Experimento: Extracción del DNA de muestras de hígado
Pasos del protocolo
Preparar la dilución de NaOH 25 mM.
Cortar las muestras de hígado
congelado en trozos pequeños de
aproximadamente 0,3 gramos.
Introducir cada muestra dentro de un
tubo de ensayo que contiene 1mL de
NaOH 25 mM dentro de un baño de
agua a 100°C. Los tubos se tienen que
mantener dentro del baño hasta que el
tejido es digerido completamente.
Enfriar los tubos dentro de un baño de
agua. Añadir 2 partes de etanol absoluto
para la precipitación de DNA.
Centrifugar los tubos en frío a 13000g
durante 15 minutos. Descartar el
sobrenadante y limpiar el precipitado
con 1 ml de etanol 70%.
Volver a centrifugar los tubos a 5000g
durante 5 minutos y descartar el
sobrenadante.
Resuspender el precipitado con 200 ul
de agua libre de RNAsas
Riesgos asociados Medidas de seguridad y prevención
- Exposición a partículas sólidas
corrosivas, irritantes y/o nocivas.
Pueden ser inhaladas o puestas en
contacto con la piel y mucosas (por
ejemplo, los ojos).
- Posible explosión de eppendorfs por
cambio de temperatura extrema.
- Riesgo a cortes por la utilización de
materiales de disección cortantes
(tijeras, pinzas y bisturí).
- Salpicaduras y derrames de la base
(NaOH)
- Quemaduras por la manipulación
de los tubos calientes
- Inhalación de vapores corrosivos e
irritantes (por la solución de NAOH.
- Inhalación de vapores del etanol que
puede causar malestar.
- Salpicaduras del etanol que
provocan irritación en los ojos.
- Inhalación de vapores de etanol.
- Inhalación de vapores de etanol.
- Inhalación de vapores del etanol que
puede causar malestar.
Medidas tras accidente
Disponer de lavaojos de
- Llevar EPIs (guantes de nitrilo). emergencia
Disponer de ducha de
emergencia
- Utilizar los EPIs necesarios para esta
actividad (guantes de látex).
- Limpiar la zona de trabajo para Disponer de botiquín de
eliminar posibles restos de hígado o primeros auxilios.
sangre y desinfectar con etanol 70%
y lejía.
Utilizar EPIs máscara que cubra toda la
Disponer de lavaojos y ducha de
cara con filtro P2 y guantes para el calor
emergencia.
para evitar las quemaduras.
Disponer de una solución ácida
para neutralizar en caso de
Eliminar residuos de NAOH en
derrames y vermiculita.
contenedores adecuados.
Disponer de lavaojos de
Utilizar EPIs.
emergencia.
Disponer de lavaojos de
Utilizar EPIs. emergencia.
Disponer de lavaojos de
Utilizar EPIs.
emergencia.
Disponer de lavaojos de
Utilizar EPIs
emergencia.