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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

INFORME TÉCNICO DE LA OPCIÓN CURRICULAR EN LA MODALIDAD DE:

ESTANCIA INDUSTRIAL

TITULO:

“LÍMITE MICROBIANO”

QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:

INGENIERO FARMACÉUTICO

PRESENTA:

AGUILAR ROMERO ARLETTE

ASESOR EXTERNO: QBP. MA. DE JESÚS PURECO OJEDA

ASESOR INTERNO: QBP. MIRIAM JUÁREZ JUÁREZ

EVALUADORES: QFB. MA. DE LOURDES MORENO RIVERA

IBT. VERÓNICA GABRIELA LUNA FONTAINE

MÉXICO, D.F. MAYO DE 2009


INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA

“LÍMITE MICROBIANO”
Arlette Aguilar Romero*, QBP Ma. De Jesús Pureco Ojeda1, QBP. Miriam Juárez Juárez2
1Jefe del departamento de Microbiología Bristol-Myers Squibb de México planta San Ángel, número telefónico 53378200 Ext 2502 e-

mail maria.pureco@bms.com
2Departamento de Biología en la Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología Av. Acueducto s/n, Barrio La Laguna, Col.

Ticomán, México, D.F. , C.P. 07340, Teléfono: 5729-6000, extensión: 56347


Palabras claves: OMAs, Hongos, levaduras, microorganismos patógenos

Introducción: Los productos farmacéuticos son agentes Resultados y discusión:


químicos utilizados terapéuticamente para tratar
enfermedades. Actualmente, los medicamentos son usados Tabla 4. Resultado de los productos analizados de Febrero
para la prevención, así como para el tratamiento de a Septiembre 2008
enfermedades o sus consecuencias.
Se exponen los aspectos considerados en la evaluación Producto Lote Análisis
Tabletas
Especificaciones Dilución Resultado
sanitaria de productos farmacéuticos de importación y Mic Mesófilicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10
A PT001
producción nacional. Se relatan los procedimientos Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10
establecidos para aprobar y considerar un producto como apto Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
para uso o consumo humano. La evaluación de los productos B PT002
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
farmacéuticos por el Registro sanitario se basa en el análisis E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
de la materia prima, producto intermedio y producto terminado,
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
de interés particular en casos necesarios. Se mencionan los C PT003
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
análisis microbiológicos más importantes. Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
Es importante en la producción de los medicamentos, por lo Mic Mesófilicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia D PT004
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
prima más usada y además está presente en otros procesos Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua
también puede actuar como vehículo de microorganismos y su Conclusiones: En la tabla No. 4 aparece el conteo total de
carga microbiana dependerá del método de obtención, microorganismos presentes en cada uno de los lotes
distribución y/o almacenamiento. analizados, además del análisis de microorganismos
Metodología: La técnica consiste en diluir la muestra en un patógenos objetables los cuales deben de cumplir con los
medio de cultivo y luego sembrar una pequeña cantidad de la límites establecidos
dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la placa El conteo total de microorganismos mesofilos aerobios se
debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que mantienen dentro de los límites establecidos para cada uno de
se han formado colonias visibles, generalmente después de un los productos y los resultados de microorganismos objetables
día, se seleccionan para el recuento de colonias las placas en durante el periodo de Febrero a Septiembre fueron ausentes
las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen La materia prima es importante la investigación de
entre 30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la microorganismos patógenos objetables debido a que la
rapidez del recuento y la precisión en el resultado obtenido. El materia prima constituye una de las principales fuentes de
número de colonias de una placa, junto con la dilución de la contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos
muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la pueden contaminar el producto del cual forman, durante el
concentración de células presente en la muestra original. análisis microbiológico la materia prima cumplió con las
Para el análisis de agua, recolectar la muestra. Identificar las especificaciones
muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis utilizando Referencia:
material y medios esterilizados y bajo condiciones de 1. Farmacopea de los Estados Unidos de América;
esterilidad, colocar la membrana en la base del filtro, Formulario Nacional; Vol. 1; Edición anual en español
asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL para (USP)
filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el 2. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos;
medio de cultivo, incubar las placas en posición invertida entre octava edición; Vol. I 2004; México (FEUM)
30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de 3. http://www.bristol.com.mx
incubación tomar lecturas y registrar en bitácora. 4. NOM-059-SSA1-1993 Buenas practicas de
fabricación
5. NOM-073-SSA1-2005 Estabilidad de Fármacos y
Medicamentos
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Dedicatorias

A Dios por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme dado salud para lograr mis objetivos,
además de su infinita bondad y amor.

A mi madre Francisca Romero por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores,
por la motivación constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero más que nada, por su
amor.

A mi padre Tomas Aguilar por los ejemplos de perseverancia y constancia que lo caracterizan y que
me ha infundado siempre, por el valor mostrado para salir adelante y por su amor.

A mis Hermanos Dolores, Javier, Janeth, Jaime y Tomas por que siempre he contado con ellos para
todo, gracias a la confianza que siempre nos hemos tenido; por el apoyo y amistad

Amigos que gracias al equipo que formamos logramos llegar hasta el final del camino y que hasta el
momento, seguimos siendo amigos: Elvia Yanit García, Guadalupe Hernández, Liliana Lizeth García
y Miguel Ángel Soto

Abraham Vásquez por aguantarme en todos estos momentos difíciles y por enseñarme que no hay
limites, que lo que me proponga lo puedo lograr y que solo depende de mi.

Y a todas aquellas personas que de una u otra forma, colaboraron o participaron en la realización de
este proyecto, hago extensivo mi más sincero agradecimiento.

Arlette Aguilar Romero


“LÍMITE MICROBIANO”

TEMA PÁGINA

1 Introducción y Descripción de la compañía 5


1.1 Misión 7
1.2 Visión 8
1.3 Historia 8
1.4 Giro de la empresa 9
1.5 Organigrama 11

2 Proyecto: " LÍMITE MICROBIANO" 12


2.1 Introducción 12
2.1.1 Recuento de microorganismos viables 12
2.1.1.1 Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios 14
2.1.1.2 Investigación de microorganismos objetables 14
2.1.1.3 Efectividad de Preservativos antimicrobianos 15
2.1.1.4 Promoción de crecimiento 16
2.1.2 Estabilidades 17
2.1.3 Análisis de aguas 18
2.1.3.1 Endotoxina 19
2.1.3.2 Método de Gelificación 20
2.2 Justificación 21
2.3 Objetivos generales 22
2.4 Objetivos específicos 22
2.5 Metodología 23

3 Resultados 34
3.1 Análisis de Resultados 38

4 Conclusiones 43

5 Glosario 44

6 Anexos 45

7 Recomendaciones para estancias futuras 55

8 Referencias 56

1
“LÍMITE MICROBIANO”

ABREVIATURAS

Abreviatura Significado

ABP Agar Baird-Parker


AC Agar Cetrimida
ADS Agar Dextrosa Sabouraud
AMC Agar MacConkey
ASB Agar Sulfito Bismuto
AST Agar Soya Tripticaseína
AVB Agar Verde Brillante
AVJ Agar Vogel-Johnson
BMS Bristol-Myers Squibb
CL Caldo Lactosado
CSC Caldo Selenito Cistina
CST Caldo Soya Tripticaseína
CT Caldo Tetrationato
LAL Lisado de Amebocitos de Limulus
MP Materia Prima
OMA Organismos mesófilos aerobios
OTC Automedicación
PI Producto Intermedio
PT Producto terminado

UFC Unidades Formadoras de Colonias


XLD Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato

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“LÍMITE MICROBIANO”

ÍNDICE DE TABLAS

No Tema Página

Tabla 1 Agentes inactivantes


Tabla 2 Estudio de estabilidades 20
Tabla 3 Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico 21
Tabla 4 Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo). 22
Tabla 5 Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008 34
Tabla 6 Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008 35
Tabla 7 Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008 36
Tabla 8 Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008 37
Tabla 9 Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de 52
cultivos selectivos-diferenciales
Tabla 10 Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios 52
de cultivos selectivos-diferenciales
Tabla 11 Características morfológicas de Salmonella sp sobre medios de cultivos 53
selectivos-diferenciales
Tabla 12 Características morfológicas de Escherichia coli sobre medios de cultivos 53
selectivos-diferenciales
Tabla 13 Características medios de cultivos para el análisis de agua 54

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“LÍMITE MICROBIANO”

ÍNDICE DE FIGURAS Y GRAFICOS

No Tema Página

Figura 1 Organigrama Control de Calidad 11


Grafico 1 Método en placa para identificación de OMA 24
Grafico 2 Recuento de hongos filamentosos y levaduras 26
Grafico 3 Investigación de Pseudomona aeruginosa y 28
Staphylococcus aureus
Grafico 4 Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp 30
Grafico 5 Análisis de Aguas Filtración al vacío 32

4
“LÍMITE MICROBIANO”

1.- DESCRIPCIÓN DE LA EMPRESA.

Bristol-Myers Squibb (BMS) es una de las diez principales empresas


farmacéuticas en el mundo. Su Misión es "prolongar y mejorar la calidad de la vida
humana a través de productos farmacéuticos, nutricionales y para el cuidado de la
salud de la más alta calidad e innovación".
La compañía tiene dos divisiones: una Farmacéutica y otra denominada Grupo
para el Cuidado de la Salud, que se compone de la empresa nutricional Mead-Johnson.
Constituye un equipo de aproximadamente 43,000 empleados en 300 sitios en más de
100 países en el mundo.
BMS se ha convertido en un líder global en materia de salud. Busca hacer una
diferencia en la vida de las personas en los lugares donde tiene operaciones,
descubriendo y desarrollando fármacos innovadores para atender necesidades no
cubiertas por los medicamentos disponibles, así como fabricando productos
nutricionales y para el cuidado de la salud de la más alta calidad.
BMS invierte anualmente casi 3 mil millones de dólares en investigación y
desarrollo de nuevos medicamentos y productos en seis centros de investigación en
diferentes países del mundo. Es la compañía que durante 2007 obtuvo más patentes en
la industria farmacéutica en los Estados Unidos y obtuvimos 9 aprobaciones sanitarias
por parte de la Food & Drug Administration (FDA) en menos de cinco años, cinco de las
cuales obtuvieron revisión prioritaria por parte de esta autoridad.

Las áreas terapéuticas de enfoque para la investigación de nuevos productos son:


Cardiología (aterosclerosis y trombosis),
Trastornos metabólicos (diabetes y obesidad),
Sistema Nervioso Central (trastornos psiquiátricos, Alzheimer y demencia),
Virología (VIH-SIDA, Hepatitis B),
Oncología e Inmunología (Artritis y trastornos autoinmunes, así como
trasplantes).
En la lucha contra enfermedades graves, las terapias basadas en derivados
proteicos de origen biológico tienen un papel cuya importancia se incrementa. Para
reafirmar el compromiso con los pacientes y continuar descubriendo medicamentos

5
“LÍMITE MICROBIANO”

innovadores, la compañía está redirigiendo sus esfuerzos y negocio hacia el campo de


la biotecnología.

La búsqueda estratégica de asociaciones con empresas biotecnológicas ayudarán a


fortalecer el portafolio de productos de la compañía, mejorando la tecnología y
manteniendo la productividad de la línea.

A través de los años, Bristol-Myers Squibb y su grupo de científicos han recibido


varias distinciones, incluyendo la "Medalla Nacional de Tecnología", el "Premio Lasker
para la Investigación Médica y el "Premio Prix Galien". La compañía se ha distinguido
año tras año como una de las mejores empresas para madres trabajadoras y es
reconocida como una compañía líder en el manejo seguro de la salud y el medio
ambiente.

BMS EN MÉXICO
A través de todas sus divisiones de negocio, BMS realiza operaciones en México
desde 1947. A lo largo de este tiempo ha desarrollado marcas muy tradicionales y
conocidas que gozan de la confianza de médicos y pacientes.

La División Farmacéutica se destacó hasta muy recientemente por el desarrollo


de antibióticos y de productos cardiovasculares con un amplio reconocimiento entre la
comunidad médica mexicana. Posteriormente BMS gradualmente inició una transición
hacia el desarrollo de productos de alta especialización, particularmente en el área
oncológica. En esta materia, contribuye a revolucionar el arsenal médico mediante
tratamientos de primera línea contra diversos tipos de cánceres.
Más recientemente, BMS ha realizado un esfuerzo considerable para traer al
país de manera simultánea a otros mercados, fármacos innovadores que representan
una nueva alternativa de tratamiento para pacientes de enfermedades graves como
leucemia, hepatitis B, VIH-SIDA, trastornos cardiovasculares y del sistema nervioso
central (esquizofrenia y trastorno bipolar). La innovación de estos productos radica en
nuevas moléculas que cuentan con mecanismos de acción novedosos y que procuran
cuidar la calidad de vida de los pacientes. (3)

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“LÍMITE MICROBIANO”

La presencia de Bristol-Myers Squibb en México también ha sido importante en


el área de medicamentos sin receta médica o autoconsumo (OTC), pues ha
desarrollado productos que cuentan con arraigo y confianza entre la población, tales
como la línea Tempra®, el antipirético y analgésico más prescrito en México; el
antiácido Sal de Uvas Picot®, con más de 75 años en el mercado y Graneodín®, para
el alivio de las molestias en la garganta y las vías respiratorias.

Por su parte, la división nutricional Mead-Johnson también ha ejercido una


importante influencia en el país. Esta compañía cuenta con más de 100 años de historia
abocándose a la investigación y desarrollo de productos nutricionales para la población
infantil. Mead-Johnson es líder mundial a través de una línea completa de productos
entre los que destacan Kindercal®, Protevit®, Enfamil®, Visoles® y Sustagen®. En
México también manejamos los productos Choco Milk® y Cal-C-Tose®, los cuales han
acompañado a generaciones de mexicanos en su nutrición diaria.

La misión de Mead Johnson Nutricionales es convertirse en el líder mundial de


productos nutricionales pediátricos basados en investigación científica para
proporcionar a bebés y a niños el mejor comienzo en la vida.

En México cuenta con tres plantas de producción, dos de ellas en la Ciudad de


México (San Angel y Tlalpan) y otra ubicada en la Ciudad de Delicias, en el Estado de
Chihuahua. En el país BMS cuenta con una fuerza laboral de más de 2,000 empleados
que realizan operaciones a nivel nacional para garantizar la disponibilidad de nuestros
productos en todo momento con la garantía de calidad y seguridad que la ha
caracterizado a lo largo de su historia. (3)

1.1 MISIÓN DE LA EMPRESA.

Extender y prolongar la vida humana, ofreciendo al mercado productos


farmacéuticos y de cuidado personal de la más alta calidad, seguridad y confiabilidad.

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“LÍMITE MICROBIANO”

1.2 VISIÓN DE LA EMPRESA.

Que Bristol-Myers Squibb México sea la empresa más admirada y respetada de


la Industria farmacéutica, promoviendo el alto desempeño de sus empleados,
predicando sus valores con el ejemplo.

1.3 HISTORIA DE BRISTOL MYERS SQUIBB.

Bristol-Myers co. fue fundada en el año de 1887 por dos jóvenes: William M.
Bristol y John R. Myers en Clinton, NY. Desde su inicio el eslogan de sus fundadores
era “No producimos medicamentos, sino productos para la salud que permitan una
mejor forma de vida de nuestros congéneres”.

Sus productos consistían en fármacos locales y poco a poco introdujeron el


concepto de venta sin receta en algunos medicamentos. La empresa tuvo desde su
fundación un rápido éxito y crecimiento hasta convertirse en una corporación mundial
con más de 1, 000 productos en más de 100 países en el mundo.
Mead Johnson fue fundada en 1885 por Edward Mead Johnson y su hermano
james con el nombre de Johnson and Johnson, quienes establecieron una planta de
productos farmacéuticos en N.Y.

En 1967 se fusiono Mead Johnson Co. con Bristol Myers Co. constituyendo
desde entonces uno de los consorcios de productos farmacéuticos y nutricionales más
importantes de los Estados unidos.

Los laboratorios E.R, Squibb and Sons son los más antiguos de la corporación.
Fueron fundados por el doctor Edward R. Squibb en el año de 1856 en NY.

El 3 de octubre de 1989 se realizó la fusión de Bristol-Myers Co. con E.R. Squibb


and Sons, constituyendo Bristol-Myers Squibb Co. (3)

La fusión crea una de las compañías más fuertes del mundo con una posición
líder en los siguientes 4 mercados:
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“LÍMITE MICROBIANO”

Farmacéutico.
Productos de consumo.
Nutricional.
Material de curación.

Con el nombre de Bristol-Myers Squibb, se constituyo la quinta empresa


farmacéutica en el ámbito mundial y nacional.

Bristol-Myers Squibb Co. es una compañía global de origen Estadounidense,


diversificada en el cuidado de la salud. La compañía da empleo a más de 50, 000
personas, en el mundo y opera en más de 60 países.
Actualmente Bristol-Myers Squibb Co. se encuentra entre las compañías líderes
en el descubrimiento y desarrollo de innovadores tratamientos para enfermedades
cardiovasculares, presión alta, diabetes, SIDA, y otras enfermedades infecciosas,
antidepresivos, y analgésicos, además de material de curación. También líderes en
formulas pediátricas.

1.4 GIRO DE LA EMPRESA


Farmacéutico.
Productos de consumo.
Nutricional.
Material de curación.

La división farmacéutica es la división más grande de Bristol-Myers Squibb. Con


más de $200m de ventas en México y $14bn a nivel mundial, es una de las cinco
primeras compañías farmacéuticas del mundo, con presencia en México desde los años
40 del siglo pasado. (3)

Cuenta con áreas de especialización:


Antiinfecciosos
Cardiovasculares
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“LÍMITE MICROBIANO”

Oncológicos
OTC (automedicación)
VIH
SNC

PRODUCTOS.

Antiinfecciosos.
Indicados en el tratamiento de infecciones en vías respiratorias, vías urinarias,
gastrointestinales y de piel.

Cardiovasculares.
Indicados en el tratamiento de hipertensión arterial, enfermedad coronaria, reducción
riesgo de infarto.

Oncológicos.
Indicados en el tratamiento de leucemia y cáncer de colon y recto.

OTC
Productos de venta directa al público. Indicados en el tratamiento de dolores (cabeza,
espalda, muelas, oídos, musculares), hiperacidez gástrica, irritaciones leves de
garganta, antiinflamatorio, etc

VIH
Indicados para el tratamiento de pacientes (adultos y niños) infectados con VIH.

Sistema Nervioso Central.


Indicado para el tratamiento de la esquizofrenia y trastorno bipolar.

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“LÍMITE MICROBIANO”

1.5 ORGANIGRAMA

Director Regional Ops. De


Gerencia Calidad Latinoamérica
General
Ops. Técnicas
Gerencia QC/QA y Resp. Sanitario MJ

Asistente

Gerencia QA y Resp Gerencia Sist. de Calidad


Sanitario BMS

Coord. GMP Jefatura QC

Sup. Inspecc. Sup. Docum.

Sup. Mét. Anal. y Estab. Super. Microbiología

Sup. Entrenamiento

Quím. Quím.. Quím. Analista Quím. Analista Quím. Analista


Quím..
Proceso Materiales Docum.

Figura 1. Organigrama Control de Calidad

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“LÍMITE MICROBIANO”

2. Proyecto: LIMITE MICROBIANO


Farmacopea de los Estados Unidos (FEUM) Método General de Análisis <0571>

2.4 INTRODUCCIÓN

Durante el proceso de fabricación, almacenamiento y uso, los medicamentos son


susceptibles de contaminarse con microorganismos como bacterias, hongos y
levaduras, y por consiguiente se pueden deteriorar. (1)

La contaminación de los productos farmacéuticos, representa un riesgo para la


salud del usuario; este riesgo se relaciona con la severidad de la infección o
enfermedad que los microorganismos contaminantes, patógenos u oportunistas,
pueden producir ya que el deterioro microbiano podría conllevar a cambios en las
características físicas y químicas que conducirían a que el producto deteriorado no sea
apto para ser usado. (2)(4)(5)

Este análisis o control microbiológico de las materias primas y de los productos


farmacéuticos, involucra la realización de dos tipos de ensayos:
a. Recuentos microbianos, referidos básicamente al recuento total de bacterias
aerobias mesófilas y/o recuento de hongos y levaduras.
b. Investigación de microorganismos patógenos objetables, llamados también
indicadores específicos, como Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas
aeruginosa y Staphylococcus aureus, etc.

2.4.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES

Estimar el número de microorganismo aerobios viables, hongos y levaduras en


las diferentes etapas de manufactura (materia prima, material de empaque, producto en
proceso, producto terminado) emplear la técnica de recuento en placa, así como la
identificación de microorganismos presentes en productos farmacéuticos.

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“LÍMITE MICROBIANO”

Se trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el


producto. Este número no guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo
que no puede usarse como índice de su presencia

Dependiendo de las características del medio utilizado y de las condiciones de


incubación los microorganismos analizados serán miembros de poblaciones diferentes.
En general se investiga la presencia de microorganismos aerobios viables, hongos y
(1)
levaduras puede ser de interés

La técnica consiste en diluir la muestra en un medio de cultivo y luego sembrar


una pequeña cantidad de la dilución en una placa o bien mezclarla. A continuación, la
placa debe ser incubada en las condiciones adecuadas. Una vez que se han formado
colonias visibles, generalmente después de un día, se seleccionan para el recuento de
colonias las placas en las que éstas están bien separadas. Las placas que tienen entre
30 y 300 colonias ofrecen una buena relación entre la rapidez del recuento y la
precisión en el resultado obtenido. El número de colonias de una placa, junto con la
dilución de la muestra que se inoculó en ella, nos permite calcular la concentración de
células presente en la muestra original

La ventaja del método de recuento en placa es su gran sensibilidad. Si se utiliza un


medio y unas condiciones de incubación adecuadas, puede detectarse incluso una
única célula viva. Además, el recuento en placa no requiere un equipo complicado. Un
inconveniente es que el recuento en placa es lento y tedioso y no es muy preciso,
porque la precisión depende del recuento de un número elevado de colonias. La
precisión aumenta con el número de colonias que se recuentan, ya que disminuye el
error debido al muestreo. (2)(6)(7)

El análisis microbiológico puede ser:

Directo, es decir, la muestra se toma de forma directa para inocular en las


placas, al medio de cultivo antes de agregarse se le inocula un inactivante
para neutralizar los conservadores que incluyen los productos los cuales
impiden el crecimiento de microorganismos dando como resultado falsos
negativos.
13
“LÍMITE MICROBIANO”

Diluciones, la muestra se transfiere al diluyente seleccionado el cual


contiene el inactivante.

2.4.1.1 RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESOFÍLICOS AEROBIOS

• Sólidos y Líquidos miscibles en agua: pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL


de muestra y transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado.

• Sólidos insolubles, tabletas y grageas: pulverizar la cantidad necesaria de


muestra para obtener 10 g y transferirla a 90 mL del diluyente seleccionado.

• Líquidos no miscibles en agua: medir exactamente 10 mL del producto,


transferirlo a 90 mL del diluyente seleccionado adicionando el Polisorbato 20.

• Ungüentos y ceras: pesar 10 g de la muestra, agregar la cantidad mínima


necesaria de Polisorbato 20 para que al agitar con una barra magnética estéril se
forme una pasta, calentar en baño de agua a una temperatura que no exceda de
45°C y agregar gradualmente el volumen necesario para completar 90mL con el
diluyente seleccionado.

• Líquidos Viscosos: Para muestras viscosas que no puedan medirse con pipeta
en la dilución 1:10, efectuar diluciones 1:50 o 1:100. (2)

2.4.1.2 INVESTIGACIÓN DE MICROORGANISMOS OBJETABLES

En función de la vía de administración del producto, se procede a la investigación de los


microorganismos objetables señalados a continuación: (2)

• Productos dérmicos, rectales y vaginales:


Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus.
• Productos orales:
Escherichia coli y Salmonella sp
• Materias primas:
Pseudomonas sp.

14
“LÍMITE MICROBIANO”

2.4.1.3 EFECTIVIDAD DE PRESERVATIVOS ANTIMICROBIANOS

Una gran cantidad de productos farmacéutico se presentan de manera general como no


estériles; sin embargo, esto no debe representar ningún riesgo para el paciente, ni
modificación de la calidad de la preparación en las condiciones normales de uso y de
empleo. Debido a esto, en algunos productos se incluye algún preservativo en la
formulación, con efectos antifúngicos y antibacterianos. La presencia de estas
sustancias hace necesario, antes de evaluar la calidad microbiológica, neutralizar la
actividad del preservativo en el producto, para demostrar que las muestras ensayadas
no inhiben el crecimiento de los microorganismos debido al preservativo o al principio
activo por sí mismo. (2)

Tabla 1. Agentes inactivantes

Preservativo Agente inactivante


Alcoholes:
Polisorbato 20 u 80 al
Clorobutanol 10%
Polisorbato 20 u 80 al
Feniletil alcohol 10%
Ésteres:
Metil p-hidroxibenzoato al Polisorbato 20 u 80 al 5%
0,18%
Propil p-hidroxibenzoato al Lecitina al 0,07% y
0,02% Polisorbato 80 al 5%
Mercuriales:
Nitrato o acetato fenil Lecitina al 0,5% y
mercúrico al 0,002% Polisorbato 80 al 3%
Sales cuaternarias de amonio:
Lecitina al 0,5% y
Cloruro de benzalconio
Polisorbato 80 al 3%
Penicilina Penicilinasa
Sulfas Ácido para-amonio
benzoico (PABA)
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

Por consiguiente para demostrar la neutralización efectiva del preservativo en el efecto


inhibidor de las muestras, se realiza un ensayo adicional, preliminar considerando como
control positivo que consiste en inocular los caldos de enriquecimiento que se utiliza en
las técnicas descritas, con 1mL de una dilución 10 -3 de un cultivo de 24 horas de cada

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“LÍMITE MICROBIANO”

uno de los microorganismos de prueba, añadir la cantidad apropiada de muestra y


proceder a la recuperación.

La validez de la prueba se basa en su capacidad para poner en evidencia los


microorganismos presentes en el producto, por lo que es necesario demostrar que bajo
las condiciones de la prueba al analizar el producto, es posible recuperar los
microorganismos de las pruebas previamente inoculados en la muestra.

Microorganismos a prueba:
Candida albicans
Aspergillus niger
Escherichia coli
Pseudomona aeruginosa
Staphylococcus aureus
Zigosaccharomyces riouxi

Para cada producto farmacéutico se deben utilizar los microorganismos que se


requieran identificar basándose en las referencias oficiales. (2)

2.4.1.4 PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO

Para cada bacteria a ser cultivada para cualquier propósito es necesario proveer
el ambiente bioquímico y biofísico apropiado. El ambiente bioquímico (nutricional) se
hace disponible como medio de cultivo, y dependiendo de las necesidades especiales
de cada bacteria particular se ha desarrollado una gran variedad y tipos de medios de
cultivo con diferentes propósitos y utilizaciones. Los medios de cultivo son empleados
para el aislamiento y mantenimiento de cultivos puros de bacterias y también son
utilizados para la identificación de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioquímicas
y fisiológicas.
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas
y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos
medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su

16
“LÍMITE MICROBIANO”

fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y


reproducibilidad de los resultados obtenidos. (1)

2.4.2 ESTABILIDADES

El objetivo de los estudios de estabilidad, es proporcionar evidencia


documentada de cómo la calidad de un fármaco o un medicamento varía con el tiempo,
bajo la influencia de Factores ambientales como: temperatura, humedad o luz. Los
Estudios permiten establecer las condiciones de almacenamiento, periodos de
reanálisis y vida útil.

El fabricante, tiene que diseñar y realizar los estudios de estabilidad


correspondientes que permitan obtener una información segura y demuestren cómo
varía su calidad con una formulación y un envase determinado durante el tiempo y bajo
la influencia de las condiciones de almacenamiento al que esta siendo sometido. Esta
información le permitirá proponer un periodo de validez durante el cual puede utilizarse
de forma segura y confiable.

Sabemos que inicialmente un producto farmacéutico puede distribuirse y


comercializarse en cualquier parte del mundo, por lo cual se hace necesario que el
medicamento que esta siendo elaborado y consumido en alguna parte del mundo sea
igualmente eficaz en otra. La estabilidad de los productos farmacéuticos depende
principalmente de factores ambientales, tales como temperatura y humedad, que
juegan un papel muy importante en los resultados que se obtienen en las propiedades
tanto fisicoquímicas y biológicas de los productos farmacéuticos, siendo muy importante
tomar en cuenta la forma farmacéutica y el envase primario – secundarios. (5)

17
“LÍMITE MICROBIANO”

Tabla 2. Estudio de estabilidades

Condiciones de Periodo Frecuencia de


Tipo de Estudio Mínimo
Almacenamiento Análisis
Estabilidad acelerada 40°C ± 2°C/75% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses
Estabilidad a condición 30°C ± 2°C/65% ± 5% HR 6 meses 0, 3 y 6 meses
intermedia
Estabilidad a largo 25°C ± 2°C/60% ± 5% HR o 12 meses 0, 3, 6, 9 y 12
plazo 30°C ± 2°C/65% ± 5% HR meses

2.4.3 ANÁLISIS DE AGUAS

El sistema de agua purificada es "El corazón de la industria farmacéutica". El


agua es un factor importante en la producción de los medicamentos, por lo tanto su
calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está
presente en otros procesos relacionados con dicha producción. Sin embargo, el agua
también puede actuar como vehículo de microorganismos y su carga microbiana
dependerá del método de obtención, distribución y/o almacenamiento. Es por ello que el
agua podría considerarse una fuente potencial de contaminación bacteriana de los
medicamentos. La FEUM clasifica al agua para uso farmacéutico en diferentes tipos, de
acuerdo principalmente a su forma de presentación, uso y límites microbianos
establecidos para cada caso. (2)(9)
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

El aseguramiento de la calidad microbiológica del agua para uso farmacéutico


está dado en varios niveles: por un lado se requiere la validación del sistema de
producción de agua lo que requiere monitoreo, fijar y respetar lo niveles de alerta y
acción, y mantenimiento de la validación; además, se requiere el control del agua como
producto final del proceso y en cada caso crítico de la producción del fármaco, cuando
ésta es empleada como ingrediente. Los límites microbianos se establecen
dependiendo del uso que se le da al agua. (12)(13)

Existen diferentes técnicas para el control microbiológico del agua, las cuales
pueden emplearse para el recuento de los organismos viables presentes en la muestra
de agua. El análisis general contempla la determinación del número de

18
“LÍMITE MICROBIANO”

microorganismos presentes en un volumen determinado de agua, ausencia de


microorganismos coliformes y de microorganismos como fuente de sustancias
pirogénicas.

La elección del método de control microbiológico de la calidad del agua, se debe


basar en los requisitos del sistema que se esta monitoreando, considerando que no hay
ningún método que por si solo sea capaz de detectar los contaminantes microbianos
potenciales en ese sistema. Sin embargo, el método seleccionado debe ser útil para
determinar el número y tipo microorganismos que son significativos con respecto al
control del sistema y al impacto del para cada sistema individual.

Tabla 3. Métodos y límites para los sistemas de agua de uso farmacéutico

Tiempo de Muestra
Tipo de Agua Método Límites
incubación minima
Agua potable Vaciado en placa 30°C - 35°C 1 mL 500 UFC/mL
Filtración por membrana
Agua purificada Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 100 UFC/mL
Agua para inyectables Filtración por membrana 30°C - 35°C 100 mL 10 UFC/mL
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 9a edición; Vol. I 2004; México (FEUM)

2.4.3.1 ENDOTOXINA

Pruebas para detectar o cuantificar las endotoxinas bacterianas que pueden estar
presentes en nuestras muestras. Se usa un Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL)
obtenidos a partir de extractos de amebocitos circulantes del cangrejo herradura
preparado y caracterizado para ser utilizado como Reactivo LAL. (2)

Pirógeno: cualquier sustancia que produce elevación dela temperatura al ser


administrado parenteralmente a humanos o animales.

Endotoxina: sustancia tóxica localizada en la pared celular de las bacterias gram


negativas.

Los niveles de endotoxina pueden reducirse controlando la introducción de


microorganismos y proliferación del sistema
19
“LÍMITE MICROBIANO”

2.4.3.2 MÉTODO DE GELIFICACIÓN

Nos proporciona una estimación de la concentración de endotoxinas bacterianas en


productos. Por lo cual se requiere de establecer una curva estándar de regresión y la
cantidad de endotoxina del material de prueba es determinada por la interpolación en la
curva de calibración mediante el use del Lisado de Amebocitos de Limulus (LAL)
Las técnicas de coagulación detectan o cuantifican las endotoxinas basándose en la
coagulación del reactivo LAL en presencia de la endotoxina. La concentración de
endotoxina necesaria para que el lisado se aglutine en condiciones estándar, es la
sensibilidad declarada en la etiqueta del Reactivo LAL. (2)

Tabla 4. Comparación del Método de Gelificación (LAL) Vs Pirógenos (conejo).

Método de Gelificación (LAL) Pirógenos (conejo)


Rápido (60min) Tarda (180min)
Mayor sensibilidad Pone de manifiesto pirógenos
que no son endotoxinas
Menor cantidad de falsos positivos Mayor numero de falsos positivos
Más económico Alto costo

20
“LÍMITE MICROBIANO”

2.3 JUSTIFICACIÓN
Los productos farmacéuticos terminados, deben ser sometidos a un análisis
microbiológico que demuestre que cumplen con ciertas especificaciones establecidas
por los organismos oficiales, para garantizar que los productos son adecuados para el
uso al que están destinados.

21
“LÍMITE MICROBIANO”

2.1 OBJETIVO GENERAL:


Evaluar la calidad sanitaria de los productos farmacéuticos (materia prima,
producto intermedio, producto terminado), mediante el recuento de
microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras; así como, la
investigación de microorganismos objetables en dichos productos.

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:


Estimar el número de microorganismos viables presentes en diversas formas
farmacéuticas.

Confirmar el periodo de estabilidad de los productos farmacéuticos durante el


cual puede utilizarse de forma segura y confiable

22
“LÍMITE MICROBIANO”

2.5 METODOLOGÍA

Recuento de Microorganismos Mesofílicos Aerobios

Método en placa para identificación de OMA:

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del


diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en
cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Soya
Tripticaseína, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con
el medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición
invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado el tiempo de incubación tomar
lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 1)

Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la


placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas.

Anotar el promedio de colonias por la dilución de trabajo, informar el número de


unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor
de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menor de 10 o
si no se utiliza dilución informar como cero UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(6)(7)

Material

Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL
Espátula estéril.
Cajas petri estériles desechables de vidrio.
Balanza granataria.
Cofía
Cubrebocas
Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril
Agar Soya Tripticaseína
Inactivante (depende del producto)

23
“LÍMITE MICROBIANO”

10 g o 10 mL de
muestra y 90 mL
del diluyente.

1 mL 1 mL

15 mL a 20 mL
de Agar Soya
Tripticaseína

Incubar las placas en posición invertida


entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas.

Grafico 1. Método en placa para identificación de OMA

24
“LÍMITE MICROBIANO”

Recuento de hongos filamentosos y levaduras

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL del


diluyente seleccionado, inocular por duplicado 1.0 mL de cada dilución del producto en
cajas petri estériles, añadir a cada caja de 15 mL a 20 mL del medio Agar Dextrosa
Sabouraud, con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con el
medio de cultivo, permitir que el medio solidifique e incubar las placas en posición
invertida entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días, pasado el tiempo de incubación tomar lecturas
y registrar en bitácora. (Grafico 2)

Después del periodo de incubación, determinar la UFC de la placa 1 (UFC1) y la


placa 2 (UFC2). Calcular el promedio de las UFC de las dos placas.

Anotar el promedio de colonias por dilución de trabajo, informar el número de


unidades formadoras de colonia por gramo (UFC/g) del producto considerando el factor
de dilución de la muestra. Si las placas no presentan colonias informar: menos de 10
UFC por gramo de producto (UFC/g). (2)(7)(8)
Material

Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL
Espátula estéril.
Cajas petri estériles desechables de vidrio.
Balanza granataria.
Cofía
Cubrebocas
Buffer de Fosfatos pH 7.2 ± 0.1 estéril
Agar Dextrosa Sabouraud
Inactivante (depende del producto)

25
“LÍMITE MICROBIANO”

10 g o 10 mL de
muestra y 90 mL
del diluyente.

1 mL 1 mL

15 mL a 20 mL de
Agar Dextrosa
Sabouraud

Incubar las placas en posición invertida


entre 20 – 25 °C de 5 a 7 días.

Grafico 2. Recuento de hongos filamentosos y levaduras

26
“LÍMITE MICROBIANO”

Investigación de microorganismos objetables

Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo soya


tripticaseína, mezclar e incubar, si no hay crecimiento, la muestra cumple con los
requisitos, si se observa crecimiento resembrar la muestra en medios selectivos: (2)(7)(11)

Pseudomonas aeruginosa en Agar cetrimida.

Staphylococcus aureus en el medio Agar Baird-Parker o Agar Vogel Johnson.


Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 3)

Material

Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL
Espátula estéril.
Cajas petri estériles desechables de vidrio.
Balanza granataria.
Cofía
Cubrebocas
Caldo Soya Tripticaseína
Agar Cetrimida
Agar Vogel-Johnson
Agar Baird-Parker
Inactivante (depende del producto)

27
“LÍMITE MICROBIANO”

10 g o 10 mL de muestra en 90 mL
caldo soya tripticaseína.

Mezclar e incubar

Si no hay crecimiento, la muestra cumple


con los requisitos de calidad sanitarios.

Si se observa crecimiento resembrar la


muestra en medios selectivos

Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa

Agar Baird-Parker o Agar cetrimida.


Agar Vogel Johnson.

Incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C


24h. Si se observa crecimiento comparar la morfología
colonial y microscópica.

Grafico 3. Investigación de Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus

28
“LÍMITE MICROBIANO”

Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp

Pesar o medir exactamente 10 g o 10 mL de muestra y transferir a 90 mL caldo lactosa,


e incubar entre 30 – 35 ºC de 18hh a 24 h, si se presenta crecimiento resembrar 1 mL
de la dilución a los siguientes medios de enriquecimiento: (2)(7)(10)

Salmonella sp, resembrar caldo selenito-cisteína y tetrationato, mezclar e incubar


de 12 a 24 h a 30 – 35 ºC, tomar una asada de cada uno de lo medios de cultivo
anteriores y resembrar por estría cruzada en los medios: AVB, XLD, ASB, e
incubar.
Escherichia coli, apartir del medio de caldo lactosa, tomar una asada y aislar
resembrando por estría cruzada en Agar Mac Conkey, incubar

Si se observa crecimiento comparar la morfología colonial y microscópica. (Grafico 4)

Material
Pipetas graduadas de 5 mL y 10 mL
Espátula estéril.
Cajas petri estériles desechables de vidrio.
Balanza granataria.
Cofía
Cubrebocas
Caldo Soya Tripticaseína
Caldo Lactosado
Caldo Tetrationato
Caldo Selenito Cistina
Agar Verde Brillante (AVB)
Agar Sulfito Bismuto (ASB)
Agar Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD)
Agar MacConkey
Inactivante (depende del producto)

29
“LÍMITE MICROBIANO”

10 g o 10 mL de muestra en 90 mL
caldo lactosa

Mezclar e incubar

Si no hay crecimiento, la muestra cumple


con los requisitos.

Si se observa crecimiento resembrar la


muestra en medios selectivos

Salmonella sp, Escherichia coli

Caldo selenito-cisteína y caldo


tetrationato Agar Mac Conkey, incubar

Medios AVB, XLD,


ASB.

Incubar de 30 – 35 °C 24 h. Si se observa
crecimiento comparar la morfología colonial y
microscópica.

Grafico 4. Investigación de Escherichia coli y Salmonella sp

30
“LÍMITE MICROBIANO”

Análisis de Agua

Recolectar la muestra. Identificar las muestras (sitio, clave y fecha), realizar los análisis
utilizando material y medios esterilizados y bajo condiciones de esterilidad, colocar la
membrana en la base del filtro, asegurarse de cerrar bien el embudo, colocar 100 mL
para filtrar, tomar la membrana y como colocarla en una placa con el medio de cultivo,
incubar las placas en posición invertida entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas, pasado
el tiempo de incubación tomar lecturas y registrar en bitácora. (Grafico 5)

Dependiendo del tipo de agua se le realizara el respectivo análisis:

Agua potable: Cuenta de organismos mesofilos aerobios, coliformes totales y


coliformes facales
Agua purificada: Cuenta de organismos mesofilos aerobios
Agua para inyectables: Cuenta de organismos mesofilos aerobios

Material
Pipetas graduadas de 1 mL
Cajas petri estériles desechables.
Cofía
Cubrebocas
Equipo de filtración estéril
Embudos para filtración esteriles
Agar EMB
Agar Soya Tripticaseína
Membrana para filtración
Reactivo de Lal
Baño a 37 °C 1

31
“LÍMITE MICROBIANO”

Muestra de agua

Filtración por membrana

AST para OMAs EMB para coliformes totales y E. coli

. .

Incubar las placas en posición invertida


entre 30 – 35 °C durante 48 a 72 horas.

Pasado el tiempo de incubación tomar


lecturas y registrar en bitácora.

Grafico 5. Análisis de Aguas Filtración al vacío

32
“LÍMITE MICROBIANO”

ENDOTOXINA

La prueba de LAL por el método gel-clot se realizó adicionando 0,1 mL del reactivo de
LAL de sensitividad = 0,25 UE/mL con 0,1 mL de la muestra. El tubo se agitó suave
pero completamente, se incubó en un baño de agua no circulante a 37 ± 1 ºC por 60 ± 2
min. Al final de este periodo de incubación, se retiró el tubo del baño y se invirtió en un
ángulo de 180 ºC para realizar la lectura.
Positivo: coagulación
Negativo: no coagula
El resultado deberá registrarse como < 0.25

33
“LÍMITE MICROBIANO”

3.- RESULTADOS
Tabla 5. Resultado de los productos analizados de Febrero a Septiembre 2008
Tabletas
Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado
Mic Mesfílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10
A PT001
Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
B PT002 Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
C PT003
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
D PT004
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
Soluciones orales
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10
E PT005
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10
F PT006
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10
G PT007 Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10
E. coli Ausentes Dir Ausente
Polvos para suspensiones orales
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10
H PT008 Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10
E. coli Ausentes Dir Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL Dir <10
I PT009
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL Dir <10
Jarabes
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/mL 1:10 <10
J PT010
Hongos y levaduras Max 10 UFC/mL 1:10 <10
Tabletas vaginales
Mic Mesofílicos Aerobios Max 500 UFC/g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 10 UFC/ g 1:10 <10
K PT011
S. aureus Ausentes 1:10 Ausente
Pseudomonas Ausentes 1:10 Ausente

34
“LÍMITE MICROBIANO”

Tabla 6. Resultado de materia prima analizada de Febrero a Septiembre 2008

Producto Lote Análisis Especificaciones Dilución Resultado


Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente
A MP011
Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente
S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 10000 UFC/ g 1:10 <10
E. coli Ausente 1:10 Ausente
B MP012
Salmonella Ausente 1:10 Ausente
Pseudomonas Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10
C MP013
Salmonella Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
D MP014 Hongos y levaduras Max 100 UFC/ g 1:10 <10
E. coli Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
E MP015
Salmonella Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10
F MP016 E. coli Ausente 1:10 Ausente
Salmonella Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 50 UFC/ g 1:10 <10
G MP017
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 100 UFC/ g 1:10 <10
H MP018 S. aureus Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Pseudomonas Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 25000 UFC/ g 1:10 <10
I MP019
Salmonella Ausente 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos Aerobios Max 1000 UFC/ g 1:10 <10
Hongos y levaduras Max 500 UFC/ g 1:10 <10
J MP020
E. coli Ausentes/10 g 1:10 Ausente
Salmonella Ausentes/10 g 1:10 Ausente

35
“LÍMITE MICROBIANO”

Tabla 7. Resultado de las estabilidades analizadas de Febrero a Septiembre 2008

Producto Lote Condiciones Análisis Especificaciones Dilución Resultado


Mic Mesofílicos
Max 100 UFC/ g 1:10 <10
Aerobios
A PT001 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR
Hongos y
Max 10 UFC/ g 1:10 <10
levaduras
Mic Mesofílicos
Max 100 UFC/mL 1:10 <10
Aerobios
Hongos y
Max 10 UFC/mL 1:10 <10
E PT005 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR levaduras
E. coli Ausentes 1:10 Ausente
Salmonella Ausentes 1:10 Ausente
S. aureus Ausentes 1:10 Ausente
Mic Mesofílicos
Max 100 UFC/mL 1:10 <10
Aerobios
F PT006 12 m, 25 °C, 60 ٪ HR
Hongos y
Max 10 UFC/mL 1:10 <10
levaduras
Mic Mesofílicos
Max 100 UFC/mL Dir <10
Aerobios
H PT008 24 m, 30 °C, 65 ٪ HR Hongos y Max 10 UFC/mL Dir <10
levaduras
E. coli Ausentes Dir Ausente
Mic Mesofílicos
Max 100 UFC/mL Dir <10
Aerobios
I PT009 36 m, 25 °C, 60 ٪ HR
Hongos y
Max 10 UFC/mL Dir <10
levaduras

36
“LÍMITE MICROBIANO”

Tabla 8. Resultado de los tipos de agua analizadas de Febrero a Septiembre 2008

Agua potable
Resultados de Resultados de coliformes Resultados de coliformes
No.
OMA (UFC/mL) totales (UFC/100 mL) fecales (UFC/100 mL)
1 3 0 0
2 5 0 0
3 0 0 0
4 1 0 0
5 0 0 0
6 0 0 0
7 2 0 0
8 0 0 0
9 0 0 0
10 0 0 0
11 0 0 0
12 0 0 0

Agua purificada
Resultados de
No. Agua para uso inyectable
OMA (UFC/mL)
Resultados de Endotoxina
13 0 No.
OMA (UFC/mL) UE/mL
14 0
23 0 < 0.25
15 0
24 0 < 0.25
16 0
25 0 < 0.25
17 0
26 0 < 0.25
18 0
19 0
20 0
21 0
22 0

37
“LÍMITE MICROBIANO”

3.1 ANÁLISIS DE RESULTADOS

Producto terminado
En la tabla No. 4 aparece el conteo total de microorganismos presentes en cada uno de
los lotes analizados, además del análisis de microorganismos patógenos objetables los
cuales deben de cumplir con los límites establecidos

El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios, así como el de hongos y


levaduras se realiza en general para todos los productos no estériles ya que cuando el
consumidor adquiere el producto espera que éste se encuentre en perfectas
condiciones, en muchos procesos industriales las contaminaciones microbianas afectan
la producción (aire, superficies, equipos, personal, materias primas, envase y empaque)
afectando la calidad del producto; el recuento varía de acuerdo a los limites
establecidos para cada producto.

Producto A
Es un producto de administración oral sólida, las especificaciones nos indican que
además de la investigación microorganismos mesófilos aerobios, hongos y levaduras, el
cual demostró estar dentro de los límites, se realizó el estudio de estabilidad para este
mismo considerando el tiempo cero y a 12 meses, a pesar de las condiciones de
temperatura y humedad, este producto demostró ser inocuo para su consumo sin
causar ningún daño en el organismo.

Producto B
Es una forma farmacéutica sólida de administración oral, este producto se utiliza para
tratar la alta presión sanguínea así que es importante realizar la investigación de
microorganismos objetables.

E. coli : tiene que resultar ausente en el producto, ya que su presencia puede causar
una diarrea hemorrágica y a veces puede causar insuficiencia renal y hasta la muerte,
además de infecciones intestinales y extra-intestinales generalmente severas, tales

38
“LÍMITE MICROBIANO”

como infecciones del aparato excretor, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y


neumonía Gram-negativa.

Producto C
Este producto está indicado para el tratamiento de la hipertensión, por lo cual es
importante el análisis de microorganismos patógenos.

Para el caso de E. coli el resultado durante el periodo de análisis como se puede


observar en la tabla 4 se mantuvo ausente demostrando estar dentro de las
especificaciones.

Salmonella: tiene que resultar ausente en el producto; la enterocolitis por Salmonella es


uno de los tipos más comunes de intoxicación por productos farmacéuticos y ocurre
cuando se consume productos contaminados con la bacteria Salmonella. Cualquier
producto se puede contaminar durante la producción por el personal que lo manipula;
su presencia puede causar salmonelosis, diarrea y dolor abdominal.

Producto D
Es un antipsicótico atípico. Se utiliza para tratar la esquizofrenia y el trastorno bipolar,
también conocido como maníaco-depresión. Este producto se puede utilizar en
combinación con antidepresivos para tratar el trastorno depresivo mayor y por ser una
forma farmacéutica de administración oral, a este producto es necesario realizar el
análisis de E. coli y Salmonella ya que como ya se mencionó, la presencia de éstos
pueden afectar severamente al consumidor.

Producto E
Para este producto E. coli y Salmonella durante el período de análisis cumplen con los
limites de especificación, además de que el principio activo mantiene sus características
a pesar de ser sometido a ciertas condiciones de estabilidad, y como se muestra en la
tabla 6 los análisis realizados resultaron favorables para que el producto sea utilizado
bajo las condiciones establecidas.

39
“LÍMITE MICROBIANO”

Producto F
Para este producto las especificaciones marcan el análisis de microorganismos
mesofilos aerobios, hongos y levaduras, así como la prueba de estabilidad bajo las
condiciones y como se observa esta dentro de los limites establecidos

Producto G
Se administra de forma oral, y se analiza de forma directa, su indicación es en los
pacientes con hepatitis B crónica, por lo cual es de suma importancia el análisis de
microorganismos patógenos para los cuales se tiene como resultado la ausencia de E.
coli y Salmonella

Producto H e I
Estos productos son polvos para suspensiones orales se emplean para tratar
infecciones causadas por bacterias, como se muestra en la tabla 4 estos cumplen con
los limites de especificación, y en la tabla 6 los resultados nos indican que cumple con
las especificaciones de estabilidad

Producto J
Es una forma farmacéutica semisólida, la cual contiene altas concentraciones de azúcar
que ayuda a evitar la contaminación microbiológica, sin embargo es importante el
análisis del producto para tener la seguridad de que ha sido preparado bajo las
condiciones de calidad sanitaria, para el período de Febrero a Septiembre el producto
se mantuvo dentro de los limites de especificación.

Producto K

Pertenece al grupo de medicamentos llamados antifúngicos, se usa para tratar las


infecciones de la vagina por hongos, en la tabla de resultados las especificaciones no
indican el análisis de microorganismos patógenos.

Staphyloccus aureus: el crecimiento de este microorganismo en los productos es


acompañado por la producción de algunos compuestos extracelulares como
40
“LÍMITE MICROBIANO”

enterotoxinas, las cuales pueden causar intoxicaciones al consumir el producto, esta


intoxicación no es considerada como enfermedad grave, sin embargo, se han llegado a
presentar algunas muertes en ancianos y niños, por lo tanto el resultado de
Staphyloccus aureus es Ausente.

Pseudomonas: es un patógeno oportunista en humanos, infectando el tracto urinario, el


resultado es Ausente.

El conteo total de microorganismos mesófilos aerobios se mantienen dentro de los


límites establecidos para cada uno de los productos y los resultados de
microorganismos objetables durante el período de Febrero a Septiembre fueron
ausentes

Materia prima

Como se indica en la metodología para la MP es importante la investigación de


microorganismos patógenos objetables (Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas
aeruginosa y Staphylococcus aureus), debido a que la materia prima constituye una de
las principales fuentes de contaminación, ya que si ésta contiene microorganismos
pueden contaminar el producto del cual forman parte.

Como se muestra en la tabla 5 muestra los resultados de la materia prima mas utilizada
en el periodo de Febrero a Saptiembre demostrando que cumple con los límites
establecidos, proporcionando la seguridad de que ésta puede ser utilizada para la
producción de los productos farmacéuticos que así lo requieran.

Análisis de agua

El agua es la principal materia prima dentro de la industria farmacéutica por lo cual se


debe de monitorear diariamente para asegurar su calidad sanitaria, dependiendo del
tipo de agua se tiene que analizar las pruebas indicadas:

41
“LÍMITE MICROBIANO”

Agua potable: durante el periodo de Febrero a Septiembre se tiene un máximo de


organismos mesófilos aerobios de 3 UFC/mL, y lo cual nos indica que cumple con
los límites, ya que como se indica en la tabla No. 3 este tipo de agua se considera
un limite <500 UC/mL,
Agua purificada: la tabla 3 indica un límite de <100 UFC/mL para lo cual se
observa en los resultados que se encuentra dentro de los limites de
especificación.
Para inyectables: se tiene un limite de <10 UFC/mL, para la cual durante el
periodo de Febrero a Septiembre resultados indicados en la tabla No. 8 nos
indican cumple con las especificaciones; en cuanto al análisis de endotoxina se
mantiene < 0.25 UE/mL indicando que cumple con el grado inyectable para
usarse en la fabricación de los productos inyectables.

42
“LÍMITE MICROBIANO”

4. Conclusiones

De acuerdo con los resultados obtenidos en los productos analizados se percibe


que el sistema de calidad manejado en Bristol Myers Squibb es robusto por el
cumplimiento que se tiene hacia las Buenas Prácticas de Manufacturas, Buenas
Prácticas de Laboratorio y Buenas Prácticas de Documentación.
En la fabricación de los diferentes productos se debe de tener en cuenta muchos
aspectos críticos para mantener un control microbiológico y uno de ellos es la
revisión del contenido microbiano para los diferentes productos.
Se llevo acabo el control microbiológico de los productos farmacéuticos no
estériles, manejando correctamente las técnicas adecuadas descritas en las
metodologías oficiales.
Los microorganismos que contaminan a los productos farmacéuticos pueden
llegar al producto durante el proceso de producción a través de la materia prima,
el ambiente de producción, el equipo, el material primario y el personal que
trabaja directamente en el proceso.
En base a los resultados obtenidos se muestra que el contenido de carga
microbiana no sobrepasa los limites establecidos, por lo que el proceso esta
controlado.
Los estudios de estabilidad resultan una herramienta importante para garantizar
la calidad, seguridad y eficacia de los productos farmacéuticos demostrando que
el producto es apto durante un periodo de tiempo determinado.
Una fuente de contaminación interna en la industria farmacéutica es el sistema
de distribución de agua, sin embargo el análisis continuo de la misma nos
proporciona información suficiente para controlar la calidad microbiológica.

43
“LÍMITE MICROBIANO”

5.- GLOSARIO.

Microorganismos viables: Organismos microscópicos como bacterias y hongos con


capacidad de reproducción y dan lugar a la formación de colonias.
Prueba de esterilidad: Determinación de la ausencia de microorganismos viables en la
muestra.
Prueba de límite microbiano: Es el recuento de los microorganismos viables
presentes en una muestra no estéril, para determinar si se encuentra dentro de los
límites establecidos.
Prueba de promoción del crecimiento: Determina la capacidad del medio de cultivo
para permitir el crecimiento de determinados microorganismos viables.
Estabilidad. Es la capacidad de un fármaco o un medicamento de permanecer dentro
de las especificaciones de calidad establecidas, en el envase que lo contiene durante
su periodo de vida útil.
Estudios de estabilidad. Pruebas que se efectúan a un fármaco o a un medicamento
por un tiempo determinado, bajo la influencia de temperatura, humedad o luz en el
envase que lo contiene.
Estudios de estabilidad acelerada. Estudios diseñados bajo condiciones exageradas
de almacenamiento para incrementar la velocidad de degradación química, biológica o
los cambios físicos de un fármaco o de un medicamento.
Estudios de estabilidad a largo plazo. Estudios diseñados bajo condiciones de
almacenamiento controladas para evaluar las características físicas, químicas,
biológicas o microbiológicas del fármaco o del medicamento durante el periodo de
reanálisis o de caducidad, respectivamente.
Fármaco. Toda sustancia natural, sintética o biotecnológica que tenga alguna actividad
farmacológica y que se identifique por sus propiedades físicas, químicas o acciones
biológicas, que no se presente en forma farmacéutica y que reúna condiciones para ser
empleada como medicamento o ingrediente de un medicamento.
Forma Farmacéutica. Es la mezcla de uno o más fármacos con o sin aditivos, que
permita su administración.
Calidad sanitaria: Asegura productos aptos e “inocuos” para el consumo humano. La
inocuidad se aplica a productos alimenticios, cosméticos y farmacéuticos, los cuales
deben cumplir con sus funciones específicas para los cuales fueron creados, libres de
contaminación de cualquier tipo.

44
“LÍMITE MICROBIANO”

6.- Anexos
ANEXO 1

“Microorganismos patógenos”

Salmonella: es un bacilo Gram negativo que se comporta como patógeno intracelular


facultativo. Su hábitat es el aparato gastrointestinal de los animales y el hombre, nunca
como microbiota normal. Se encuentra asociada a problemas gastrointestinales,
septicémicos y aborto gracias a su capacidad de invasión celular y sobrevivencia
intrafagocítica.
Escherichia coli: es uno de los muchos grupos de bacterias que viven en los intestinos
de los humanos sanos y en la mayoría de los animales de sangre caliente. Esta
bacteria ayuda a mantener el equilibrio de la flora intestinal normal (flora bacteriana)
contra las bacterias nocivas y sintetiza o produce algunas vitaminas.
Staphylococcus aureus, un microorganismo patógeno presente en piel de animales y
personas, además de en sus fosas nasales y gargantas. Es un microorganismo muy
resistente a las condiciones ambientales y extremadamente difíciles de erradicar. Pese
a que no es esporulado (formas de resistencia elaboradas de forma natural por algunos
microorganismos), soporta bien condiciones extremas aunque se inactiva a temperatura
de congelación
Pseudomona sp: es un bacilo gram negativo, oxidasa positivo, aeróbico estricto
aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. móvil,
que pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Es relativamente ubicua y comúnmente
se la encuentra en el polvo, el agua, las plantas y verduras, medio ambiente marino y
animales.
Puede crecer bien en diferentes medios y soporta gran variedad de condiciones físicas.
Si bien su predilección son los ambientes húmedos la P. aeruginosa es primariamente
un patógeno hospitalario y causa enfermedad en forma frecuente a huéspedes
normales.

45
“LÍMITE MICROBIANO”

ANEXO 2
“Características de medios de cultivos”

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus


constituyentes en:
Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen
animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de
minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni
las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición
química definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en
trabajos de investigación.
De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:
Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de
un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se
quieren cultivar.
Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser
medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos
específicos.
Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.
Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o
proveedores que suministren productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y
fisicoquímica adecuada.
Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o
desmineralizada.
Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.
46
“LÍMITE MICROBIANO”

Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

Agar Baird Parker: Medio de alta especificidad diagnóstica, selectivo y diferencial para
el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en materiales de
importancia sanitaria.

En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne


constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas
del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro
de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo
permite demostrar la actividad lecitinásica.

Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de


color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de
la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de
colonias pero sin la zona opaca y clara.

Agar Cetrimida: Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas


aeruginosa y de otras especies del género.

La fórmula de este medio está desarrollada para favorecer la selección de P.


aeruginosa y estimular la formación de pigmentos. Es éste un medio muy semejante al
King A, en el cual el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación
de piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente
catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células
de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe también algunas especies de
Pseudomonas.

Agar Sabouraud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de


hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras.

47
“LÍMITE MICROBIANO”

Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,


particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.). En el medio de
cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH
ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio
de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos
de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de
la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el


desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce


un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Agar Sulfito de Bismuto: El medio de cultivo agar sulfito de bismuto, es un medio


selectivo recomendado para el aislamiento y diferenciación de Salmonella typhi y otras
Salmonellas a partir de diversas muestras.

La presencia de sulfito de bismuto inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y


de la mayoría de las bacterias Gram negativas. La producción de sulfuro de hidrógeno
se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro

48
“LÍMITE MICROBIANO”

grisáceo con brillo metálico por la reacción de los iones bismuto con el sulfuro de
hidrogeno

Agar Soya Tripticaseína: es un medio utilizado para promover el crecimiento de


microorganismos fastidiosos y adicionado de sangre para observa reacciones
hemolíticas.

Verde Brillante Agar: Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento


de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas,
alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el
aislamiento de Shigella spp.

Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran número de muestras de heces


o alimentos, por su alta capacidad de diferenciación de las colonias sospechosas.
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente
de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de
carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando
hay producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, el cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.

Agar Vogel Johnson: Medio utilizado para la rápida detección de estafilococos


coagulasa positivo fermentadores de manitol, a partir de alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria y clínica. En el medio de cultivo, la tripteína y el extracto de
levadura, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. El
manitol es el hidrato de carbono fermentable. El telurito, el cloruro de litio y la alta
concentración de glicina, son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de la flora
acompañante y el rojo fenol es el indicador de pH.

Los estafilococos coagulasa positivo, fermentan el manitol, produciendo la acidificación


del medio y el viraje del indicador de pH al color amarillo, y también reducen el telurito a
teluro. Debido a esto, se observan como colonias de color negro, rodeadas de una zona
amarilla.
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“LÍMITE MICROBIANO”

Lactosado Caldo: Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia


de bacterias del grupo coliforme en agua, productos lácteos, etc.
Actualmente también está indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la
búsqueda de Salmonella sp.

Es un medio rico en nutrientes,y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano.


El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrógeno, mientras que la
lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y
gas, y éste último se demuestra al usar las campanas Durham.

Se le usa también como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar células


injuriadas, diluye sustancias tóxicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella
con respecto a otras bacterias

Caldo Selenito Cistina: Medio utilizado para el enriquecimiento selectivo de


Salmonella sp. a partir de muestras de materiales de importancia sanitaria.

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo


bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe
flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella sp. La l-cistina
es el agente reductor y fue propuesta por la FDA para el aislamiento de Salmonella en
productos alimenticios incrementando la recuperación por reducción de la toxicidad del
selenito.

Caldo Digerido de Caseína-Soya-Polisorbato 20: Medio de dilución, recomendado


por USP para realizar el control higiénico de productos no obligatoriamente estériles.

Este medio de dilución, tiene la capacidad para neutralizar desinfectantes, debido a la


presencia de lecitina de soja, que neutraliza compuestos de amonio cuaternario.
El agregado de polisorbato 20 (tween 20), es útil para neutralizar compuestos tales

50
“LÍMITE MICROBIANO”

como fenol, formalina, hexaclorofeno, y la combinación de la lecitina con el Tween,


permiten neutralizar etanol.

Caldo Tetrationato: Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de


Salmonella spp. a partir de materiales de importancia sanitaria

El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos
tóxicos. La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato
(generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los
cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato
reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompañante.

Medio Levine (eosina azul de metileno): Sus componentes fundamentales son la


eosina y el azul de metileno. Se utiliza para diferenciar las enterobacterias coliformes
(lactosa +) y las no coliformes (lactosa – colonias transparentes Salmonella y Shigella)

Medio Agar XLD (agar xilosa, lisina.dexicolato): Los compuestos principales son la L-
lisina, el rojo fenol, el tiosulfato sódico, el citrato de hierro y azúcares (lactosa, glucosa y
xilosa). Sirve para aislar enterobacterias patógenas. Para hacer la lectura hay que
seguir los siguientes criterios:

La descarboxilación de la lisina: colonias rojas característico de Shigella

Fermentación de azúcares: Colonias amarillas tipos de Escherichia, Citrobacter,


Serratia, Proteus, Enterobacter y Kelbsiela.

Producción de SH2 (debido a tiosulfato sódico y citrato férrico): colonias negras


típico en Salmonella SH2 +, Arizona, Proteus y Edwardsiella.

51
“LÍMITE MICROBIANO”

ANEXO 3

“Tablas de características para la identificación de microorganismos patógenos”

Tabla 9. Características morfológicas de Staphylococcus aureus sobre medios de cultivos


selectivos-diferenciales.

Morfología microscópica y
Medio de cultivo Morfología colonial Imagen
reacción al Gram

Colonias negras
Cocos Gram positivos
Agar Vogel Johnson rodeadas de zona
agrupados en racimos.
amarilla

Colonias negras
lustrosas brillantes Cocos Gram positivos
Agar Baird Parrker
rodeadas de sonas agrupados en racimos.
claras de 2 a 5 mm

Tabla 10. Características morfológicas de Pseudomonas aeruginosa sobre medios de cultivos


selectivos-diferenciales.

Morfología microscópica y
Medio de cultivo Morfología colonial Imagen
reacción al Gram

Agar Cetrimida Colonias verdosas Bacilos Gram negativos

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“LÍMITE MICROBIANO”

Tabla 11. Características morfológicas de Salmonella sp sobre medios de cultivos


selectivos-diferenciales.

Morfología microscópica
Medio de cultivo Morfología colonial
y reacción al Gram Imagen

Colonias pequeñas
transparentes incoloras
rosas o blancas
Agar Verde Brillante Bacilos Gram negativos
opacas, frecuente
mente rodeadas de una
zona rosa o roja

Agar xilosa-lisina Colonias rojas con o sin


Bacilos Gram negativos
desoxicolato centro roja

Agar sulfito de Colonias negras o


Bacilos Gram negativos
bismuto verdes

Tabla 12. Características morfológicas de Escherichia coli sobre medios de cultivos


selectivos-diferenciales.

Morfología microscópica
Medio de cultivo Morfología colonial
y reacción al Gram Imagen

Colonias grandes rosas a


Agar Mac Conkey rojas rodeadas de una Bacilos Gram negativos
zona de precipitado

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“LÍMITE MICROBIANO”

ANEXO 4
“Microorganismos en el Análisis de Agua”

Tabla 13. Características medios de cultivos para el análisis de agua.

Tipo de Agua Método Medio de cultivo Imagen

Vaciado en placa Agar Soya Tripticaseina

Agua potable

Filtración por
Agar EMB
membrana

Filtración por
Agua purificada Agar Soya Tripticaseina
membrana

Agua para Filtración por


Agar Soya Tripticaseina
inyectables membrana

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“LÍMITE MICROBIANO”

7.- RECOMENDACIONES PARA ESTANCIAS FUTURAS

Para los alumnos que desean conocer o laborar en la Industria, es importante la


realización de la estancia ya que esta le reportara grandes beneficios

Es importante que consideres la estancia industrial como una manera de seguir


aprendiendo, aplicando conocimientos y habilidades.

El mantener un comportamiento adecuado y con el mayor desempeño posible


dentro de la empresa puede beneficiarte en un futuro, ya que puede abrirte
oportunidades de trabajo.

A medida que el alumno adquiere conocimientos es necesario que los practique,


bajo la supervisión de los profesionales del área de trabajo.

Debe ser capaz de tomar decisiones apropiadas en el momento preciso, creer en


el mismo y en sus conocimientos, a demás de buscar la superación personal y
profesional a prendiendo y aportando conocimientos.

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“LÍMITE MICROBIANO”

8. REFERENCIAS:

6. Farmacopea de los Estados Unidos de América; Formulario Nacional; Vol. 1;


Edición anual en español (USP)
7. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; octava edición; Vol. I 2004;
México (FEUM)
8. http://www.bristol.com.mx
9. NOM-059-SSA1-1993 Buenas practicas de fabricación
10. NOM-073-SSA1-2005 Estabilidad de Fármacos y Medicamentos
11. NOM-092-SSA1-1994 Método para la Cuenta de Bacterias Aerobias en Placa.
12. NOM-110-SSA1-1994 Preparación y dilución de muestras de alimentos para su
análisis microbiológico.
13. NOM-111-ssa1-1994, Bienes y Servicios. Método para la cuenta de mohos y
levaduras en alimentos.
14. NOM-113-SSA1-1994, Bienes y Servicios. Método para la cuenta de
microorganismos coliformes totales en placa.
15. Nom-114-SSA1-1994, Bienes y Servicios. “Método para la determinación de
Salmonella en alimentos”.
16. NOM-115-Ssa1-1994, Bienes y Servicios. Método para la determinación de
Staphylococcus aureus en alimentos.
17. NOM-127-SSA1-1994, "Salud Ambiental, Agua para uso y consumo Humano-
Limites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para
su potabilización".
18. NOM-180-ssa1-1998, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano.
Equipos de tratamiento de tipo doméstico. Requisitos sanitarios.
19. Jean F. Mac Faddin Pruebas Bioquímicas para Identificación de Bacterias de
Importancia Clínica, , 3ª edición, Editorial Medica Panamericana

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