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Conclusión

1.- ¿Por qué se emplearon diferentes concentraciones de Mitomicina C en los


cultivos?
A partir de la adición de las concentraciones de MMC en los cultivos derivados del
paciente se apreció un incremento significativo en los eventos de roturas
cromosómicas por célula en comparación con el observado en el control sano, así
como en el porcentaje de células con roturas.
Es recomendable la utilización de ensayos de hipersensibilidad a agentes
intercalantes en el ADN, como la MMC. De esta manera se puede comprobar que,
a la menor concentración empleada, en el caso de sospecha clínica, se apreciara
una proporción de células con roturas cromosómicas; al aumentar los niveles de
MMC, la cantidad de roturas por célula incrementara sustancialmente y fue
concentración dependiente.
2.- ¿Por qué los cultivos se incubaron por 72 horas?
El medio en polvo es el más económico y utilizado, pero requiere de esterilización.
Es aconsejable esterilizarlo por filtrado previo al agregado del suero ya que la
espuma que ocurre en presencia del suero desnaturaliza las proteínas. Se puede
agregar suero fetal bovino o de caballo tras el filtrado. La esterilidad del medio
siempre debe ser evaluada colocándolo en un incubador a 37 oC con CO2 por 72
horas previo a su utilización para asegurar que el lote no contiene contaminantes.
El medio debe guardarse a 4oC. Dado que varios de los componentes del medio
son fotosensibles, éste debe almacenarse en la oscuridad.
3.- Las preparaciones únicamente se tiñeron con Wright y Giemsa porque
El área de la genética es la del mayor número de comunicaciones en la que se utilizó
el colorante de Giemsa después de diversos tratamientos previos al material de
estudio. Esta mezcla fue utilizada inicialmente para demostrar la heterocromatina
densa del cromosoma 9 y posteriormente se ha generalizado.

Este método de tinción permite también la tinción diferencial de zonas con un alto
contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir
perfectamente en microscopio óptico el núcleo celular, los cromosomas durante
la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN mitocondrial.
Cada cromosoma tiene un patrón de bandas característico, permitiendo
que aberraciones estructurales como borrados, duplicaciones o sutiles
translocaciones sean detectadas, al igual que permite la identificación de
cromosomas marcadores.

Conclusión
Los estudios de alteraciones cromosómicas son realizados generalmente a partir de
linfocitos de sangre periférica, estimulados con fitohemaglutinina (FHA). Las mitosis
permanecen bloqueadas en el estadio profase-metafase por la acción de la
colchicina u otro agente bloqueador de la polimerización del huso acromático. Con
el objeto de dispersar los cromosomas mitóticos, los cultivos se someten a la acción
de soluciones hipotónicas de cloruro de potasio (KCl), las células se fijan en una
solución de alcohol metílico y ácido acético glacial (3:1).

Es aconsejable esterilizar los medios de cultivo empleados por filtrado previo al


agregado del suero ya que la espuma que ocurre en presencia del suero
desnaturaliza las proteínas. Se puede agregar suero fetal bovino o de caballo tras
el filtrado. La esterilidad del medio siempre debe ser evaluada colocándolo en un
incubador a 37oC con CO2 por 72 horas previo a su utilización para asegurar que el
lote no contiene contaminantes. RPMI es un medio de uso general con una amplia
variedad de aplicaciones para células de mamíferos (en especial, las células
hematopoyéticas)
La amplitud de las roturas cromosómicas espontáneas está dada por el hecho de
que las frecuencias de estos eventos, en algunos pacientes con alteraciones o
distintas enfermedades genéticas, pueden ser similares a las que pueden aparecer
en individuos normales, razón por la cual estos valores no pueden ser utilizados con
fines diagnósticos. Por ello es recomendable la utilización de ensayos de
hipersensibilidad a agentes intercalantes en el ADN, como la MMC. De esta manera
se puede comprobar que, a la menor concentración empleada, en el caso de
sospecha clínica, se apreciara una proporción de células con roturas cromosómicas;
al aumentar los niveles de MMC, la cantidad de roturas por célula incrementara
sustancialmente y fue concentración dependiente.
Con el propósito de valorar la dispersión cromosómica de las metafases, se
considera de vital importancia la maduración de los cromosomas a 60 °C, en estufa
de cultivos, durante 24 h.

Una de las técnicas más comunes de bandeo es la denominada GTG (bandas G


utilizando tripsina y teñidas con Giemsa). Este método de tinción permite también
la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y concretamente de
uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en microscopio óptico
el núcleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso
el ADN mitocondrial. Los cromosomas tratados producen la alternancia de bandas
claras y oscuras a lo largo de los cromosomas. Cada cromosoma tiene un patrón
de bandas característico, permitiendo que aberraciones estructurales como
deleciones, duplicaciones o sutiles translocaciones sean detectadas, al igual que
permite la identificación de cromosomas marcadores

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