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BIOQUÍMICA

CQU 310 Instituto de Ciencias Naturales

Enzimas II

Clase 8

MATERIAL PROPIEDAD DE UDLA.

AUTORIZADA SU UTILIZACIÓN SÓLO PARA FINES ACADÉMICOS.

Resultados de aprendizaje:
Resultados de aprendizaje:

Identificar la clasificación, función y regulación de las enzimas

analizando factores físicos y químicos del medio.

Bioquímica/clase 08

2019

FACTORES QUE DETERMINAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Temperatura

pH

[ Sustrato ]

[ Enzima ]

Inhibidores

http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz22.htm
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz22.htm

Bioquímica/clase 08

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EFECTO DE LA TEMPERATURA

Enzimas

E FECTO DE LA TEMPERATURA Enzimas Temperatura En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

Temperatura

E FECTO DE LA TEMPERATURA Enzimas Temperatura En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas.

Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser

proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por calor.

La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima.

Por sobre la temperatura óptima, el aumento de velocidad de la reacción debido a la

temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la

desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.

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EFECTO DEL PH

Enzimas

E FECTO DEL P H Enzimas pH Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino

pH

E FECTO DEL P H Enzimas pH Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino

Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH;

imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra.

Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá

un pH en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica. Este es

el llamado pH óptimo.

La mayoría de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

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EFECTO DEL PH

E FECTO DEL P H Cambio en el estado de ionización de los grupos funcionales de

Cambio en el estado de ionización de los grupos funcionales de las cadenas laterales de los residuos aminoacídicos

Ejemplo: Ureasa a pH 7 Ejemplo: Ureasa a pH ácido Bioquímica/clase 08 2019
Ejemplo: Ureasa a pH 7
Ejemplo: Ureasa a pH ácido
Bioquímica/clase 08
2019
Ureasa a pH 7 Ejemplo: Ureasa a pH ácido Bioquímica/clase 08 2019 http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#ph

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

En una reacción enzimática en que un sustrato

da origen a un producto se obtiene este gráfico

En una reacción enzimática en que un sustrato da origen a un producto se obtiene este

Bioquímica/clase 08

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EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

E FECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO o Para una reacción catalizada por una enzima que

o

Para una reacción catalizada por una enzima que sigue una

cinética de Michaelis-Menten, la

unión de cada punto del

experimento, da lugar a una curva hiperbólica

o

A bajas [S], la curva tiende a una

recta que asciende con mucha

pendiente. En esta región la curva depende de la [S]

o

Para altas [S], la enzima esta casi

saturada y la V o de la reacción no cambia mucho cuando aumenta la [S]

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EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN Y PARAMETROS CINÉTICOS.

ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN Y PARAMETROS CINÉTICOS. Km (constante de Michaelis-Menten) - Es la concentración de

Km (constante de Michaelis-Menten)

- Es la concentración de sustrato que se requiere para alcanzar la mitad de la velocidad máxima.

- Es una medida de la afinidad del Enzima por el Sustrato.

- Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por sustrato.

- Se mide en unidades de Concentración.

por sustrato. - Se mide en unidades de Concentración. Kcat (número de recambio) - número de

Kcat (número de recambio) - número de moléculas de sustrato convertidas en producto por molécula de enzima y unidad de tiempo,(1seg) en condiciones de saturación de sustrato.

de tiempo,(1seg) en condiciones de saturación de sustrato. Vmax (velocidad máxima teórica) - la velocidad cuando

Vmax (velocidad máxima teórica) - la velocidad cuando todos los centros activos están ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad)

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EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

De acuerdo a los datos de velocidad de una enzima X, conteste:

a) ¿Cuál es la Vmáx de la reacción?

b) ¿Cuál es el Km de la enzima?

c) Demuestre, si esta reacción

sigue la cinética de Michaelis y

Menten.

e) ¿Que esperaría que pasara con

la velocidad máxima si estamos en

presencia de un inhibidor no

competitivo?

 

[S]

V

(M)

(mol /min)

5

x 10 -2

0.25

5

x 10 -3

0.25

5

x 10 -4

0.25

5

x 10 -5

0.20

5

x 10 -6

0.125

5

x 10 -7

0.071

5

x 10 -8

0.0096

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EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

E FECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed. Nelson, DL and Cox,
E FECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO ”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed. Nelson, DL and Cox,

”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Eficiencia Catalítica

k cat /K m

Una estimación de la perfección

Unidades 1/sxM

Eficiencia Catalítica k cat / K m Una estimación de la perfección Unidades 1/sxM Bioquímica/clase 08

Bioquímica/clase 08

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EFECTO DE INHIBIDORES

INHIBIDOR

Molécula que hace disminuir la actividad enzimática, a través de

interacciones con el centro activo u otros centros específicos

Inhibidor Irreversible

Inhibidor Reversible

• Inhibidor Irreversible • Inhibidor Reversible Bioquímica/clase 08 2019 • I. Competitiva • I. No

Bioquímica/clase 08

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I. Competitiva

I. No Competitiva

I. Acompetitiva

EFECTO DE INHIBIDORES

Inhibidor Irreversible

Modifica químicamente a la enzima

E + I

E’
E’

o

A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los inhibidores irreversibles depende del tiempo que actúa el inhibidor.

o

Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente tóxicos.

o

Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo químico de la enzima, modificándola covalentemente

E
E

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I
I
S
S

EFECTO DE INHIBIDORES

Inhibidores Irreversibles

Bioquímica/clase 08 2019
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INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

a) Inhibición Competitiva: El inhibidor se fija al

sitio activo de la enzima libre, impidiendo la fijación del substrato

de la enzima libre, impidiendo la fijación del substrato Km V max = Bioquímica/clase 08 2019
de la enzima libre, impidiendo la fijación del substrato Km V max = Bioquímica/clase 08 2019

Km

V max

=

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”Lehninger Principles of Biochemistry” 3th.ed. Nelson, DL

and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

Inhibidor Competitivo:

I NHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA Inhibidor Competitivo: Inhibidores de proteasas. Fármacos antiretrovirales. Forma

Inhibidores de proteasas. Fármacos

antiretrovirales. Forma eficiente de tratar el VIH

proteasas. Fármacos antiretrovirales. Forma eficiente de tratar el VIH Estructura del Ritonavir Bioquímica/clase 08 2019

Estructura del Ritonavir

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INHIBICIÓN REVERSIBLE NO COMPETITIVA

b) Inhibición NO Competitiva: el inhibidor se une a

un sitio distinto al sitio activo, pero se puede unir tanto a E como a ES

al sitio activo, pero se puede unir tanto a E como a ES Km = V

Km

=

V max

pero se puede unir tanto a E como a ES Km = V max Bioquímica/clase 08

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and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

INHIBICIÓN REVERSIBLE ACOMPETITIVA

c) Inhibición Acompetitiva: el inhibidor se fija a un

sitio distinto al sitio activo, sólo se une al complejo ES

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Km V max
Km
V max

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and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Anti-Inflamatorios No Esteroideos (AINEs)

Enzima Enzima COX 1 COX 2 AINEs (Constitutiva) (Inducible) Prostaglandinas protectoras Prostaglandinas
Enzima
Enzima
COX 1
COX 2
AINEs
(Constitutiva)
(Inducible)
Prostaglandinas protectoras
Prostaglandinas inflamatorias

Adherencia de las plaquetas

Fiebre

Dolor

AINEs:

- Ácido acetilsalicílico

- Diclofenaco

- Naproxeno

- Paracetamol

- Ibuprofeno

Estímulos fisiológicos

Lesiones / Infecciones

AINEs e inhibidores específicos de la COX-2 (meloxicam, celecoxib)

Mucosa estomacal

Inflamación

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Mecanismo de acción:

Aspirina: Inhibidor irreversible de COX-1

de acción: Aspirina: Inhibidor irreversible de COX-1 Modificado de:

Modificado de:

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Mecanismo de acción:

Ibuprofeno: Inhibidor competitivo reversible de la COX-1

Ibuprofeno: Inhibidor competitivo reversible de la COX-1 Modificado de:

Modificado de:

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Fuentes Bibliográficas

Feduchi, E., Blasco, I., Romero, C. y Yañez, E.

Bioquímica conceptos esenciales Editorial Medica Panamericana

2011

Nelson, Cox Lehninger: Principios de Bioquímica

5º Edición, Omega Ediciones S.A 2009.

Mathews, Christopher Bioquímica

Pearson Education 2002 Editorial McGraw-Hill Interamericana.

2002

Voet, Voet, Pratt Fundamentos de Bioquímica Editorial Panamericana 2003

McKee, Trudy McKee, James R.

Bioquímica Editorial McGraw-Hill Interamericana.

2003

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