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Probióticos y Conservadores Naturales en alimentos

Article · January 2004


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4 authors, including:

Ruben Salcedo-Hernández José E. Barboza Corona


Universidad de Guanajuato University of Guanajuato. México
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Acta Universitaria
Universidad de Guanajuato
vargase@quijote.ugto.mx
ISSN (Versión impresa): 0188-6266
MÉXICO

2004
J. E. Barboza- Corona / H. Vázquez- Acosta / R. Salcedo- Hernández / M. Bautista-
Justo
PROBIÓTICOS Y CONSERVADORES NATURALES EN ALIMENTOS
Acta Universitaria, septiembre-diciembre, año/vol. 14, número 003
Universidad de Guanajuato
Guanajuato, México
pp. 32-38
Guanajuato, Gto., México

RESUMEN / ABSTRACT Probióticos y Conservadores


Los probióticos son alimentos que con-
tienen bacterias que proporcionan un
Naturales en Alimentos.
beneficio a la salud de quienes los con-
sumen. Estas bacterias pueden produ- J. E. Barboza-Corona*; H. Vázquez-Acosta*; R. Salcedo-Hernández* y
cir proteínas llamadas bacteriocinas, M. Bautista-Justo*.
que actúan como agentes antibacte-
rianos. Las bacteriocinas pueden, ade-
más de proteger al hospedero contra el
INTRODUCCIÓN
ataque de bacterias patógenas, también

N
servir como bioconservadores en ali- o resulta sorprendente escuchar a nuestra mamá o abueli-
mentos. Hasta ahora, la Nisina es la ta decir que anteriormente era más económico ir de com-
única bacteriocina que se usa comer- pras al mercado, ya que sólo se adquiría lo necesario
cialmente en la conservación de ali-
mentos; sin embargo, existen otras con (vegetales, cereales, frutas, carne, leche, entre otras) para la semana.
uso potencial como bioconservadores. Sin embargo, actualmente recibimos “bombas” de información
En este trabajo analizamos aspectos publicitaria, bien dirigidas, que inducen a obtener no sólo la
generales de los probióticos, de los
conservadores naturales, de las despensa semanal, sino también una gran variedad de productos,
bacteriocinas tanto producidas por bac- muchos de los cuales no arrojan ningún beneficio a la salud. No
terias lácticas como por una bacteria obstante, dentro de los productos que sí proporcionan un benefi-
que es bioinsecticida.
cio están los llamados alimentos probióticos. Estos contienen
microorganismos que benefician la salud del hospedero mediante
Probiotics contain bacteria that provide la adhesión y colonización del tracto intestinal de la persona, lo
benefits to the consumer’s health. que permite mantener un equilibrio en las casi 100 billones de
Probiotic bacteria may produce
bacterias (400 especies bacterianas) que tenemos como flora intes-
proteins called bacteriocins which act
as anti-microbial agents. Bacteriocins tinal. Éstas pueden ser aerobias (requieren oxígeno para vivir),
protect not only consumer against anaerobias facultativas (pueden vivir en ausencia o con cantidades
food-borne pathogenic bacteria, but
mínimas de oxígeno) y anaerobias obligadas (no requieren oxíge-
also can play a role as preservatives in
food. Currently, Nisin is the only no, incluso éste es tóxico para ellas) (Esquivel-Flores, 2004). La
bacteriocin used as a food additive, flora intestinal desempeña funciones importantes entre las que se
nevertheless there are other bacteriocins
encuentran beneficios nutrimentales (digestión y absorción de
with a potential use as preservatives. In
this work, a general overview is nutrimentos, absorción de minerales, síntesis de vitaminas como la
presented of probiotics, natural B12, vitamina K, ácido fólico, biotina, ácido pantoténico), resis-
preservatives, bacteriocins from lactic
tencia a enfermedades (protección contra bacterias patógenas) (Cen-
bacteria, and those produced by an
insecticidal bacterium. tro de Investigación Nestlé, 2003), estimulación de la movilidad
intestinal y regulación del sistema inmune (Esquivel-Flores, 2004).
Con relación a la protección contra bacterias patógenas, los
microorganismos probióticos usan varios mecanismos para ejercer su
efecto antimicrobiano: producción de ácido láctico, ácido acético,
Recibido: 3 de Junio de 2004 etanol, bióxido de carbono, peróxido de hidrógeno, algunas sustan-
Aceptado: 30 de Septiembre de 2004 cias antimicrobianas de bajo peso molecular (reuterina, ácido piro-
glutámico) y bacteriocinas (antibacterianos protéicos) (Ouwehand,
1998). En este trabajo revisaremos aspectos generales de los pro-
* Instituto de Ciencias Agrícolas, Uni- bióticos, de los bioconservadores naturales (bioconservadores) en
versidad de Guanajuato. Ex-Ha- alimentos y de las bacteriocinas.
cienda El Copal, carr. Irapuato-
Silao Km 9. Irapuato, Guanajuato, PALABRAS CLAVE: Probióticos; Bioconservadores; Bacteriocinas; Bacterias lácticas;
Bioinsecticida; Bacillus thuringiensis.
México. 36500. Tel. y Fax: (01-
462) 6242484. Correo electróni- KEYWORDS: Probiotics; Preservatives; Bacteriocins; Lactic bacteria; Bioinsecticide;
co: josebar@dulcinea.ugto.mx Bacillus thuringiensis.

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PROBIÓTICOS Por ejemplo, deben resistir la acidez del estóma-
go y las sales biliares, fijarse en el epitelio intes-
Tal como se indicó previamente, los alimen- tinal y colonizar el intestino. Además deben ser
tos probióticos son aquéllos a los cuales se les capaces de competir con otras bacterias o sus
han adicionado microorganismos que benefi- productos tóxicos y aniquilarlos mediante cam-
cian la salud del hospedero, manteniendo un bios de pH intestinal o por la producción de
equilibrio en la flora intestinal. En el mercado proteínas antibacterianas llamadas bacteriocinas.
se puede encontrar una gran variedad de pro- Existen algunas bacterias como Streptococcus
ductos probióticos en diferentes presentaciones, thermophilus y L. bulgaricus que se usan en la
que van desde yoghurts, productos farmacéuti- preparación de yoghurts, las cuales no sobrevi-
cos, hasta fermentados lácteos agridulces. Las ven al paso por el estómago, sin embargo libe-
bacterias que pueden servir como probióticos se ran lactasa (β-galactosidasa) y ayuda a digerir la
pueden aislar de diferentes tipos de materiales: lactosa (azúcar presente en la leche), auxiliando
del tracto intestinal humano, carnes, frutas y de esta forma a disminuir la intolerancia a la
vegetales fermentados. Actualmente, la mayor lactosa (Centro de Investigación Nestlé, 2003).
parte de las bacterias usadas como probióticos
en productos comerciales, pertenecen a las bac- Además de que las bacterias probióticas pue-
terias lácticas (bacterias que usan carbohidratos den desempeñar un papel benéfico para la salud
como fuente de carbono y producen ácido lácti- de quien los ingiere, desde un punto de vista
co como producto final) de manera específica biotecnológico pueden tener otras utilidades.
Lactobacilli y Bifidobacteria. Dentro del género Por ejemplo, las bacterias lácticas de forma na-
Lactobacillus podemos encontrar a L. bulgaris, tural o añadidos favorecen el desarrollo de las
L. acidophilus; L. johnsonii (La1), L. casei y L. características sensoriales de productos fermen-
caucasicus, las cuales se han usado para la prepa- tados, y también actúan como agentes
ración de una gran variedad de productos lác- antimicrobianos contra bacterias patógenas en
teos fermentados. alimentos (Escudero-Abarca y Sánchez-Esquivel,
2002) con lo cual pueden considerarse como
Las bacterias deben cumplir con ciertos re- bacterias conservadoras (Tabla 1). El actuar con-
quisitos para poder ser consideradas probióticas. tra bacterias patógenas es importante ya que

Tabla 1. Ejemplos de bacterias patógenas presentes en los alimentos *


Bacteria Algunos alimentos que pueden estar contaminados
Listeria monocytogenes Leche cruda, pescado, carnes rojas, alimentos precocidos, vegetales crudos
Clostridium botulinum Enlatados, alimentos secos, zumos de frutas, gelatinas, carnes, agua
Yersinia enterocolítica Lácteos, carnes, superficies (manos, alimentos, equipo, ropa, envases)
Aeromonas hidrófila Pescado, crustáceos, hortalizas y frutas frescas
Escherichia coli Panadería, enlatados, lácteos, huevos, pescado, zumos, frutas, agua
Staphylococus aureus Panadería, enlatados, cereales, lácteos, huevos, pescado, gelatina, carne
Bacillus cereus Panadería, cereales, lácteos, huevos, pescado, zumos, gelatina, carnes
Salmonella typhimurium Lácteos, panadería, huevos, pescado, zumos, hortalizas, frutas, carnes
Enterobacteriacea Huevos, carne, alimentos precocidos
Pseudomonas spp. Agua, pescado, carne
+
B. weihenstephanensis Arroz hervido, leche cruda
*Datos modificados de Roberts y col., 1995.
+
Cherif y col., 2001.

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muchas de ellas, incluyendo a Listeria zantes, acidulantes, edulcorantes y humectantes.
monocytogenes, Yersinia enterocolítica, Aeromonas Los conservadores se adicionan con el propósito
hydrophila y Clostridium botulinum pueden cre- de controlar el crecimiento de microorganismos
cer a temperatura de refrigeración (Lewus y (bacterias y hongos), y pueden ser químicos o
Montville, 1992). naturales (bioconservadores). Entre los conser-
vadores químicos se encuentran el benzoato de
sodio, el ácido sórbico, sulfitos, nitritos, nitra-
CONSERVADORES EN tos, peróxido de hidrógeno y cloruro de sodio.
ALIMENTOS Por ejemplo, es común encontrar el benzoato
de sodio en refrescos, bebidas de frutas, marga-
Cuando adquirimos en el supermercado o en rinas, aderezos y otros alimentos con carácter
la tienda de al lado un alimento, éste puede ser ácido; y el ácido sórbico en frutas secas, quesos,
procesado (cárnicos, mermeladas, panes, etc. ) o productos de panificación, bebidas carbonatadas
no procesado (fruta, vegetales, granos, etc.) (Fig. o no carbonatadas y productos derivados de
1). Sea cual sea el origen, es posible que dicho pescado, para controlar levaduras y mohos (De
alimento pueda haber sufrido alguna contami- Man, 1999).
nación de manera no intencional o contener
algún aditivo. Dentro de los contaminantes no A pesar de que la mayor parte de los conser-
intencionales se pueden encontrar componentes vadores usados en alimentos son de origen quí-
naturales del propio alimento, toxinas produci- mico, existen diversos productos de origen na-
das por alguna bacteria, productos derivados del tural provenientes de plantas y microorganismos
procesamiento del alimento y de la contamina- que pueden ser usados como bioconservadores
ción ambiental, contaminantes que resultan del en alimentos. Se estima que del 1 % al 10 % de
manipuleo del alimentos tales como pesticidas las cerca de 500 000 especies de plantas que
y fertilizantes, entre otros. Por otro lado, los existen en el mundo, tienen uso como alimento
aditivos se añaden de manera intencional para o medicinal. Existen diversos productos de ori-
preservar y/o mejorar las características del ali- gen botánico los cuales poseen una actividad
mento, algunos ejemplos son los conservadores, antimicrobiana como el ajo, orégano, mostaza,
colorantes, antioxidantes, emulsionantes, sabori- canela, albahaca, tomillo, pimienta, mejorana,
chile, achiote, cebolla, cilantro, té, limón y na-
ranja. Por ejemplo, un escabeche para marinar el
pollo con orégano y tomillo almacenado a 4 °C
fue altamente tóxico a Salmonella typhimurium,
Campilobacter jejuni y Listeria monocytogenes
(Draughon, 2004).
Además de los conservadores de origen natu-
ral provenientes de plantas, existen antimicro-
bianos producidos por bacterias que son de ori-
gen protéico llamadas bacteriocinas.

BACTERIOCINAS
Figura 1. Los niños son un grupo importante que debería
consumir alimentos de diferentes fuentes y propie- Las bacteriocinas son proteínas sintetizadas
dades, entre ellos los probióticos. Los conservado- (traducidas) a nivel ribosómico por bacterias,
res naturales (bacteriocinas) pueden obtenerse de con actividad antimicrobiana sobre especies ge-
bacterias que crecen de manera habitual en produc-
tos lácteos, carnes, frutas y vegetales fermentados, néricamente muy relacionadas, y cuya actividad
entre otros. no es letal a la célula productora (Escudero-Abar-

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ca y Sánchez-Esquivel, 2002; Ryley y Wertz, Aún cuando en la clasificación de las bacte-
2002) (Fig. 2). Pueden tener un efecto antimi- riocinas se ha incluido la palabra antibiótico, de
crobiano por sí solas, aunque también existen manera estricta difieren de ellos en el sentido
los llamados “sistema de dos péptidos” en los que no se usan en el tratamiento de enfermeda-
cuales requieren de dos proteínas que son inacti- des. Si las bacteriocinas tuvieran ambos usos (en
vas de manera aislada, pero cuando se combinan alimentos y medicamentos) sería un grave pro-
el efecto antimicrobiano se potencia. Las bac- blema, ya que podrían desencadenar problemas
teriocinas son proteínas de secreción, las cuales de resistencia bacteriana. Por otro lado, desde
pueden ser transportadas al exterior de la célula un punto de vista ecológico, las bacteriocinas
por proteínas del sistema ABC (ATP binding les sirven a los microorganismos productores
cassette) que usan ATP como fuente de energía, para que puedan establecerse en una comuni-
o por un sistema de secreción general (sistema dad, o bien para evitar que otras bacterias pue-
sec-dependiente). De manera general, las bac- dan invadir su nicho ecológico (Riley y Wertz,
teriocinas se clasifican en cuatro clases. En la 2002).
clase I o lantibióticos, se encuentran aquellas
proteínas que sufren modificaciones postra- La información genética para codificar (pro-
duccionales (cambios después de las síntesis de ducir) las bacteriocinas, puede estar localizada
la proteína). En las clases II y III o no lanti- en cromosomas, plásmidos (DNA extracromo-
bióticos, se engloban las que no sufren modifi- sómico) o ambos. Por ejemplo, las colicinas
caciones postraduccionales. En la clase IV, se producidas por Escherichia coli son codificadas
agrupan aquellas que se encuentran asociadas a por genes ubicados en plásmidos; las bacte-
lípidos o carbohidratos (Garneau y col., 2002). riocinas de Pseudomona aeuroginosa por genes
en cromosoma, y las de Serratía marcescens tan-
to en plásmidos como en cromosomas (Ryley y
Wertz, 2002). Además del gen estructural que

A codifica la bacteriocina, deben existir los ele-


mentos genéticos para codificar una proteína de
inmunidad (para proteger a la bacteria genera-
dora de la bacteriocina), un transportador del
tipo ABC (en caso de requerirlo), y una proteí-
na accesoria necesaria para la externalización de
la bacteriocina (Garneau y col., 2002).

BACTERIOCINAS PRODUCIDAS
B POR BACTERIAS LÁCTICAS
Algunas bacteriocinas producidas por bacte-
Figura 2. Las bacteriocinas sintetizadas por Pediococcus ácido-
lactici fueron confrontadas contra la bacteria Listeria
rias ácido lácticas tal como la Nisina, inhiben
innocua, mediante la prueba de difusión de pozos. no solamente a bacterias genéricamente muy
Muestras de bacteriocinas fueron colocadas en los relacionadas, sino también a patógenos de ali-
pozos y se dejaron difundir. Posteriormente se co-
locó una sobrecapa de un cultivo de L. inoccua y se
mentos como Listeria monocytogenes (causante
incubaron durante toda la noche. Las bacteriocinas de la Listeriosis que produce fiebre, diarrea,
inhibieron el crecimiento de L. innocua. En (A) dolor de cabeza, dolor en el cuello, pérdida de
puede observarse el efecto antibacteriano mediante
la formación de un halo de inhibición (indicado con
equilibrio) o de bacterias que esporulan (produ-
una flecha). En (B) se colocó una muestra de pro- cen esporas) como Clostridium (Tabla 2). Debi-
teínas secretadas por una bacteria que no produce do a esto, el interés por usar a las bacteriocinas
bacteriocinas, tal como era de esperarse no se ob-
servó ningún efecto inhibitorio.
como un arsenal de conservadores naturales en

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Tabla 2. Bacteriocinas producidas por algunas bacterias.
Bacteria Bacteriocina Bacterias sensibles
Lactococcus lactis Nisina* Lactococcus, Streptococcus, Staphylococcus,
Listeria, Clostridium, Micrococcus, Bacillus
Carnobacterium piscícola Carnosina Carnobacterium, Lactobacillus
Pediococcus acidilactici Pediocina Streptococcus faecalis, Listeria
monocytogenes
Lactococcus lactis Lacticina 3147+ Acetobacter, Bacillus, Clostridium, Listeria,
Enterococcus, Staphylococcus, Lactobacillus
Lactobacillus salivarus ABP-118+ Bacillus, Listeria, Enterococcus,
Staphylococcus
Streptococcus mutans Mutacina IV+ Varias especies de Estreptococos orales y
Actinomicetos
Tomado de Garneau y col. 2002; Escudero-Abarca y Sánchez Esquivel, 2002; Ouwehand,
1998; O´Sullivan y col., 2002.
* Única bacteriocina con reconocimiento GRAS y que se usa como bioconservador en la
preparación de varios alimentos.
+
Bacteriocinas pertenecientes al sistema de dos péptidos.

alimentos se ha incrementado en los últimos (del inglés “crystal”) (Barboza-Corona y Escu-


años (O´Sullivan y col., 2002). Hasta ahora, la dero-Abarca, 2002). Los genes que codifican las
Nisina es la única bacteriocina con el nombra- proteínas Cry han servido como material gené-
miento GRAS (Generally Recognized as Safe), tico para la generación de plantas transgénicas
que le da la “etiqueta” de reconocida como como el maíz, la papa, tomate, algodón, las
segura, por lo que actualmente se usa como cuales son resistentes al ataque de insectos.
bioconservador en varios alimentos como el
yogurth, cárnicos, vegetales enlatados, frutas,
La mayor parte de los reportes de B.
postres, cervezas y vinos (Escudero-Abarca y
thuringiensis tiene que ver con las proteínas in-
Sánchez-Esquivel, 2002).
secticidas Cry y Cyt, en los demás campos la
información es bastante escasa. Las bacteriocinas
BACTERIOCINAS PRODUCIDAS producidas por B. thuringiensis no son la excep-
POR UNA BACTERIA ción. Hasta ahora se han reportado 5 bacterio-
INSECTICIDA cinas producidas por diferentes especies de B.
thuringiensis (Favret y Youngston, 1989; Paik y
Bacillus thuringiensis es una bacteria que no col., 1997; Cherif y col., 2001; Ahern y col.,
deja de sorprender por la gran cantidad de com- 2003; Cherif y col., 2003). Las bacteriocinas de
puestos que sintetiza (quitinasas, proteasas, B. thuringiensis tienen actividad contra algunas
fosfolipasas, bacteriocinas, β-exotoxinas, proteí- bacterias patógenas presentes en alimentos como
nas como: Cry, Cyt y Vip) y que tienen posibi- L. monocytogenes, Pseudomonas aeuroginosa, B.
lidad de uso biotecnológico. Esta bacteria es el cereus y B. weihenstephanensi (Tabla 3). Estos
bioinsecticida más exitoso a nivel mundial para reportes hacen aún más loable el papel biotecno-
el control de plagas agrícolas y tiene una gran lógico de los productos sintetizados por B.
aceptación como agente de biocontrol en la thuringiensis, ampliando su horizonte de acción,
agricultura orgánica. El principio activo de sus de bioinsecticida, a la retardación de la contami-
productos comerciales lo constituyen millones nación de patógenos en plantas, en la preserva-
de cristales protéicos, cada uno de los cuales está ción de granos (Paik y col., 1997) y a su poten-
formado por miles de proteínas llamadas Cry cial empleo como conservador en alimentos.

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Tabla 3. Bacteriocinas producidas por diversas cepas del bioinsecticida Bacillus thuringiensis.
Bacteriocina Masa molecular Bacterias sensibles Referencia
Entomocina 9 12,4 kDa B. thuringiensis, Listeria Cherif y col., 2003
monocytogenes, Pseudomona
aeuroginosa
Thuricina 439 ≈ 3,0 kDa B. thuringiensis, B. cereus, L. Ahern y col. 2003
innocua 4202
Thuricina 7 11,6 kDa B. thuringiensis, B. cereus, B. Cherif y col. 2001
micoides, Streptococcus
pyogenes, L. monocytogenes, B.
weihenstephanensis
Tochisina 10,5 kDa Diversas especies de B. Paik y col., 1997
thuringiensis, B. cereus,
Leuconostoc mesenteroides
Thuricina 950,0 kDa Diversas especies de Bacillus Favret y Youngston, 1989

MANIPULACIÓN GENÉTICA bacteriocinas responsables del efecto antimi-


crobiano, podría diseñarse una sola bacteriocina
En los últimos años han surgido varias bacte- quimérica con diferente espectro de acción.
rias patógenas presentes en alimentos, las cuales
se han hecho resistentes a los antibióticos, tales Aun cuando pueden aprovecharse los conoci-
como Salmonella entérica, serovar thyphimurium, mientos y estrategias que ahora se tienen en
Escherichia coli, Listeria monocytogenes, relación a la Biología Molecular e Ingeniería
Campilobater jejuni y Enterococcus faecium Genética que permiten manipular las bacterio-
(Matthewes, 2004). Esto estimula aún más el cinas, quizás lo mas recomendable sería hacer la
interés en la búsqueda de bacteriocinas, o combi- manipulación y usar el producto ya aislado y
naciones de ellas, que eviten la contaminación de purificado como un aditivo en alimentos. Es
los alimentos con ese tipo de bacterias. decir, no usar la bacteria transgénica en los ali-
mentos, sino solamente la bacteriocina ya mani-
Ya que la expresión de las bacteriocinas es pulada, ya que esto podría desencadenar una
regulada a nivel de DNA, su manipulación serie de problemas con el consumidor al escu-
genética es posible. Debido a los bajos niveles char la palabra transgénica.
de expresión que pueden presentar algunas
bacteriocinas, su efecto antimicrobiano puede
pasar desapercibido por lo que un aumento en
AGRADECIMIENTOS
la producción de la bacteriocina sería recomen- Se desea agradecer al CONCYTEG por la
dable. Esto puede lograrse si el gen pudiera beca otorgada a Herminia Vázquez Acosta para
clonarse en un vector de expresión o bien mani- participar en el Primer Verano de Investigación
pulándolo de tal forma que pudiera tener ele- Estatal, y a la Dra. Blanca Escudero de la Uni-
mentos “fuertes” (promotores, regiones estabili- dad de Investigación y Desarrollo en Alimentos
zadoras de las proteínas, etc.) que pudieran elevar (UNIDA) del Instituto Tecnológico de Vera-
el nivel de producción en la bacteria. Ya que el cruz, por la donación de las bacterias Pediococcus
espectro de acción es muy limitado para algunas acidolactici y Listeria inoccua.
bacteriocinas, podrían obtenerse bacterias que
expresaran al mismo tiempo dos bacteriocinas,
aumentando de esta forma el espectro de acción REFERENCIAS
contra patógenos presentes en alimentos. Qui- Ahern, M. Verschueren, S. y Van Sinderen, D. (2003).
zás conociendo en detalle las regiones de las Isolation and characterization of a novel bacteriocin

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