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ESCHERICHIA COLI
Resumen
Se tiene conocimiento de que todos los microorganismos como E. Coli que
aminoácidos provienen de puede fabricarse sus propios
intermediarios, del ciclo del acido aminoácidos a partir de amoniaco.
cítrico o de la vía de las pentosas
fosfato, sobre esta base se realizo el En el presente informe se presentan las
siguiente trabajo. vías de la biosíntesis de aminoácidos, en
un cultivo de E. Coli; a la cual se le añadió
Los distintos organismos presentan glucosa marcada con 14C y un sustrato
considerables diferencias en su carbonado o aminoácidos no radioactivos,
capacidad para sintetizar los 20 en donde se demuestra la radioactividad
aminoácidos estándar. Mientras que la de estos compuestos sobre los
mayor parte de bacterias y plantas aminoácidos.
pueden sintetizar los 20 aminoácidos,
los mamíferos solo pueden sintetizar la Con este trabajo deducimos que los
mitad, generalmente aquellos cuyas vías aminoácidos competidores son precursores
metabólicas son sencillas, estos son los de la biosíntesis de otros aminoácidos (los
denominados aminoácidos no aminoácidos no esenciales), que por
esenciales, que no son necesarios procesos de transaminación y aminación
obtenerlos en la dieta, ya que el reductiva de los intermediarios del ciclo de
organismo con simples reacciones Krebs y el piruvato. Así obtuvimos 3
puede sintetizarlos. El resto, los familias: Familia del Ácido Aspártico,
aminoácidos esenciales, deben Familia de Ácido Glutámico y Familia de
obtenerse de la dieta. Existen la Serina.
Introducción
La síntesis de aminoácidos se Los 20 aminoácidos estándar(o
desarrolla a un ritmo variable, proteinogénicos) se dividen en 5 familias
dependiente de las necesidades que en relación a su biosíntesis. Los miembros
existan que existan en la célula de cada familia derivan a partir de
respecto a cada aminoácido en precursores comunes generados en el
particular. En los mamíferos existen ciclo de Krebs, en la glicólisis o en la vía
rutas anabólicas para los aminoácidos de las pentosas fosfato.
considerados como esenciales
(Alanina, Arginina, Asparragina, Los aminoácidos glucogénicos son los
Aspartato, Cisteina, Glutamato, que dan lugar a una producción neta de
Glutamina, Glicina, Prolina, Serina, piruvato o intermediarios del Ciclo del
Tirosina) TCA, tales como α-cetoglutarato u
oxaloacetato, que son precursores de la
glucosa vía gluconeogénesis. Todos los treonina, triptófano, y tirosina dan lugar a
aminoácidos excepto la lisina y la leucina precursores de la glucosa y de ácidos
son al menos en parte glucogénicos. La grasos y así son caracterizados como
lisina y la leucina son los únicos glucogénicos y cetogénicos. Finalmente,
aminoácidos que son solamente debe ser reconocido que los aminoácidos
cetogénicos, dando lugar solamente a tienen un tercer posible destino. Durante
acetil-CoA o a acetoacetil-CoA, ninguno etapas de hambruna los esqueletos de
de los cuales puede traer la producción carbono reducidos se utilizan para la
neta de la glucosa. producción energética, con el resultado que
se oxida a CO2 y H2O.
Un grupo pequeño de aminoácidos
comprendidos por isoleucina, fenilalanina,
Materiales y Métodos
En el experimento realizado para aminoácidos fueron separados por
investigar las vías de la biosíntesis de cromatografía bidimensional, en la cual
aminoácidos, un cultivo de Escherichia se hizo una cromatografía ascendente
coli que crecía exponencialmente en un vertical y otra horizontal (girando el
medio de glucosa con sales fue dividido papel 90º), usando solventes distintos.
en dieciocho cultivos separados.
A los aminoácidos separados se los
Se añadió a cada cultivo, glucosa reconoció usando la ninhidrina (reacciona
marcada con 14C y un sustrato con todos los aminoácidos alfa cuyo pH
carbonado (oxalacetato, α-cetoglutarato, se encuentra entre 4 y 8), dando una
piruvato, acetato y semialdehído coloración que varía de azul a violeta
glutámico) o un aminoácido (ác. intenso. Este producto colorido (llamado
aspártico, ác. glutámico, homoserina, púrpura de Ruhemann) se estabiliza por
serina, acetato, treonina, valina, arginina, resonancia, la coloración producida por la
isoleucina, glicina, leucina y prolina) ninhidrina es independiente de la
no radioactivo. coloración original del aminoácido. La
prolina da coloración amarilla. Por su
Después de crecer por una generación, sensibilidad esta reacción se emplea para
los organismos fueron lisados, aislando valoración cuantitativa de aminoácidos
luego fracciones de lípidos, ácidos por colorimetría.
nucleícos y proteínas residuales. Se
usaron solo las fracciones proteicas las Los aminoácidos separados fueron
que fueron primero, hidrolizadas en eluídos individualmente, determinándose
medio básico y a altas temperaturas, para su concentración y midiéndose la
romper el enlace peptídico, obteniendo radioactividad en una alícuota de la
aminoácidos. Los muestra por medio de un fotocolorímetro.
Resultados
La actividad específica de cada aminoácido, se determino sabiendo la radioactividad de cada
aminoácido. La actividad específica de los aminoácidos se encuentra en la Tabla I.
La actividad específica de cada aminoácido debería calcularse como un porcentaje del valor
control, encontrando de esta manera el porcentaje de inhibición de cada uno de los
aminoácidos y sustratos carbonaos no radioactivos sobre la glucosa marcada.
1) Según los resultados la Tabla I y la Tabla II, vemos como los aminoácidos afectan la
radioactividad del mismo aminoácido y no de otro más.
Alanina
Arginina
Glicina
Isoleucina
Leucina
Prolina
2) En los resultados de las tablas también podemos observar que algunos aminoácidos aparte de
afectar la radioactividad del mismo aminoácido, afectan a otros diferentes a él y que otros
aminoácidos que no son parte de las proteínas también afectan la radioactividad de otros
aminoácidos que si forman parte de las proteínas. A estos aminoácidos los llamaremos
competidores.
Ácido Ácido
Serina Treonina Valina
Aspártico Glutámico
Prolina Valina
Treonina
Semialdehido
Homoserina
Glutamico
Isoleucina Prolina
Metionina
Treonina
3) También trabajamos con alfa cetoácidos (α-cetoglutarato, oxalacetato, piruvato, acetato),
observamos que estos compuestos también tienen efecto sobre la radioactividad de ciertos
aminoácidos. Por conocimientos de la vía metabólica de ciclo del acido cítrico, sabemos que
intermediarios de esta vía por reacciones química se convierten a ciertos aminoácidos.
Grafico III. α-cetoacidos que tienen efecto sobre la radioactividad de los aminoácidos.
α-
Acetato cetoglutarato
Oxalacetato Piruvato
Treonina Prolina
Treonina
Valina
4) Revisando los resultados de la Tabla II y los Gráficos I, II y por último el III, nos dimos
cuenta de que uno de los aminoácidos que más efecta o inhibe la síntesis de otros
aminoácidos era el acido aspártico, lo relacionamos con un aminoácido, pudimos
percatarnos que la mayoría de los aminoácidos que eran afectados por la Homoserina (Ile,
Met,Thr) también eran afectados por el Ác. Aspártico, luego observamos que la Treonina
afecta la radioactividad de un aminoácido (Ile), aparte del mismo afecta, con quien se
acaba la síntesis ya que como se señaló en el primer punto, es una proteína de fi n de
ciclo.
Para ver mejor estos resultados, elaboramos la Tabla III, que nos mostrara la relación
entre los aminoácidos.
5) Otro aminoácido que afecta a varios aminoácidos es el Ácido Glutámico (Arg, Asp, Glu,
Pro, Thr), el único aminoácido que afecta la síntesis de aminoácidos coincidentes con el
Ac. Glutámico es el Semialdehído Glutámico (Pro).
6) Y por último, observamos que la Serina también es otro aminoácido que afecta la síntesis
de varios aminoácidos aparte del mismo (Ala, Cys,Gly, Ala,Leu, Val) y vemos que
coincide con un aminoácidos que afecta la Valina (Leu ) aparte del mismo.
En el punto 1) observamos que habían aminoácidos que solo afectaban la síntesis de los mismo
aminoácidos, como por ejemplo Alanina que inhibe a la misma en un 80%, y a ningún otro
aminoácido mas. Así también la Glicina que inhibe a la misma en un 50%, no afecta a ningún
otro aminoácido más. Entonces llegamos podemos decir que estos aminoácidos no son
precursores de ningún otro, si no que son el producto final, son los que terminan la vía
metabólica de la biosíntesis de aminoácidos.
En el punto 2) observamos que había aminoácidos que aparte de inhibir la síntesis del mismo,
afectaban a más aminoácidos, como por ejemplo el ác. aspártico que inhibe a la isoleucina y
lisina en un 40%, asi como también inhibe a la Metionina en un 55% y a la treonina en un 75%,
aunque en los resultados de la tabla también aparece que afecta al glutamato y a la prolina, no
podemos asegurar esto, pues también tenemos conocimiento de que los aminoacidos se
sintetizan a partir de los intermediarios del ciclo de Krebs, por una reacción química que será
explicada más adelante. Entonces podemos deducir que estos aminoácidos participan en la
síntesis de esos aminoácidos a los que inhiben, a estos aa los llamamos competidores.
Basado en la vía catabólica en la que participen, los aminoácidos pueden tener un destino en el
cual sus esqueletos de Carbono sean incorporados en intermediarios metabólicos que puedan
posteriormente transformarse en glucosa, estos son los aminoácidos glucogénicos. Los
aminoácidos también pueden ser cetogénicos, y en este caso sus esqueletos de C son en forma
de acetoacetato, el mismo que se puede transformar posteriormente en acetil-CoA.
Por ejemplo tenemos que el glutamato se sintetiza a partir de NH4+ y α-cetoglutarato por medio
de la glutamato deshidrogenasa. La reacción es la siguiente:
Otro ejemplo es el Aspartato y por este se explica porque no tomamos en cuenta al glutamato
como un aminoácido que inhibe el ác. Aspártico:
Como vemos por el mismo proceso de transaminaciόn, el glutamato transfiere su grupo amino
al oxalacetato para convertirlo en Aspartato. Por este motivo no tomamos en cuenta al
glutamato.
Entonces ya después de esta discusión, por ultimo podemos establecer la familia de síntesis de
aminoácidos:
Familia del Acido Aspártico
De los datos obtenidos vemos que el Acido Aspartico afecta síntesis de Treonina,
Metionina, Isoleucina y Lisina.
La Homoserina afecta a síntesis de Treonina, Metionina e Isoleucina.
La Treonina participa en la síntesis de Isoleucina.
*No se considera a la glutamato pues se sabe que es producto de las reacciones de los
intermediarios del ciclo de Krebs, desde Oxalacetato que llega a ser α-cetoglutarato y
por transaminaciόn se convierte a glutamato.
*La prolina no se considero, pues no es totalmente seguro que el ácido aspártico
participe en la síntesis de este aminoácido, pues su porcentaje de inhibición es
demasiado bajo, mucho mas que la inhibición del propio Aspartato.
Relacionándolos:
Metionina
Homoserina
Treonina Isoleucina
Acido
Aspártico
Lisina
Familia del Ácido Glutámico
De los datos obtenidos en clase nos damos cuenta que el Acido Glutámico afecta la
síntesis del mismo Acido Glutámico, de la Prolina, de la Arginina, del Acido Aspártico y
de la Treonina.
Continuamos con el α-Cetoglutarato que a su vez afecta al Acido Glutámico, a la Prolina,
a la Treonina y al Acido Aspártico.
Mientras que el Semialdehído Glutámico afecta prácticamente solo la síntesis de Prolina,
es decir la Prolina.
Relacionándolos:
Prolina
Semialdehído
Glutámico
Glutamina
α-Cetoglutarato Treonina
Ácido Aspártico
Ácido
Glutámico
Arginina
Familia de la Serina
Relacionándolos:
Cisteína
Alanina
Serina Piruvato
Valina Leucina
Glicina
Como nuestra base para el trabajo, fue el conocimiento previo de que los intermediarios del
Ciclo del Ácido Cítrico eran precursores de la mayoría de aminoácidos. El siguiente gráfico nos
permitirá entender la relación de esta vía metabólica con la síntesis de aminoácidos.
Conclusiones
Los aminoácidos que no inhiben la síntesis de otro aminoácido que no sea el mismo, son
aminoácidos de fin de síntesis, son los que terminan la vía metabólica.
Los aminoácidos que inhiben la síntesis de otros aminoácidos aparte de a ellos mismos se
les denomina competidores, y participan en la síntesis de otros aminoácidos.
Los aminoácidos también se sintetizan a partir de intermediarios del ciclo del ácido
cítrico, por un proceso simple, la transaminaciόn.
Los esqueletos carbonados de los aminoácidos provienen de intermediarios de la
glicolisis (piruvato), de las vías de las pentosas fosfato o del ciclo del ácido cítrico (α-
cetoglutarato, oxalacetato, fumarato, succinato)
Las reacciones de transaminaciόn intervienen en la síntesis de la mayoría de
aminoácidos.
Bibliografía
Armstrong, F Bioquímica. Editorial Reverte, S.A. Barcelona España. 1982
Stryer, Lubert et al, Bioquímica, Quinta Edición, Editorial W.H. Freeman, EEUU.
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/interconversion%20aminoacidos.html