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“AÑO DEL DIÁLOGO Y RECONCILIACIÓN NACIONAL”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA


FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INFORME 05: ACCIÓN DE MICROORGANISMOS SOBRE DISTINTOS


COMPUESTOS

CURSO: Microbiología.

INTEGRANTES:
 Requena Moscol María Adriana.
 Riofrio Encalada Jeny Yesenia.
 Samillán Huancas Irvin Main.
 Talledo Ojeda Kevin Jhair.

DOCENTE: Blgo- McBlgo. Jaime Fernández Ponce.

CICLO ACADÉMICO: 2018-1

HORARIO DE PRÁCTICA: Martes 3-5 pm

Piura, Martes/26/jun/2018/
INTRODUCCIÓN
Las pruebas de hidrólisis y fermentación de carbohidratos son muy importantes
para la identificación de las bacterias. Los medios para estudiar la degradación de estos
compuestos se preparan por lo general añadiendo 0.5% del carbohidrato (1% si es
lactosa) a un medio básico sin carbohidrato. Para detectar si hubo actividad enzimática
se analiza la aparición de productos o la desaparición del sustrato. Entre los productos
tenemos a los ácidos, cuya producción se indica con un indicador ácido – básico, tal
como rojo de fenol, púrpura de bromocresol, o azul de bromotimol. Los carbohidratos
diferenciales más comúnmente usados son la glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, xilosa,
arabinosa, manitol, almidón, inulina y salicina (Murray, Rosenthal & Pfaller, 2014).

Las células de los microorganismos al igual que las de todos los seres vivos, por
medio de su metabolismo incorporan y transforman los diversos compuestos obtenidos
del medio ambiente, en compuestos requeridos para vivir, para su crecimiento y
reproducción. En éstas transformaciones participan diferentes enzimas que catalizan las
reacciones de oxidación, reducción, hidrólisis, transferencia de grupos, isomerización y
síntesis, dando lugar a la degradación de los compuestos incorporados (durante el
catabolismo) y a la síntesis de nuevos compuestos (durante el anabolismo) (Alarcón,
2001).

Algunas bacterias son capaces de usar moléculas complejas como fuente de


carbono o nitrógeno, utilizan hidrolasas, que fragmentan esas moléculas y liberan otras
más pequeñas, que pueden ser transportadas al interior de una célula bacteriana. En
términos generales, las hidrolasas son enzimas inducidas. Por lo tanto, para estudiar la
capacidad hidrolítica de determinada bacteria, es deseable cultivarla previamente en un
medio cuya fuente de carbono o nitrógeno sea únicamente la sustancia cuya hidrolasa se
desea detectar, para que la bacteria induzca su síntesis. Si hay una fuente más simple o
utilizable con menos inversión de energía, la célula la utilizará y no se inducirá la
hidrolasa. La determinación de la capacidad hidrolítica hacia diferentes sustratos es una
de las pruebas básicas que se realizan en los esquemas para la identificación de bacterias
(Rodríguez, 2005.)

Por lo general, para efectuar estudios acerca del metabolismo microbiano es


necesario preparar un medio completamente sintético del que se conozcan las
características y concentraciones de cada ingrediente (Mc Graw & Hill Book, 1957).

El objetivo de la práctica fue demostrar las diversas reacciones de los


microorganismos frente a diferentes sustratos.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
1. TSI
2. Citrato de Simons
3. LIA
4. SIM
5. VP- RM
6. Caldo Urea
7. Caldo Nitrato
8. Caldo Brila
9. Agar Inclinado
Agar Almidón

METODOLOGÍA:
1. Producción de Hidrógeno Sulfurado (TSI):
Se empezó a flamear el asa en anillo, se tomó el tubo de ensayo que contiene
Klebsiella, se destapó, se calentó un poco el contorno del tubo, se introdujo el asa
dentro del tubo para sacar una pequeña cantidad de Klebsiella; se metió el asa
dentro de mi agar nutritivo el cual tendrá un color anaranjado intenso y realizó un
raspado por estrías desde el fondo hacia el exterior, retiró y flameó el asa;
finalmente se llevó a la incubadora. Se observó los efectos dentro de 24 y 48
horas.

2. Asimilación de Citrato
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con una aguja de Kolle y se
inoculo por picadura central profunda y por estría en la superficie en un tubo con
agar Citrato de Simmons. Luego se incubo a 37ºC por 48 horas. Después se
realizó la lectura.
3. Prueba de Agar L.I.A (Lisien Iran Agar)
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con una aguja de Kolle y se
inoculo por picadura central profunda y por estría en la superficie en un tubo con
agar L.I.A. Se incubo a 37ºC por 24 horas. Después se realizó la lectura.
4. Formación de Indol
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con una aguja de Kolle y se
inoculo en un tubo con medio S.I.M (Sulfuro-Indol-Motilidad) haciendo una
puntura en el centro. Luego se incubo a 37ºC por 48 horas. Después se realizó la
lectura añadiéndole 5 gotas de reactivo de Kovacks o de Erlich

5. Prueba del Rojo de metilo (R.M)


De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con el asa de Kolle y se
inoculo en un tubo con caldo VP-MR. Luego se incubo a 37ºC por 1-3 días.
Después de 24 horas se realizó la lectura añadiéndole 5 gotas del reactivo de
rojo de metilo al 0.04%.
Reacción de Vogues Proskauer (V.P)
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con el asa de Kolle y se
inoculo en un tubo con caldo VP-MR. Luego se incubo a 37ºC por 1-3 días.
Después de 48 horas se añadieron 5 gotas del reactivo de barrit (5% alfa naftol)
y 10 gotas de una solución de KOH al 40%. Se agito y se esperó por 10
minutos para realizar la lectura.
6. Hidrólisis de la Urea
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con un asa de Kolle y se
inoculo en un tubo con caldo urea. Luego se incubo a 37ºC por 48 horas.
Después se realizó la lectura.
7. Prueba de Caldo Nitrato
De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con el asa de Kolle y se
inoculo en un tubo con KNO3. Se incubo a 37ºC por 48 horas. Se agrega
reactivo de Griess (0,2% de diclorhidrato de naftiléndiamina, y 2% de
sulfanilamida en ácido fosfórico al 5%) para ver si hay nitritos. Después se
realizó la lectura.

8. Prueba de Eijkman De un cultivo de Bacillus subtillis se extrajo muestra con el


asa de Kolle y se inoculo en un tubo con caldo B.R.I.L.A (caldo lactosado bilis
verde brillante, con campana de Durham). Se incubo a 44ºC por 48 horas,
después se realizó la lectura
9. Hidrólisis de Almidón
De un cultivo de Bacillus subtillis se inoculo con el asa de Kolle por estrías en
la superficie del agar almidón de la Placa de Petri. Después se incubo a 37ºC
por 24 horas a 72 horas. Pasado el tiempo de incubación se adiciono lugol y se
observó.
Prueba de la Catalasa
De un cultivo de Bacillus subtillis se inoculo con el asa de Kolle por estrías en
la superficie del agar almidón de la Placa de Petri. Después se incubo a 37ºC
por 24 horas. Pasado el tiempo de incubación se adiciono 3 gotas de peróxido de
hidrogeno sobre la zona de desarrollo y se observó.
III. RESULTADOS
Observación: Prueba de Rojo de Metilo:

SE QUEDÓ COLOR
ROJO

SE LE AGREGÓ 5 RESULTADO FINAL


GOTAS DE ROJO
INCUBADO 48H.
DE METILO

Observación: Producción de Indol (SIM):

FORMÓ UN ANILLO
ROJO

SE LE AGREGÓ 5 RESULTADO FINAL


GOTAS DE KOVACS
INCUBADO 48H.
Observación: Producción de Hidrógeno Sulfurado (TSI):

CAMBIÓ UN COLOR
ROJO EN EL PICO Y EN
LA BASE DEL AGAR

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.

Observación: Hidrolisis de Urea:

CAMBIÓ A UN COLOR
ROSADO INTENSO

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.

Observación: Reducción de Nitratos a Nitritos:

CAMBIÓ A UN COLOR
ROJO

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.
Observación: Hidrolisis de almidón:

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.

Observación: Asimilación de citratos:

CAMBIÓ A UN COLOR
AZUL

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.

Observación: LIA (Para Salmonella):

MANTIENE EL COLOR
VIOLETA

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.
Observación : Prueba de EIjkman:

SE VIÓ UNA BURBUJA

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.

Observación : Prueba de la catalasa:

APARECIERON
BURBUJAS AL
AGREGARLE H2O2

RESULTADO FINAL

INCUBADO 48H.
IV. DISCUSIÓN
La vía bioquímica en la biosíntesis de una molécula no es, por lo regular, idéntica a la
que sigue para su catabolismo. Puede haber varios pasos idénticos, pero siempre hay
por lo menos un paso enzimático que es diferente en las vías anabólicas y de
degradación que llevan a y provienen de una biomolécula. Este dispositivo permite la
existencia de estructuras biológicas estables. Por otra parte, el equilibrio entre
precursores y productores mediados por sistemas libres de reacción reversible podría,
por efecto de acción de masas, cambiar la identidad de macromoléculas dondequiera
que las concentraciones de sus precursores fluctuarán. (Peclzar, 1982).

Es así como en las diferentes pruebas bioquímicas se comprobó la acción de las


bacterias frente a diferentes sustratos y que los pueden degradar gracias a la presencia
de enzimas que contienen.

Los procesos biosintéticos que requieren energía, están obligatoriamente acoplados a


la desintegración de ATP productora de energía, y siendo la reacción exergónica es
irreversible en dirección a la biosíntesis. (Peclzar, 1982).

Por ello, lo que menciona este autor se corroboró en las pruebas realizadas en
laboratorio. Sin embargo, las reacciones biosintéticas están reguladas
independientemente de los mecanismos reguladores de la correspondiente vía
catabólica, no participan en la biosintética. Las vías biosintéticas son primordialmente
reguladas por la concentración de productos finales y la célula sintetiza sólo lo que
necesita de un compuesto en un momento dado.

V. CONCLUSIONES
Los diversos cultivos utilizados en el laboratorio mostraron reacciones frente a las
pruebas determinadas para cada caso, dependiendo tanto del microorganismo,
sustancia reactiva y el sustrato en el que estaban.
Se reconoció el crecimiento de los microorganismos sobre diferentes sustratos, tales
como la prueba de rojo de metilo que mantiene su color rojo entonces viene siendo
positivo, la producción de Indol que formó un anillo color rojo viene siendo positivo, la
producción de Hidrogeno Sulfurado que el pico y las base se tornó color rojo nviene
siendo negativo, la hidrolisis de Urea se tornó un color rosado intenso, la reducción de
nitratos a nitritos torno un color rojo, la asimilación de citratos tornó un color azul, la
prueba LIA mantiene su color violeta, la prueba de EIjkman se le observó una burbuja y
la prueba de la catalasa actuó cuando se le agregó H2O2 observando que salían
burbujas.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Alarcón, L. 2001. Manual de prácticas de microbiología básica y microbiología de


alimentos. Reimpresa. UACJ. Pág. 106

Mc Graw & Hill Book C., 1957 S. A. B. Manual of Microbiological- New York.

Murray, P; Rosenthal, K & Pfaller, M. 2014. Microbiología médica. Sétima edición.


Editorial Elsevier España, S.A. Madrid, España.

PELCZAR, M J. 1982. Microbiología. 4 edición. Mc GrawHill, México

Rodríguez, E. 2005. Bacteriología general: principios y prácticas de laboratorio. Edt.


Universidad de Costa Rica.