Benítez-Campo, N. y Bolaños, A.C. 2018. Guía de laboratorio de Microbiología. Dpto. de Biología.

Universidad del Valle. Cali, Colombia.

PRÁCTICA No. 4. PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

1. INTRODUCCIÓN

En múltiples enfermedades infecciosas se requiere aislar el agente causal, probar su sensibilidad

frente a varios antibióticos, interpretar correctamente los resultados para posteriormente, emplear el
más adecuado.
Las técnicas para la determinación de la susceptibilidad son: Dilución y Difusión
Técnica de dilución. Se basa en la realización de una serie de diluciones del antibiótico frente a una
concentración determinada del microorganismo. Esta técnica determina la concentración del
antimicrobiano requerida para inhibir el crecimiento bacteriano (concentración mínima inhibitoria,
CMI) y se expresa usualmente en microgramos por mililitro (μg/mL). Esta técnica puede realizarse
en agar o en caldo (en tubo o en microplacas).
Técnica de difusión en agar (Método de Kirby Bauer). Se basa en la utilización de discos
impregnados con una concentración de antimicrobiano determinada que se coloca sobre la superficie
del agar que presenta una siembra del microorganismo en estudio, con una concentración bacteriana
conocida (1 x 108 UFC/mL). Como medio de cultivo se utiliza el Agar Mueller-Hinton y
ocasionalmente agar sangre.
La preparación se incuba por un periodo determinado durante el cual el antibiótico se difunde dentro
del agar. El diámetro de cada zona debe ser medido e interpretado de acuerdo a estándares
internacionales previamente establecidos. En una sola caja de Petri se pueden estudiar varios
antibióticos simultáneamente. La preparación del inoculo debe tener la turbidez similar al tubo 0.5
de la escala de Mac Farland. Los halos de inhibición se miden con una regla y se reportan en mm.
Prueba de Epsilon o E-test. Se basa en la utilización de una tirilla de plástico que conlleva un
gradiente de concentraciones del antimicrobiano. Una vez colocada la tira sobre el agar el
antimicrobiano comienza a difundir y produce resultados tanto cualitativos como cuantitativos de la
susceptibilidad del microorganismo frente al agente probado. Es decir permite cuantificar la CMI.

2. OBJETIVOS

 Conocer las técnicas implementadas para la realización del antibiograma.

 Aprender a interpretar los resultados obtenidos en un antibiograma.

3. MATERIALES

 Diluciones seriadas de una suspensión bacteriana

 2 Cajas de Medio Mueller Hinton
 Asas bacteriológicas
 Cultivo de microorganismos Gram positivos en cajas de agar sangre
 Cultivo de microorganismos Gram negativos en cajas de agar sangre
 Reglas para medición de los halos
 Hisopos o escobillones estériles
 Tubos de vidrio estériles (pueden ser de la medida de los tapa roja) con solución salina estéril.
 Dos discos de antibióticos por cada microorganismo
 Escala de Mc Farland 0,5
 Antibiograma demostrativo en Mueller Hinton con discos de sensibilidad
 Pinza estéril tipo depilador para tomar los discos

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4. MÉTODOS

 Tomar dos a tres colonias de cada uno de los cultivos bacterianos Gram positivos y Gram
negativos.
 Inocularlos en los tubos estériles que contienen solución salina estéril
 Introducir e impregnar el hisopo estéril con la preparación anaterior.
 Escurrir el hisopo en las paredes del tubo al momento de sacarlo de allí
 Con el hisopo sembrar por el método de agotamiento en la superficie del medio de cultivo
Mueller Hinton.
 Colocar con una pinza, uno a uno los discos de sensibilidad, a una distancia de 40 mm,
entre cada uno de ellos.
 Incubar a 37° C por 24 horas

5. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Después del período de incubación mida el tamaño de los halos de inhibición, que corresponden a la
zona traslucida que se observa alrededor de los discos de antibióticos, según se observa en la Fig. 5.

Figura 5. Esquema representativo de una caja de Petri con los discos de antibiótico y
el halo de inhibición

Se describe a los antimicrobianos como SENSIBLE, INTERMEDIO O RESISTENTE, dependiendo

de los estándares internacionales descritos para cada antimicrobiano sobre cada bacteria.

ACTIVIDAD DE LA PRÁCTICA

DESARROLLAR LAS SIGUIENTES ACTIVIDADES DURANTE A LA PRÁCTICA

1. Grafique la técnica que se llevó a cabo en el laboratorio

2. Interprete los resultados de la actividad demostrativa:

Tipo de microorganismo:
Discos utilizados:
Interpretación:
Método:

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PRÁCTICA No. 5. METABOLISMO MICROBIANO: PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PARA ENTEROBACTERIAS

1. INTRODUCCIÓN

El metabolismo microbiano se define como el conjunto de reacciones químicas que desarrolla una
célula para su funcionamiento. Las reacciones metabólicas pueden ser de dos tipos: catabólicas
cuando descomponen un sustrato y anabólicas cuando forman algunos compuestos a partir de
elementos más simples. Estas reacciones se realizan gracias a la presencia de enzimas que pueden ser
intracelulares o extracelulares.

El número y la clase de enzimas bacterianas son diferentes, debido a que cada enzima está bajo un
control genético, por lo cual se dan variaciones en la utilización de los sustratos. Estas variaciones se
utilizan a su vez para ayudar a caracterizar diferentes géneros y especies bacterianas.

En esta práctica se trabajará con bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Esta familia está
compuesta por bacilos Gram negativos y Gram positivos, de tamaño mediano, anaerobios
facultativos, móviles o inmóviles y no esporulados. Este grupo de bacterias crece bien en medios
artificiales, tienen necesidades nutritivas simples, fermentan la glucosa con producción de ácido y/o
gas, reducen los nitratos a nitritos y son oxidasa-variables.

Las Enterobacterias son organismos ubicuos de distribución mundial, se encuentran en el suelo, el

agua, la vegetación y forman parte de la flora bacteriana normal de casi todos los animales incluido
el ser humano. Algunos miembros de esta familia se encuentran asociados a cuadros disentéricos,
mientras que otros pueden producir infecciones oportunistas, las cuales pueden afectar a casi todas
las partes del cuerpo.

2. OBJETIVOS

 Diferenciar la actividad bioquímica de las bacterias mediante la utilización de diferentes

medios de cultivo
 Analizar las pruebas bioquímicas utilizadas y con base en los resultados, realizar la
caracterización de las bacterias

3. MATERIALES

Cepas de Enterobacterias en agar MacConkey

Medios de cultivo para pruebas bioquímicas.
Asa de punta y de argolla
Mechero

4. MÉTODOS

 El laboratorio suministrará a cada grupo de estudiantes, cultivos con las cepas de

Enterobacterias, sembradas en agar MacConkey. Observe la morfología, tamaño, aspecto y
color de las colonias. El color rojo o rosado indica fermentación de la lactosa.

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