Producción de biomasa
▲ Introducción
El objetivo de esta práctica es obtener por medio de
una fermentación la producción de biomasa así
como evaluar el crecimiento de esta misma y el
cambio en los parámetros como pH y el consumo de
la fuente de carbono en función al tiempo.
Importancia de las levaduras en la industria
Dentro de la microbiología industrial, un producto
de interés son las células microbianas. La
producción de éstas se conoce como biomasa,
proteína microbiana o proteína unicelular. Entre los
microorganismos utilizados para este fin se
encuentran las levaduras que pueden servir como
alimento y en panadería, hongos comestibles
cultivados y en caso de las bacterias especies de
Bacillus thuringiensis que emplean para producción
de bioinsecticidas, así como Rhizobium y
Bradyrhizobium producidos para inocular semillas
de leguminosas.
Las levaduras son los microorganismos más
importantes y más ampliamente utilizados en la
industria. Las células de levadura se utilizan en la
fabricación de pan, y también como fuente de
alimento, de vitaminas y de diversos factores de
crecimiento. Los panaderos utilizan la levadura
como agente estimulante del leudante, la masa
antes de su cocción, así como para conferir al pan el
aroma que le caracteriza. Durante el proceso del
leudado la levadura se mezcla con la masa húmeda
en presencia de una pequeña cantidad de azúcar.
Así, la levadura convierte el azúcar en alcohol y CO2,
a continuación de lo cual el CO2 gaseoso se expande
y hace que la masa se levante y se esponje. Cuando
se cuece el pan, el calor expulsa el CO2 y el alcohol,
por lo que se forman agujeros dentro de la masa que
le dan su textura ligera característica.1
Parámetros de importancia en la producción de
biomasa.
Prueba de densidad óptica o turbidez para el
crecimiento de biomasa.
La base común del método consiste en la medición
de la cantidad de luz dispersada o transmitida a
través de un cultivo bacteriano.
Recordemos aquí que las suspensiones bacterianas
dispersan la luz, al igual que cualquier partícula
pequeña suspendida en agua (efecto Tyndall). La
dispersión de la luz es, dentro de ciertos límites,
proporcional a la masa del cultivo.2
Determinación de azúcares reductores.
Los azúcares reductores son aquellos que poseen su
grupo carbonilo intacto y que través del mismo
pueden reaccionar como donadores de electrones
(reductores). Esta propiedad permite determinar la
concentración de una disolución de azúcar midiendo
la cantidad de algún agente oxidante que es
reducido. En este caso el ácido 3,5-dinitrosalicílico
(DNS) (amarillo), se reduce al ácido 3-amino-5-
nitrosalicílico (rojo). El cambio de color y
absorbancia de la disolución es proporcional a la
cantidad de azúcar reductor que reaccionó con el
DNS por lo que puede ser cuantificado realizando
una curva de concentración de concentración de
azúcar reductor (glucosa) contra absorbancia.3
Medición de pH.
Puede indicar el grado en que está avanzando la
fermentación de la fuente de carbono, ya que la
levadura produce compuestos ácidos que
disminuyen el pH del medio.
▲ Metodología
 Preparación de medios.

Se preparó 700 mL de un Se preparó 200 mL de un Se preparó 50 mL de un

medio de cultivo MEM* con
sacarosa al 1.5%, se calentó
para disolver y se esterilizó
a 15 lb/121°C/15 min.
Medio 3 (M3).
medio de cultivo MEM* con
sacarosa al 1.0%, se calentó
para disolver y se esterilizó
a 15 lb/121°C/15 min.
Medio 2 (M2)
medio de cultivo MEM* con
sacarosa al 0.5%, se calentó
para disolver y se esterilizó
a 15 lb/121°C/15 min.
Medio 1 (M1).

Composición del medio MEM*

Sacarosa 1.5,1.0 o 0.5%
(NH4)2 SO4 2.0 %
NH4H2PO4 0.04 %
MgS04H20 0.25 %
Extracto de levadura 0.25 %
pH 4.5-5.0

 Preparación de inóculo.

A partir de un cultivo Se incubó a

Se tomó un inóculo de
puro de S. cerevisiae temperatura ambiente
10%v/v y se transfirió
se inoculó el medio en agitación a 200 rpm
al medio M2.
M1. durante 24 h.

Se incubó a
Se incubó a
temperatura ambiente Se tomó un inóculo de
temperatura ambiente
en agitación a 200 rpm 10%v/v y se transfirió
en agitación a 200 rpm
durante 4-5 horas al medio M3.
durante 24 h.
para análisis.

 Determinación de diversos parámetros.

Turbidez D.O.: pH: Azúcares reductores:

Se tomó una muestra
Se tomó una muestra Se midió el pH de a de 0.1 mL cada 50 min
de 6 mL cada 50 min y cada muestra antes y se midieron los
se midió la de la determinación azúcares reductores a
absorbancia a l=665 de turidez. l=540 nm.
nm. (4 tiempos) (4 tiempos) (4 tiempos)