Dr. Tutik Setianingsih, M.Si mikroskop elektron transmisi Teori dan Aplikasinya untuk Karakterisasi MaterialMIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI: TEORI DAN APLIKASINYA UNTUK KARAKTERISASI MATERIAL Penulis: Dr. Tutik Setianingsih, M.Si ISBN: 978-602-432-157-4 Editor: Masruri,PhD Penyunting: ‘Tim UB Press Penata Letak: Sekaring Tyas W. Desain Sampul: Wendi Wiranata Penerbit: Universitas Brawijaya Press (UB Press) Penerbit Perguruan Tinggi Terbaik dan Terbesar Kelas Dunia J]. Veteran No, 10-11 Malang 65145 Indonesia Gedung INBIS Lt3 No. Telp/HP: 0341-5081255 / 082228238999 e-Mail: ubpress@gmail.com http://www-ubpress.ub.acid Cetakan pertama, Februari 2017 i-xv+ 108 him,, 15,5 x 23,5 em Dicetak oleh: UB Media Universitas Brawijaya, Malang Isi diluar tanggung jawab percetakan Hak cipta dilindungi undang-undang Dilarang memperbanyak karya tulis ini dalam bentuk dan dengan cara apapun tanpa seizing tertulis dari penerbit2.3. Aplikasi TEM untuk karakterisasi material biologis.......... 22 2.4. Aplikasi TEM untuk karakterisasi material geologi 25. — Evaluasi pemahaman materi... Daftar Pustaka.... BAB 3 TEORI INTERAKSI MATERI DAN ELEKTRON YANG MENDASARI MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI 3.1. Sifat elektron.... 3.2. Mekanisme Interaksi elektron dan materi. 3.2.1. Backscattered electron (BSE)......... 3.2.2. Elektron Sekunder (SE) .. 3.2.3. Elektron Auger... ‘ zi 3.2.4. Sinar - X karakteristik........... 1 36 3.2.5. Elektron yang ditransmisikan tapas hamburan (Transmitted unscattered electron)...... 3.2.6. Elektron hamburan elastis 3.2.7. Elektron hamburan tak el: 33. Volume interaksi 3.4. Evaluasi pemahaman materi... Daftar Pustaka.. BAB 4 PERALATAN MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISLI.. 41. Satu set alat TEM 4.2. Komponen TEM 4.2.1. Sumber Elektron (Electron Gun)).....css0:sneeeeeeeen 48 4.1.2. Lensa elektromagnetik 53 4.1.3. Celah (Aperture) 54 4.1.4, Layar fosforesensi atau kamera CCD 43. — Evaluasi pemahaman matezi.... Daftar Pustaka.... BAB 5 PROSES PEMBENTUKAN GAMBAR DAN MODE DIFRAKSI PADA MIKROSKOP TRANSMISI ELEKTRON... SL Mode gambar dan mode difraksi.. 5.2. Kontras pada TEM 5.2.1. Kontras massa dan kontras ketebalan massa 62 5.2.2. Kontras Difraksi 5.2.3. Kontras Fasa... 5.3. _ Difraksi bidang terpilih (Selected Area Diffraction) 54. — Evaluasi pemahaman materi Daftar Pustaka..... viii | TransmisiElektronBAB 6 PREPARASI SPESIMEN UNTUK MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMIS 6.1, Pra penipisan (Pre-Thinning) 6.2. Penipisan akhir (Final thinning) 6.3. Penipisan secara clektrolitik (E 6.4. Ion milling... 65. Ultramikrotom 6.6. Teknik preparasi lain... 6.7. Evaluasi pemahaman materi... Daftar Pustaka.... BAB 7 CONTOH KARAKTERISASI MATERIAL DENGAN MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI.... 7.1. — Identifikasi morfologi pori 7.2. Identifikasi Fasa.. 7.3. — Identifikasi nanopartikel dalam komposi 7.4. Evaluasi pemahaman materi Daftar Pustaka. BIOGRAFI PENULIS ix | Transmisi ElektronBahan dengan hak ciptaGambar 1.1. Gambar 1.2. Gambar 1.3. Gambar 1.4. Gambar 3.1 Gambar 3.2. Gambar 3.4. Gambar 3.5. Gambar 3.6. Gambar 3.7. Gambar 3.8. Gambar 3.9. Gambar 3.10. Gambar 4.1. Gambar 4.2 Gambar 4.3. Gambar 4.4. Gambar 4.5. Gambar 4.6. Gambar 4.7. Gambar 4.9. Gambar 5.1. Gambar 5.2. Gambar 5.3. Gambar 5.4. Gambar 5.5. DAFTAR GAMBAR Skema alat optik mikroskop cahaya Skema peralatan optik SEM Sistem ruang pada SEM (atas) dan ESEM (bawah) Bagan peralatan optik pada STEM. Pembentukan interferensi konstruktif (a) dan destruktif (b) oleh 2 gelombang... Interaksi elektron dan materi Proses pembentukan electron sekunder 1 Pembentukan elektron sekunder 2.. Proses pembentukan elektron Auge Proses pembentukan sinar-X karakteristik .. Transmisi elektron pada sebuah atom... Proses hamburan elektron pada suatu atom....... 39 Bentuk volume interaksi electron dan materi dengan kedalaman berbeda. AL Foto 1 set peralatanTEM dari tampak sebelah kiri dan kanan serta papan panel (bawah) hasil pemotretan.45 Bagan jalur optik pada struktur TEM.. 50 Pengaruh tegangan listrik terhadap panjang gelombang elektron dan resolusi TEM Pistol emisi medan Pistol filamen tungsten.. Struktur dasar lensa elektromagnetik. Celah lensa obyektif.... 7 Foto specimen holder hasil pemotretan ..ne:iernnneue56 Jalur optik untuk pembentukan: a) mode difraksi dan b) mode gambar SAD... ny 61 Kontras akibat densitas-massa pada TEM 63 Pembentukan kontras gambar pada mode BF. 65 Kumpulan kristal dengan fasa sama dengan orientasi berbeda-beda memberikan pola cincin-cincin difraksi pada TEM... 67 Jalur optik pada pembentukan gambar BF dari berkas electron yang ditransmisikan (hasil modifikasi terhadap gambar. .69 xi | Transmisi ElektronGambar 5.6. Gambar 5.7. Gambar 5.8. Gambar 5.9. Gambar 5.10. Gambar 5.11. Gambar 6.1. Gambar 6.2. Gambar 6.3. Gambar 6.4. Gambar 6.5. Gambar 6.7. Gambar 6.8. Gambar 6.9. Gambar 6.10. Gambar 7.1. Gambar 7.2. Gambar 7.3. Gambar 7.4. Gambar 7.5. Gambar 7.6. Gambar 7.7. Gambar 7.8. Gambar 7.9. Gambar 7.10. Pemilihan bercak dengan celah obyektif pada pembentukan medan terang dan medan gelap.......... Jalur optik pada pembentukan gambar mode gelap dengan metode “displaced aperture dark field Imaging”. Jalur-optik pada pembentukan gambar mode gelap_ dengan metode centered dark field imaging Pembentukan kontras fasa dari spesimen kri: Jalur optik pada pembentukan gambar dengan kontras fasa..... Pembentukan pola difraksi pad: Sketsa alat gergaji intan.... Sketsa gergaji pita intan.... Sketsa gergaji lingkaran intan... Sketsa alat gergaji asam Sketsa alat penggiling tangan untuk penyiapan spesimen TEM.. Daerah cekungan pada piringan spesime Diagram skematik jet polishing secara elektrokimia 86 Proses ion milling: a) penggilingan lesung, b) ion milling eon Foto alat ultramikeotom hasil pemotretan Foto TEM morfologi pori karbon aktii Pola layer pada foto TEM karbon yang mengindikasikan grafen..... Pola difraksi monokristalin yang ditunjukkan oleh karbon hasil sintesis. 99 tal dengan TEM.. 87 vin 98 Perhitungan nilai d-spacing pada kri Pola difraksi difus pada sampel campuran serat ranting dan akar nilam. Pola difraksi cincin dan difuse pada foto TEM karbon hasil sintesis.. aise 101 Penentuan ukuran d-spacing pada polikristalin...... 102 Foto TEM mode terang (BF) komposit karbon yang mengandung nanopartikel... 103 Foto TEM mode gelap (DF) komposit karbon yang mengandung nanopartikel.. 104 Penentuan ukuran nanopartikel pada foto TEM....... 104 xii | Transmisi Elektronxiii | Transmisi ElektronBahan dengan hak ciptaDAFTAR TABEL Tabel 1.1. Perbedaan mikroskop elektron dan mikroskop cahaya......6 Tabel 1.2 Kelebihan dan kekurangan mikr karakterisasi nano materia Tabel 4.1. Bagian alat TEM yang tampak dari luar tabung TEM. Tabel 5.1. Perbandingan antara difraksi sinar X dan SAD pada TEM. ess skop elektron untuk xv) Transmis| ElektronBahan dengan hak ciptaMIKROSKOP ELEKTRON DAN MIKROSKOP CAHAYAPada sub bab ini diuraikan pengertian tentang mkroskop, persamaan dan perbedaan mikroskop elektron dan cahaya, keunggulan mikroskop elektron dibandingkan mikroskop cahaya, kelemahan mikroskop elektron dibandingkan mikroskop cahaya, macam-macam mikroskop elektron dengan prinsip kerja masing- masing secara singkat, serta bidang-bidang aplikasi_ mikroskop elektron dan mikroskop cahaya. Tujuan uraian materi pada sub bab ini adalah untuk memberikan gambaran perbandingan antara mikroskop elektron dan mikroskop cahaya. 1.1. Pengertian mikroskop cahaya dan mikroskop elektron Alat yang dapat memperbesar bayangan benda yang terlalu kecil untuk dilihat dengan mata telanjang disebut mikroskop. Pembuatan mikroskop pertama kali terjadi pada abad ke - 16 dan digunakan untuk penelitian secara luas sejak abad ke - 17. Mikroskop berasal dari kata micro yang berarti kecil dan scopium yang berarti penglihatan Terdapat 2 macam mikroskop, yaitu mikroskop cahaya dan mikroskop elektron. Mikroskop cahaya disebut juga mikroskop optik adalah mikroskop yang menggunakan sumber cahaya (foton) untuk memvisualisasikan gambar. Sumber foton tersebut bisa sinar matahari (pada mikroskop cahaya konvensional) atau lampu (pada mikroskop cahaya modern). Mikroskop elektron adalah mikroskop yang menggunakan elektron statik dan elektro magnetik untuk mengontrol pencahayaan. dan tampilan gambar. Mikroskopi elektron sendiri adalah bidang ilmu sains yang menggunakan mikroskop sebagai alat dan radiasi elektron untuk membentuk gambar spesimen. Foto alat mikroskop cahaya dan mikroskop elektron terdapat pada Gambar 1.1. 2 | Transmisi Elektronlamp Lensa gelas (lensa kondensor) Tempat sampel (slide) Lensa gelas (lensa obyektif) Lensa gelas (lensa proyektor) Gambar —— akhir Jj Gambar 1.1. Skema alat optik mikroskop cahaya [hasil modifikasi dari gambar Kaech (2012)] 1.2. Keunggulan mikroskop elekton dibandingkan mikroskop cahaya Mikroskop elektron dibuat pertama kali oleh ahli fisika berkebangsaan Jerman pada tahun 1932 yang bernama Ernest Ruska. Penemuan Ruska didasarkan pada 2 macam konsep, yaitu : 1) elektron memiliki komponen seperti gelombang sehingga dapat diolah seperti gelombang cahaya 2) elektron dapat dimanipulasi dengan medan magnet sehingga dapat difokuskan seperti lensa optik memfokuskan cahaya Perbesaran suatu mikroskop dipengaruhi oleh resolusinya. Resolusi adalah kemampuan untuk membedakan antara rincian- 3 | Transmisi Elektronrincian kecil dari suatu gambar. Resolusi berkaitan dengan jarak minimum antara 2 titik sehingga keduanya dapat dilihat/dibedakan sebagai 2 titik. Resolusi mikroskop dipengaruhi oleh difraksi cahaya, oleh karena itu juga dipengaruhi oleh panjang gelombang radiasi yang digunakan. Pengaruh panjang gelombang terhadap __ resolusi mikroskop dapat dilihat dari rumus berikut: _ 06a ~ sina dengan R = resolusi A= panjang gelombang = indeks refraksi medium c= sudut sinar dating Makin pendek panjang gelombang sinar radiasi makin kecil nilai R, makin baik resolusinya, artinya makin mampu membedakan rincian-rincian kecil dari suatu gambar. Panjang gelombang terpendek sinar tampak adalah 400 nm, sedangkan panjang gelombang elektron 10.000 kali lebih kecil dari radiasi cahaya tampak. Resolusi terbaik yang dapat dicapai oleh mikroskop cahaya adalah 0,2 wm, sedangkan yang dapat dicapai oleh mikroskop electron mencapai 0,1 nm. Dengan demikian mikroskop elektron memiliki resolusi yang jauh lebih baik sehingga dapat diaplikasikan untuk memvisualisasikan struktur yang tidak terlihat oleh mikroskop optik. Mikroskop elektron mampu menghasilkan gambar dengan resolusi jauh lebih besar dari mikroskop cahaya akibat penggantian sumber cahaya dengan berkas elektron yang diakselerasi dan penggantian lensa gelas dengan lensa elektromagnetik. 1.3. Persamaan mikroskop elektron dan mikroskop cahaya Terdapat beberapa persamaan antara mikroskop cahaya dan mikroskop elektron pada jalur optiknya, antara lain : 1) Sistem iluminasi (pencahayaan) keduanya sama - sama terdiri atas sumber radiasi dan lensa kondensor yang mengalirkan radiasi elektron ke arah obyek. Lensa kondensor bertugas memfokuskan sinar radiasi dari sumber radiasi pada obyek 2) Obyek sama-sama terletak di antara sumber cahaya dan sistem pencitraan 4 | Transmisi Elektron3) Sama-sama menggunakan lensa obyektif dan lensa proyektor pada sistem pencitraan. Lensa obyektif digunakan untuk memfokuskan berkas setelah melewati spesimen/obyek. Lensa proyektor digunakan untuk memperbesar gambar. 4) Sistem perekaman gambar sama-sama bertugas mengubah radiasi menjadi gambar permanen yang dapat dilihat. 1.4. Perbedaan mikroskop elektron dan mikroskop cahaya Perbedaan utama antara mikroskop elektron dan mikroskop cahaya adalah penggantian radiasi cahaya dengan radiasi elektron. Sebagaimana telah disebutkan pada sub bab 1.2 bahwa radiasi elektron memiliki panjang gelombang yang jauh lebih kecil dibandingkan dengan panjang gelombang radiasi cahaya, yaitu 10.000 kali lebih pendek (energi elektron jauh lebih besar). Akibat dari panjang gelombang yang lebih pendek tersebut maka mikroskop elektron dapat memperbesar obyek dengan perbesaran jauh lebih besar dengan resolusi jauh lebih baik dibandingkan mikroskop cahaya. Dengan demikian mikroskop elektron dapat diaplikasikan untuk memvisualisasikan struktur yang biasanya tidak terlihat oleh mikroskop optik. Akibat energi yang jauh lebih besar tersebut, maka mikroskop elektron juga mampu menembus bidang lebih dalam dibandingkan mikroskop cahaya. Perbedaan sumber radiasi menyebabkan kebutuhan jenis lensa yang berbeda. Mikroskop cahaya menggunakan lensa gelas, sedangkan mikroskop elektron menggunakan lensa elektromagnetik. Hal itu karena elektron adalah partikel bermuatan, karena itu elektron tidak bisa difokuskan atau dibelokkan dengan lensa gelas. Lingkungan vakum sangat dibutuhkan untuk mikroskop elektron karena tumbukan antara elektron berenergi tinggi dan molekul udara dapat menyebabkan absorpsi elektron - elektron oleh molekul udara. Rangkuman perbedaan mikroskop electron dan mikroskop cahaya dituliskan pada Tabel 1.1. 5 | Transmisi ElektronTabel 1.1. Perbedaan mikroskop elektron dan mikroskop cahaya Keterangan Mikroskop Mikroskop cahaya/optik elektron Pembawa Berkas cahaya Elektron (memiliki informasi massa dan muatan) Panjang 400-800 nm 0,0037 nm(100kV) gelombang (tampak) Media udara vakum Lensa gelas elektromagnetik Sudut lubang < 60° 100 um />1mm medan/fokus Mekanisme Absorpsi cahaya, Ketebalan massa, pembentukan refleksi, difraksi, difraksi, fasa kontras hamburan, fluoresensi, birefringence Sumber: Hafner (2008) Skema peralatan optik mikroskop cahaya terdapat pada Gambar 1.1, sedangkan skema peralatan optik mikroskop elektron terdapat pada Gambar 1.2 hingga 1.4. 1.5. Kelemahan mikroskop elektron dibandingkan mikroskop cahaya Sekalipun mikroskop elektron memiliki berbagai kelebihan, namun juga memiliki beberapa kelemahan, antara lain : 1) Persiapan sampel seringkali rumit, misalnya diperlukan melapisi spesimen dengan lapisan logam yang sangat tipis (seperti emas) karena logam ini dapat mencerminkan elektron 2) Sebelum pengukuran dilakukan, sampel harus benar - benar kering, sehingga tidak mungkin untuk mengamati spesimen hidup dan tidak mungkin untuk mengamati spesimen bergerak, 6 | Transmisi Elektron3) Elektron tidak memiliki warna sehingga gambar yang dihasilkan hanya hitam dan putih. Oleh karena itu kadang - kadang gambar harus diwarnai untuk memberikan kesan visual yang lebih baik, 4) _ Energi berkas elektron sangat tinggi, karena itu selain tidak dapat pada benda hidup juga membutuhkan ruang yang besar, 5) Harga mikroskop elektron mahal dan biaya pemeliharaannya cukup tinggi. 1.6. Macam - macam mikroskop elektron Terdapat bermacam —- macam mikroskop elektron, masing- masing memiliki karakteristik yang berbeda sesuai dengan tujuan pembuatannya, antara lain : Mikroskop Pemindai Elektron (Scanning Electron Microscope) Mikroskop pemindai elektron atau Scanning Electron Microscope (SEM) adalah mikroskop electron yang mampu mengamati obyek secara tiga dimensi. SEM dapat digunakan untuk mengamati permukaan sel atau struktur mikroskopik lainnya. SEM modern saat ini memiliki resolusi hingga 1 nm atau perbesaran 400.000 X. Pada SEM, gambar dibuat berdasarkan pendeteksian 2 macam elektron baru, yaitu elektron sekunder (secunder electron) atau elektron pantul (backscattered electron) yang muncul dari permukaan sampel ketika permukaan sampel dipindai dengan sinar elektron. Flektron sekunder selanjutnya diperkuat sinyalnya dan besarnya elektron ditampilkan pada layar monitor. SEM tidak memerlukan sampel yang ditipiskan seperti pada TEM, karena itu SEM dapat digunakan untuk melihat obyek dari sudut pandang 3 dimensi. Bagan mekanisme kerja SEM terdapat pada Gambar 1.2. SEM bekerja pada tegangan listrik antara 2 - 50 kV dengan diameter berkas elektron sebesar 5 nm — 2 um. Gambar diproduksi dari elektron sekunder (SE), backscattered electron (BE), dan sinar-X. Pemisahan SE dan BE diatur menurut energinya. Ketika elektron diemisikan dengan elektron kurang dari 50 eV, maka dianggap sebagai SE, dan jika lebih dari 50 eV maka dianggap sebagai BE. 7 | Transmisi Elektronimage not availableimage not availableit Daa _-High Vacuum, Pump ee for) a7) Ect ae Cao Seed Orr Gambar 1.3. Sistem ruang pada SEM (atas) dan ESEM (bawah) (Uohnson, 1996) 10 | Trensmisi€lektronimage not availableimage not availableimage not availableSTM merupakan instrumen yang disukai untuk menginvestigasi struktur atom Konduktif, misalnya karbon nanotube, fullerene, dan grafen Rangkuman kelebihan dan kekurangan mikroskop elektron untuk karakterisasi nano material terdapat dalam Tabel .1.2. Tabel 1.2 Kelebihan dan kekurangan mikroskop elektron untuk karakterisasi nano material Jenis Karakteristik Kelebihan Kekurangan ME material SEM dan | Ukuran material | Pengukuran sampel _bersifat ESEM | maupun distribusi | distribusi ukuran, | Konduktor atau aleipancnatertal ukuran, dan | dilapisi dengan bentuk — material | konduktor; bentuk material; agregasi material dispersi material dapat dilakukan secara langsung, resolusi. gambar tinggi (hingga mencapai_ ukuran nanometer), gambar biomolekul dalam keadaan — aslinya dapat diamati dengan SEM kondisi sampel yang benar -benar kering; Analisis sampel dilakukan dalam kondisi non fisiologis, —_ kecuali ESEM Distribusi — ukuran dalam sampel heterogen —_secara statistic bias; Peralatan mahal, metode — cryogenic dibutuhkan — untuk kebanyakan NP-bioconjugates; resolusi ESEM tereduksi 14 | Trensmisi€leKtronimage not availableimage not availableaa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.image not availableAPLIKASI MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMIS! DALAM RISET MATERIALimage not availableimage not availableimage not availableaa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.Daftar Pustaka Wahab MA, Darain F, Karim A, BeltraminiJN., 2015, Nano-Confined Synthesis of Fullerene Mesoporous Carbon (C60-FMC) with Bimodal Pores: XRD, TEM, Structural Properties, NMR, and Protein Immobilization. Int J Nanomater Nanotechnol Nanomed , 1(2), 022-029 Hou, D.Z., Gui, RY., Hu, S,, Huang, Y., Feng, Z.Y. and Ping, Q.N. , 2015, Preparation and Characterization of Novel Drug -Inserted- Montmorillonite Chitosan Carriers for Ocular Drug Delivery, Advances in Nanoparticles, 4, 70-84 Sabeti, B., Ibrahim, M., Davoudi, HJET., and Kadivar, A, 2014, Characterization of Diclofenac Liposomes Formulated with Palm Oil Fractions, Tropical Journal of Pharmaceutical Research , 13 (2), 185-190 Bohrey, S, Chourasiya, V, and Pandey, A, 2016, Polymeric nanoparticles containing diazepam: preparation, optimization, characterization, in-vitro drug release and release kinetic study, Nano Convergence, 3(3) Ravisankar, Dey, N., Francis, AP., Pandian K., Devasena, T., 2015, Preparation and characterization of gatifloxacin encapsulated chitosan nanoparticles for ocular drug delivery international journal of innovative research in science, engineering and technology, third national conference on advances in chemistry (ncac - 2015) on 18th february 2015 Hazra, SK. and Basu, S., 2016, Review Graphene-Oxide Nano Composites for Chemical Sensor Applications, Journal of Carbon Research, 2 (12), 1-18 Xiao, X. Song, H,, Lin, $., Zhou, Y., Zhan, Y,, Hu, Z., Zhang, Q, Sun, J., Yang, B., Li, T,, Jiao, L., Zhou, J., Tang, J., & Gogotsi, ¥., 2016, Scalable salt - templated synthesis of two-dimensional transition metal oxides, Nature Communications | 7:11296 | doi: 10.1038/ncomms11296 Zhou, J., Ghoroghi, S., Benito-Martin, A., Wu, H., Unachukwu, UJ., Einbond, L.S., Guariglia, S., Peinado, H., & Redenti, R., 2016, Characterization of induced pluripotent stem cell microvesicle genesis, morphology and pluripotent content Scientific Reports | 6:19743 | DOI: 10.1038/srep19743 Jeong, G.Y,, Park, M.Y., Kandler, K., Nousiainen, T., and Kemppinen, 0., 2016, Mineralogical properties and internal structures of individual fine particles of Saharan dust Atmos. Chem. Phys., 16, 12397-12410 24 | Trensmisi€leKronaa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.aa You have either reached a page that is unavailable for viewing or reached your viewing limit for this book.