GENERACIÓN DE LA DIVERSIDAD DE RECEPTOR DEL LINFOCITO B.

ELABORACIÓN: MPSS Antonioni de Jesús Ortega Luis.

LINFOCITO B.
INTRODUCCIÓN: Los linfocitos B se diferencian en células plasmáticas productoras de anticuerpos los cuales se unen a
los antígenos de microorganismos extracelulares y sirven para neutralizarlos y eliminarlos. La respuesta inmunitaria
humoral se inicia tras el reconocimiento de cada antígeno por los linfocitos B específicos. El antígeno se une a los
receptores de membrana del linfocito B maduro virgen, que son IgM e IgD, activando al linfocito B y convirtiéndola en
una célula plasmática secretora de anticuerpos.
El receptor del linfocito B tiene dos funciones: activar al linfocito B y endocitar al antígeno unido, esto último permitirá
procesarlo y presentarlo a un linfocito T CD4+ mediante una molécula del MHC clase II.

REORGANIZACIÓN DE LOS GENES BCR.

En la configuración germinal, los locus para los BCR (cadenas pesada y ligera) contienen cada uno múltiples genes para
la región variable (V), hasta varios cientos, y uno o pocos genes para la región constante (C). Entre los genes V y los
genes C hay unas pequeñas secuencias de nucleótidos, que se denominan segmentos génicos de unión (J, por joining) y
de diversidad (D). Todos los locus contienen genes V, J y C; los D sólo se encuentran en el locus de la cadena pesada del
BCR, que se localiza en el cromosoma 14.

La decisión de una célula linfoide progenitora de devenir a un linfocito B está asociada con la recombinación en el locus
de la cadena pesada μ (localizada en el cromosoma 14) del BCR en el linfocito Pro-B. Un gen específico del segmento V
se recombina con un gen específico del segmento D y del segmento J, para formar un único exón V-D-J. La selección de
un segmento concreto V, D y J es aleatoria. El exón V-D-J se une (mediante el mecanismo de splicing) con la región C. Si
la recombinación VDJ tiene lugar con éxito y se sintetiza una cadena pesada, ésta se expresa en la superficie celular del
linfocito Pre-B, unida a unas proteínas sustitutas llamadas VpreB y λ5, para formar el complejo pre-BCR. La expresión de
la cadena pesada unida a las proteínas sustitutas VpreB y λ5, junto con Igα e Igβ se conoce como pre-BCR y estimula el
reordenamiento de uno de los alelos que codifican las cadenas ligeras.
La recombinación en el locus de la cadena ligera κ (localizada en el cromosoma 2) o de la cadena ligera λ (en el
cromosoma 22) del BCR en el linfocito Pre-B, de un gen específico del segmento V con un gen específico del segmento J,
formará un único exón V-J. La selección de un segmento concreto V y J es aleatoria. El exón V-J se une (mediante el
mecanismo de splicing) con la región C. Esta secuencia de recombinación de ADN y splicing de ARN genera las cadenas
pesadas μ y las ligeras κ ó λ del BCR de los linfocitos maduros.
MECANISMOS DE RECOMBINACIÓN.

Los genes regionales (V, D, J) se encuentran flanqueados por secuencias señal de recombinación (RSS, por sus siglas en
inglés) que son reconocidas por un grupo de enzimas conocidas colectivamente como recombinasa. Estas RSS están
compuestas por siete nucleótidos conservados (un heptámero) que reside cerca del gen que codifica la secuencia
seguida por un espaciador (que contiene entre 12 y 23 nucleótidos no conservados) seguidos por un nonámero
conservado (9 pares de bases). Las RSS están presentes en el lado 3' (secuencia abajo) de una región V y en el lado 5'
(secuencia arriba) de la región J. Estos son los lados que están implicados en el empalme. Solo se recombinan
eficientemente un par de RSS espaciadoras que no sean idénticas (p.ej. una con un espaciador de 12 nucleótidos se
recombinará con otra con un espaciador de 23 nucleótidos). Esto se conoce como la regla del 12/23 de la
recombinación.

La recombinación somática de los segmentos V-J o V-D-J está catalizada por un grupo de enzimas denominadas
colectivamente recombinasa. La recombinasa es una colección de enzimas, algunas de las cuales son específicas de
linfocitos, mientras que otras se expresan en muchos tipos celulares. Los pasos iniciales de la recombinación VDJ se lleva
a cabo por enzimas críticas específicas de linfocitos, codificadas por genes llamados Genes Activadores de la
Recombinación 1 y 2 (Rag1 y Rag2). Estas enzimas se asocian unas con otras para reconocer las secuencias RSS e inducir
una escisión del ADN en ellas. Esto solo tiene lugar en una de las cadenas de ADN, lo cual conduce a un ataque por
nucleótido y la creación de un motivo estructural en bucle.
Otras enzimas están implicadas en la reparación del ADN que sigue a la actividad de Rag1 y Rag2. Una de estas enzimas
se llama complejo proteína cinasa activada por ADN (DNA-PK).
Este complejo se une a cada uno de los extremos del ADN escindido, y recluta varias proteínas más, incluida la nucleasa
Artemisa. Los complejos DNA-PK de cada extremo del ADN se fosforilan mutuamente, lo que resulta en una activación
de Artemisa. Artemisa entonces rompe el bucle que se formó por las proteínas RAG. Cernunnos actúa concertadamente
con DNA-PK para alinear los dos extremos de ADN entre sí, y también contribuyen a reclutar una transferasa terminal,
que añade nucleótidos al azar a sus extremos. Las ADN polimerasas λ y μ insertan nucleótidos adicionales según se
necesiten para crear dos extremos compatibles para la unión. Finalmente la ligasa IV de ADN une las cadenas,
concluyendo el proceso.

La diversidad de los receptores de antígenos se debe al uso de diferentes combinaciones de segmentos V, D y J en

diferentes clones de linfocitos (denominada diversidad combinatoria), que se incrementa también al introducir cambios
en la secuencia de nucleótidos en las uniones de los segmentos V, D y J (denominada diversidad de las uniones). La
diversidad combinatoria está limitada al número de secuencias disponibles para cada segmento, pero la diversidad de
las uniones es casi ilimitada. Esta diversidad de las uniones se puede producir por tres tipos de mecanismos:

1. Eliminación de nucleótidos mediada por exonucleasas durante la recombinación.

2. Adición al azar de nucleótidos por una enzima específica de los linfocitos denominada TdT o Desoxirribonucleotidil
transferasa terminal, que generan las denominadas regiones N.
3. Durante uno de los pasos intermedios de la recombinación, se generan extremos cohesivos en las zonas de corte, que
pueden rellenarse con "nucleótidos P".

Como consecuencia de todos estos cambios, la secuencia de nucleótidos en la zona V(D)J debida a la diversidad de
uniones, de un BCR de un clon de linfocitos es muy diferente a la zona de cualquier otro clon. Las zonas de las uniones
constituyen la zona más variable de las CDR (CDR3), y es la más importante para el reconocimiento del antígeno.
MADURACIÓN Y SELECCIÓN DEL LINFOCITO B.
Los linfocitos B se originan de un Precursor Relativo, el mismo que da origen a los linfocitos T y las células NK. Es
probable que la presencia de un receptor de membrana sobre los precursores linfoides comunes al que se le llama
Notch1 induce la diferenciación de células T mientras que la ausencia de dicho receptor induce el destino hacia la línea
de linfocitos B. Aquellas destinadas a originar células B completan su desarrollo en la médula ósea. Las células pro B
necesitan el contacto con células estromales de la médula ósea. Hay una interacción entre VLA-4 presente en el
linfocito, con VCAM-1 presente en las células estromales. Tras el contacto inicial, c-Kit presente en la membrana del
linfocito pro B interactúa con el factor de célula madre presente en la célula estromal. La célula pro-B se divide y se
diferencia en célula pre-B.

Reorganización del BCR.

Pro-B. Es el momento en que ocurre la acomodación de los grupos de genes (reordenamiento genético) que producirán
la cadena pesada μ de la inmunoglobulina. En el reordenamiento genético de la cadena pesada de la futura
inmunoglobulina de membrana, primero se fusionan los fragmentos D y J (llamados DH y JH: la H por la sigla en inglés de
pesado, Heavy) y en una segunda fase, se asocia el fragmento variable de la cadena pesada, llamada VH.

Pre-B. Uno de dos alelos se reordenará para formar la cadena pesada (exclusión alélica), si uno de los dos alelos falla en
el reordenamiento del gen, el alelo del cromosoma homólogo completará la pautada reorganización y una célula
productiva. No prosigue la maduración del linfocito si falla el reordenamiento del receptor de membrana activando la
apoptosis. La cadena pesada μ de la Ig es expresada en la membrana formando el llamado pre-BCR. La expresión de la
cadena pesada μ estimula la reorganización de las cadenas ligeras κ y λ que corresponden. De igual manera que con la
cadena pesada, dos alelos harán el intento de reproducir el gen y la formación de una célula productiva. La cadena ligera
que debería unirse con la cadena pesada, como es característico de todas las inmunoglobulinas, es sustituida por dos
proteínas temporales: VpreB (CD179a) y λ5 (CD179b). El pre-BCR se asocia a otras proteínas como Igα e Igβ (CD79a y
CD79b), importantes en la transducción de señales del BCR.
Linfocito B inmaduro. La producción de cadenas ligeras κ inhibe el reordenamiento del locus de las cadenas ligeras λ, de
tal forma que el locus λ sólo se reordena cuando no se puede fabricar la cadena ligera κ, lo que se conoce como
exclusión isotipica. La cadena ligera es expresada conjuntamente con la cadena pesada como una IgM de membrana
inhibiendo la reorganización de cadenas ligeras adicionales.

*Selección positiva de linfocitos B. Ocurre en médula ósea, los linfocitos B inmaduros que reconocen antígenos propios
con una afinidad muy baja, reciben señales de supervivencia que a su vez, inactivan los genes RAG.

*Selección negativa de linfocitos B. Los linfocitos B inmaduros presentes en médula ósea que expresan receptores de
alta afinidad frente a antígenos propios, mueren y no completan su maduración. Estos linfocitos pueden sufrir un
proceso llamado “edición del receptor”, en el cual el linfocito B al reconocer el antígeno con avidez, recibe señales para
editar su BCR mediante la reactivación del gen RAG. Nuevamente, si la edición fracasa y los linfocitos B reconocen con
avidez un antígeno propio, mueren por apoptosis.

Linfocito B maduro. Los linfocitos B foliculares coexpresan las cadenas pesadas μ y δ en asociación con una cadena
ligera κ ó λ, y expresan en su membrana IgM e IgD. La coexpresión de IgM e IgD se acompaña de la adquisición de la
competencia funcional.

Los linfocitos B B-1 es una población de linfocitos B que se autorrenueva en peritoneo y mucosas, y que además, derivan
de células madre de hígado fetal. Estos linfocitos se desarrollan antes en la ontogenia respecto a los linfocitos B
foliculares, y expresan un repertorio limitado de receptores debido a que en el hígado fetal no hay TdT y no se genera
una diversidad de la unión. Estos linfocitos B B-1 secretan espontáneamente IgM y se encargan de responder hacia
antígenos de origen polisacárido.

Los linfocitos B de la zona marginal del bazo responden a antígenos de transmisión hemática y secretan IgM. Estos
linfocitos se pueden encontrar en bazo y en ganglios linfáticos. Los linfocitos B de la zona marginal poseen un repertorio
limitado de receptores.

Bibliografía.

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Kindt, Thomas J., Goldsby, Richard A., Osborne, Barbara A., Inmunología de Kuby. Sexta edición: McGraw-Hill. 2007.
Male D,Brostoff J, Toth D, et al. Inmunología. Séptima edición, Barcelona: Elsevier. 2007.

Imágenes: Abbas A, Lichtman A, Pillai S. Inmunología celular y molecular. Séptima edición, Barcelona: Elsevier 2012.