Las sustancias varían ampliamente en sus valores de Z


(Willard, 1982)
1.Temperatura
 Según Villavecchia (1949), la T° tiene
influencia muy pequeña en ciertas
sustancias, mientras que en otras es
notable; en algunos casos la rotación
aumenta, mientras que en otras disminuye
al aumentar la T°.
 Para eliminar este factor de variación, las
mediciones se hacen a una misma T°
generalmente a 20°C.
2. Concentración
 La relación entre la rotación específica, , y la concentración,
generalmente puede expresarse como una de las tres
ecuaciones propuestas por Biot:

  = A + Bq....................( I )
  = A + Bq + Cq 2 ..........( II )
  = A + Bq
...............( III )
C+q
Donde, q: % de disolvente en la ecuación
A,B,C : Constantes
La ecuación (I) representa una recta; la (II), una parábola; y la (III) una
hipérbola. Las constantes A, B y C se determinan con varias mediciones a
diferentes concentraciones (Willard, 1982)
2. Concentración
 La rotación es directamente proporcional a la concentración
(Ley de Biot) sólo cuando no hay interacciones entre las
moléculas del soluto y disolvente u otros componentes de la
solución, como en el caso de la fructosa.
 Ocurre lo contrario con el ácido tartárico: se presentan fuertes
desviaciones (la rotación específica es mas pequeña para
concentraciones elevadas).
 Sin embargo, la mayoría de sustancias con actividad óptica
satisfacen la ley de Biot (Maier, 1968).
3. Disolvente
 Para algunas sustancias activas, la rotación varía con el disolvente
empleado, en igualdad de las demás condiciones (Villavecchia,
1949). Según Willard (1986), casi siempre se encuentra que la
rotación específica de un compuesto varía con la naturaleza del
disolvente, por lo que no es posible establecer ningún disolvente
de referencia.
 Además, la rotación especifica de un disolvente dado puede no
ser enteramente independiente de la concentración, aunque la
variación en la solución diluida suele ser pequeña. Debido a estos
efectos, es práctica común designar la clase de disolvente y la
concentración de la solución al indicar una rotación especifica.
3. Disolvente
 La mayoría de los disolventes orgánicos
poseen coeficientes de expansión térmica
de aproximadamente 0.1% por °C.
 En consecuencia, una medida precisa de la
rotación específica en una solución,
requiere de un cuidadoso control de la T°,
tanto durante la realización de la medida
como durante la preparación de la solución.
4. Longitud de onda de la luz
polarizada
 Las rotaciones de todas las sustancias son
mayores a medida que disminuye la longitud
de onda.
 Las variaciones no son iguales ni siguen una
relación lineal, por lo que los cálculos no
son posibles.
 Para eliminar este factor, se hace la medición
a una misma longitud de onda, generalmente
luz de sodio, D (5,900 Å)
5. Longitud del tubo de
medición
 La longitud del tubo de medición (espesor de la
capa atravesada por la luz) tiene influencia sobre la
rotación específica en la medida en que cuanto
mayor es la capa de líquido que se interpone a la
luz, mayor será el número de moléculas que
interaccionan con la luz polarizada.
 La longitud empleada como normal es de 10 a 20
cm para líquidos y 1 mm para solidos.
6. Mutarrotación
 En algunas sustancias activas, la solución recién
preparada presenta una rotación diferente de la que
presenta al cabo de algún tiempo, por lo que su poder
rotatorio no adquiere un valor definido y constante, sino
que después de pasado un tiempo mas o menos largo,
fenómeno conocido como mutarrotación.
 Dichas sustancias pasan de una estructura a otra con un
poder rotatorio diferente (mutarrotación).
 Otras sustancias, pueden girar de tal manera como para
volverse asimétricas y así pierden su poder rotatorio
(Racemización)
6. Mutarrotación
 La mutarrotación y racemización no solo
están influidas por el tiempo, sino también
por el pH, la temperatura y otros factores.
 Por lo tanto, cuando se expresan los
resultados, es muy importante indicar las
condiciones bajo las que se han hecho las
mediciones polarimétricas (Willard, 1982).
III. APLICACIONES DE LA
POLARIMETRIA
1. Identificación y caracterización de
sustancias.
 La rotación óptica de un compuesto puro bajo
condiciones específicas proporciona una
constante física fundamental útil para fines de
identificación.
 La actividad óptica es característica de muchas
sustancias naturales como aminoácidos,
esteroides, alcaloides y carbohidratos.
III. APLICACIONES DE LA
POLARIMETRIA
2. Cuantificación de sustancias
 Las determinaciones polarimétricas
permiten cuantificar sustancias ópticamente
activas.
 Para esto se emplean curvas de calibración
empíricas que relacionan la rotación óptica
con la concentración.
 Estas gráficas pueden ser lineales,
parabólicas o hiperbólicas.
III. APLICACIONES DE LA
POLARIMETRIA
2. Cuantificación de sustancias
 La aplicación más importante de la polarimetría es en la
determinación cuantitativa de hidratos de carbono
(sacarosa, azúcar invertido, glucosa y dextrina).
 También se puede determinar cuantitativamente por
polarimetría los ácido láctico y tartárico, así como
proteínas, aminoácidos y alcaloides.
 En el caso de los aminoácidos y sus derivados, el valor de
la medida y a veces también el sentido de la rotación,
cambian fuertemente con el pH: la asparagina es levógira
en agua y dextrógira en ácido clorhídrico
III. APLICACIONES DE LA
POLARIMETRIA
 A través de esta medida se puede hallar la concentración, contenido y
pureza de la sustancia. La polarimetría es empleada en control de
calidad, control de procesos e investigación farmacéutica y química, en
aceites esenciales, saborizantes e industria alimenticia. Separación de
isómeros ópticos.
 Dentro de la investigación es frecuente el uso para, aislamiento de
cristalizados, evaluar y caracterizar compuestos ópticamente activos,
reacciones cinéticas, monitorización y cambios de concentración así
como actividades.
 En el campo de el control de calidad y control de procesos la
polarimetría se usa las mas diferentes ramas, como farmacéutica
(aminoácidos, analgésicos, cocaína, dextrosa, codeína, antibióticos,…)
,alimentación(carbohidratos, glucosa, maltosa, monosacáridos
naturales), química (biopolímeros, polímeros sintéticos, polímeros
naturales…), etc.
Ventajas y desventajas de la
polarimetría frente a otros métodos
Ventajas
 Manejo sencillo
 Pocas perturbaciones (aparte de las producidas por
sustancias ópticamente activas y por coloración intensa).
 Bajo costo
Desventajas
 Aplicable a un número de sustancias relativamente pequeño
 Interferencia por impurezas(otras sustancias activas:
aminoácidos, proteínas, alcoholes)
 Imposible la determinación de trazas
 Se requiere mayor cantidad de muestra que en
refractometría, por ejemplo.
V. EL POLARIMETRO
 El polarímetro es el instrumento utilizado
para medir la dirección y la magnitud de la
rotación óptica de las disoluciones.
Esquema óptico de Polarímetro Zeiss

1 - Entrada da luz de Na 7 - Analizador


2 - Lente de iluminación 8 - Objetivo para focalización
3 - Filtro de luz 9 - Ocular para visualización.
4 - Polarizador 10- Lupa
5 - Placa 11 – Anillo de lectura
6 - Cilindro conteniendo la solución a ser 12 - Tornillo de accionamiento de la
medida escala
V. EL POLARÍMETRO
 El foco o la lámpara es una fuente de radiación de longitud de
onda determinada; generalmente se utiliza la raya D del sodio
(5,893 Å) (ésta se obtuvo originalmente introduciendo una sal
sódica en una llama de gas).
 Cuando no se cuenta con focos de un determinado tipo de luz
(luz de sodio), se utilizan filtros apropiados que eliminan otras
líneas; en el espectropolarímetro se usa un monocromador
(Maier, 1968).
 También se emplean lámparas de vapor de Hg de las que se aisla
la línea en 546 nm o 5460 Å) o un sistema apropiado de filtros.
V. EL POLARÍMETRO
 El polarizador y el analizador, por lo
general, están compuestos por prismas de
Nicol para producir la luz polarizada en un
plano y determinar el ángulo con el que la
muestra hace girar la luz.
 En el analizador los prismas giran hasta
compensar la desviación del plano de
polarización producida por la muestra de
análisis
V. EL POLARÍMETRO
 El tubo de muestra, de forma cilíndrica, es
generalmente de 10 a 20 cm de longitud.
 Los extremos son discos de vidrio planos y paralelos que
se fusionan a las paredes del tubo o que se mantienen
colocados con tapones enroscados.
 Estos tubos tienen uno de sus extremos más ancho para
recoger las burbujas de aire.
 Mientras se efectúan las mediciones, el tubo con la
muestra debe permanecer a T° constante, para lo cual
están rodeados de una camisa para controlar la T°.
V. EL POLARÍMETRO
 Como detector actúa normalmente el ojo, aunque algunos
polarímetros poseen células fotoeléctricas como detectores.
 Algunos polarímetros no miden grados angulares, sino están
calibrados para medir directamente el % de sacarosa, por lo que
se les llama sacarímetros.
 Estos instrumentos pueden también emplearse para determinar
otras sustancias ópticamente activas, distintas de los glúcidos,
pero el analista de los alimentos los usa mayormente para
determinar azúcares.
 Entre los otros compuestos que se pueden determinar se tiene
al ácido levomálico, el que según el método de la AOAC
incrementa su rotación por acción de las sales de uranio.
Manejo del polarímetro.
Mediciones polarimétricas
 Cuando el nonio está en cero, las dos mitades del campo deben
estar iluminadas igualmente; en caso contrario, existe una
desviación del cero que se puede corregir mediante un tornillo
afinador especial.
 Luego se interpone con la solución problema y se observa de
nuevo.
Manejo del polarímetro.
Mediciones polarimétricas
 Si el líquido no es ópticamente activo, el campo todavía
permanece uniformemente iluminado (b); en cambio si es
ópticamente activo, las dos mitades aparecen iluminadas con
diferente intensidad: la derecha mas oscura si la sustancia es
dextrógira (a), y con la izquierda mas oscura si es levógira (c).
Mediciones con el polarímetro

Escala angular

Escala
Internacional del
azúcar
Manejo de la perilla micrométrica
Manejo del polarímetro.
Mediciones polarimétricas
 Se gira entonces el analizador mediante el botón, de
modo que el nonio se mueva hacia la derecha en el
primer caso y hacia la izquierda en el segundo, hasta
que las dos mitades del campo vuelvan a aparecer
igualmente iluminadas.
 Entonces se lee sobre la graduación el ángulo de
desviación c y de él se deduce, mediante fórmulas, el
poder rotatorio específico de las sustancias.
Algunas consideraciones para el análisis
polarimétrico
 La rotación óptica se lee cuando al mirar
por el telescopio del polarímetro se observa
la máxima oscuridad.
 Este punto es difícil de precisar y por esta
razón conviene colocar el polarímetro en
una habitación oscura o bien cubrir con un
paño oscuro el tubo del polarímetro y la
cabeza del observador.
Algunas consideraciones para el análisis
polarimétrico
 La fuente luminosa puede ser una lámpara de
sodio (5,983 Å) que ha de encenderse por lo
menos unos 10 minutos antes del comienzo
de la prueba para evitar fluctuaciones en la
intensidad, que ocurren durante el periodo de
calentamiento de la lámpara.
 Algunas veces también se usa lámparas de Hg,
pero su rendimiento experimental no se
conoce tan bien como el anterior.
Algunas consideraciones para el análisis
polarimétrico
 Existen tubos de 10, 20, 40 cm de longitud, siendo los mas
recomendables los de 20 cm, en los casos de sustancias
ópticamente activas dentro de concentraciones razonables.
 Los tubos de 40 cm son difíciles de manipular y se usan
cuando la concentración es baja.
 Soluciones coloreadas exigen tubos de 10 cm.
Algunas consideraciones para el análisis
polarimétrico
 Los tubos tienen una porción ensanchada, la
que sirve para evitar que la burbuja de aire,
que es difícil eliminar cuando se llena el tubo,
interfiera en la lectura.
 Para esto se sacude el tubo a fin de que la
burbuja se desplace hacia la porción
ensanchada.
 No dejar huellas dactilares sobre las lentes
 Los tubos se lavan con agua fría y luego con
acetona y éter.
Algunas consideraciones para el análisis
polarimétrico
 Al comenzar la prueba, el polarímetro
debe ajustarse a cero frente al agua
destilada.
 Las determinaciones de rotación óptica
hay que hacerlas a una temperatura lo mas
próxima posible a 20°C.
 Al indicar una rotación específica debe
siempre especificarse el disolvente o la
disolución, ya que el signo de la rotación
puede cambiar con el disolvente.

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