1-Introduccion

Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos

nutrientes básicos y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas
necesidades varían según el tipo de microorganismo y es necesario conocerlas
para cultivarlos en el laboratorio.

Las necesidades nutricionales básicas pueden suministrarse en el laboratorio,

mediante el uso de medios de cultivo artificiales, los cuales se encuentran
disponibles en una gran variedad y los cuales en general aportan a los
microorganismos:
-Una fuente de carbono:El carbono es un componente esencial y central para
conformar la estructura celular y permitir a la célula realizar todas sus
funciones. Según la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en
dos grupo: Autótrofos y heterótrofos. Los organismos autótrofos pueden
cultivarse en medios que contengan únicamente compuestos inorgánicos
(utilizan principalmente dióxido de carbono como carbono inorgánico). Los
organismos heterótrofos en su lugar necesitan un suministro de carbono
orgánico (por ejemplo glucosa u otro carbohidrato).
-Una fuente de Nitrógeno:Elemento esencial para que la célula construya
macromoléculas como: proteínas y ácidos nucléicos. Algunos microorganismos
usan nitrógeno atmosférico, otros emplean sales de nitrato o de amonio como
compuestos inorgánicos, así como, otros requieren compuestos orgánicos que
contengan nitrógeno como los aminoácidos.
-Elementos no metálicos:Iones no metálicos como el azufre y el fósforo. El
azufre puede encontrarse en proteínas, sulfatos o como azufre elemental;
mientras el que el fósforo puede encontrarse formando sales.
-Elementos metálicos (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe+2 y Fe+3):Llamados
también micronutrientes, oligoelementos o elementos traza. Encontrados en
sales inorgánicas adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas
concentraciones por los microorganismos.
-Vitaminas:Los microorganismos puede tomarlas del medio ya elaboradas o
iniciar procesos de síntesis de las mismas. Algunos microorganismos poseen
una variedad de vías para sintetizar vitaminas; mientras otros, sintetizan un
número muy limitado de ellas a partir de componentes del medio. Otros las
requieren como suministro.
-Agua.
-Energía:Existen dos tipos bioenergéticos de microorganismos, los fotótrofos y
los quimiótrofos. Los fotótrofos emplean la energía radiante (luz solar), como
única fuente de energía; y los quimiótrofos que, obtienen la energía por
oxidación de compuestos químicos orgánicos o inorgánicos.
Las necesidades físicas involucran factores, como: Temperatura, pH y gases,
los cuales se encuentran en un rango óptimo específico para cada
microorganismo; por lo tanto, su variación puede acelerar o disminuir el
crecimiento.
2-Objetivos
-Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos, aplicando los conceptos básicos de nutrición y preparación
de los mismos.
-Aprender a elaborar los medios de cultivo más comunes usados en el
aislamiento de hongos fitopatógenos.

3-Revision bibliográfica

3.1.Medio de cultivo: Son mezclas de sustancias que se usan para el

aislamiento y desarrollo de hongos, bacterias y otros microorganismos.

Propiedades de los medios de cultivo:

-Humedad. Indispensable para el crecimiento de microorganismos, su carencia

(desecación) puede llevar a la muerte del microorganismo.
-Fertilidad. Se refieren a los elementos o compuestos básicos que permiten el
crecimiento bacteriano.
-pH. Se refiere a los pH óptimos para el desarrollo bacteriano, indispensable
para su aislamiento; variaciones ácidas o alcalinas, pueden inhibir su
crecimiento.
-Transparencia. Permite la observación bacteriológica, evidenciar morfológica
y físicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado.

3.2-Por su composición
-Naturales:Utilizados para cultivar microrganismos tal y como se encuentran
en la naturaleza.Se usan como base a la experiencia y no a su composición
ej.Sangre diluida,leche,etc.
-Sinteticos:De composición exactamente conocida.Los mas conocidos son los
medios deshidratados comerciales ej.Agar,etc.
Puedes ser solidos,semilíquidos y liquidos.
-Vivos:Contienen células u organismos vivos ej.Hoja,Fruto.
3.3-Clases de medio de cultivo.

A)Medios simples:

-Agar Nutritivo: Contiene extracto de carne, peptona y agar-agar.

-Caldo Nutritivo: Contiene extracto acuoso de carne adicionado

de peptona al 1% y Cloruro de Sodio al 0.5% (Ej.: Caldo BHI (Brain
Heart Infusion/Infusión Cerebro Corazón), Caldo TSB (Caldo de
Soya Tripticasa), y Caldo Nutritivo).
-Agar Base Sangre: Medio sólido que contiene peptona, enriquecido con
sangre desfibrinada de conejo al 7%; usado para el desarrollo de todo tipo de
bacterias y especialmente para observar la actividad hemolítica.

B)Medios enriquecidos:

-Agar Sangre: Al medio Agar Sangre se le adiciona sangre de conejo

desfibrinada al 7% estéril, cuando este tiene una temperatura de 45ºC y luego
de su esterilización (la fuente de sangre debe ser estéril).

-Agar Chocolate: Consiste en un agar sangre que antes de su solidificación se

lleva a 100º C/1min., (llevar a ebullición); así, se rompen los glóbulos rojos y el
medio toma un color café. Se usa para el aislamiento de Haemophilus spp., y
Neisseria spp.

-Medio de Tioglicolato: Permite el aislamiento de aerobios tolerantes y

anaerobios. Debe conservarse en la oscuridad y en tubos tapa rosca de
manera que, la anaerobiosis se mantenga en el fondo y la aerobiosis en la
superficie del medio.

C)Medios selectivos y diferenciales:

-P10 VP: Sirve para aislar Phytophthora spp.

-Komada:Medio seletivo para especies de Fusarium.Se puede diferenciar las
especies de hongos por el color de sus colonias en este medio de cultivo.
-Papa dextrosa agar:Este medio es adecuado para la mayoría de los hongos.
-Agar-caldo de guisantes sacarosado:Medio adecuado para Pythium y
Phytophthora.
-Agar harina de avena:Este es un medio adecuado para Pythium
sp.,Phytophthora sp,Fusarium sp.,Phoma sp.
-Agar agua:Es un medio muy pobre pero muy útil para estudiar fructificaciones
fúngicas debido al escaso crecimiento miceliar.Se utiliza también para estudiar
Rhizoctonia solani.

(Papa dextrosa agar)

4-Preparacion del medio de cultivo:
Es un proceso clave en el trabajo de rutina e investigación microbiológica. Para
obtener un producto final bien terminado (medio de cultivo), deberá contarse
con la habilidad, destreza, conocimientos básicos en fisicoquímica y
microbiología. En términos generales, un medio de cultivo puede ser preparado
correctamente siguiendo las indicaciones relacionadas a continuación:

1-Disolución del medio de cultivo deshidratado:Se debe emplear agua

limpia, recién destilada o desmineralizada y con pH lo más cercano posible al
neutro. Los recipientes a usar deben ser lo suficientemente grandes para que el
medio sea agitado con facilidad. Inicialmente se añade la mitad de agua y se
agita suficientemente para conseguir una suspensión homogénea; después, se
incorpora la cantidad de agua restante. Todo tipo de medio de cultivo es
sensible al calentamiento, pero no debe calentarse más de lo estrictamente
necesario. Leer siempre la etiqueta del envase, en caso de que no deba ser
sometido a ulterior esterilización en autoclave, es imprescindible prestar
atención en su disolución completa, esto se confirma cuando al agitar no se
adhiere a la pared interna del recipiente ninguna partícula de agar o de medio y
la solución fluye libremente. Si la preparación es de más de 2 litros, se
recomienda desleír el medio de cultivo en una décima parte de la cantidad total
de agua y dejarla remojar durante 15 min.; simultáneamente, calentar a
ebullición el agua restante y agregar ésta agua con constante agitación al
medio remojado. Calentar hasta su completa disolución.

2-Esterilización:Antes de su esterilización y después de su completa

disolución se debe repartir el medio en los recipientes definitivos o en los que
se lleve a cabo el trabajo de investigación, excepto si corresponde a cajas de
Petri. La esterilización, si así lo indica la etiqueta, se lleva a cabo en autoclave
a 121ºC/15 libras de presión/15min. Tras la esterilización y después de haber
alcanzado el equilibrio de presiones (válvula abierta), y para evitar la
sobrecarga térmica del medio de cultivo, este debe sacarse enseguida del
autoclave y enfriar los recipientes rápidamente a temperatura de vertido entre
45 y 50º C, así se evitará alterar el medio de cultivo.

3-Vertido en placa:Previamente, remover el medio de cultivo oscilando el

recipiente en sentido circular para entremezclarlo de manera uniforme; verter el
medio a las cajas Petri a la temperatura de vertido, evitando la formación de
humedad en la tapa de la caja. Las burbujas de aire en la superficie de la
placa se eliminan abanicando brevemente con la llama no luminosa de un
mechero de Bunsen. Recuerde que el proceso de servido de las cajas debe
realizarse en un cuarto estéril o en cámara de flujo laminar.

4-Tubos de agar inclinado (bisel o pico de flauta), y sin inclinación:Los

tubos llenos de medio de cultivo esterilizado, todavía líquido, se colocan en una
posición inclinada de tal forma que se forme una placa de aproximadamente
3cm y una superficie inclinada de iguales dimensiones (Agar inclinado, pico de
flauta o bisel). En los casos en los cuales se requiere el medio sin inclinar,
estos deben dejarse solidificar en posición vertical sobre una gradilla.
5-Conclusiones
Se puede elaborar medios de cultivo de manera sencilla, siendo muy útil para
el estudio de microorganismos debido a que en este tipo de medio se los puede
reproducir con facilidad. Elaborar medios de cultivo resulta eficiente para la
reproducción y el posterior aislamiento de alguna cepa de microorganismo que
nos interese estudiar.
6-Bibliografia
1-Aquiahuatl Ramos, M. A., y Pérez Chabela, M. L. 2004. Manual de prácticas
del Laboratorio de Microbiología General. Universidad Autónoma Metropolitana,
Unidad Iztapalapa. México. Departamento de Biotecnología. 116 p.

2-Baker, F. J., y Breach, M. R. 1990. Manual de técnicas de Microbiología

Médica. Editorial Acribia. Zaragoza, España. 676 p.

3-Brock y Madigan. Microbiología. Editorial. Prentice Hall Hispanoamérica S.A..

6ªedición. México 1993.

4-Castaño-Zapata, J. y Del Río Mendoza, L. 1997. Manual para el diagnóstico

de hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos. Zamorano- Universidad
de Caldas. 210 p.

5-MADIGAN M. T. MARTINO J.M.; Parker J. Brock Biología de los

Microorganismos, Editorial. Prentice Hall Hispanoamericana S.A. 8ª edición.
Madrid. 1998.

Paginas de internet consultadas:

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-demicrobiologia/indice/preparacion-
de-medios-de-cultivo-
http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf