3° Laboratorio de Microbiologia II

Universidad Nacional Federico Villarreal
Laboratorio de Microbiología II – Recuento de Coliformes: Método del Número Más Probable
Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos,

inmóviles o móviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas
las especies forman ácido o ácido y gas a partir de glucosa. Su composición antigénica
es un mosaico que interrelaciona serológicamente varios géneros y aun familias, muchas
de estas bacterias son parásitos de animales y otros patógenos.
Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parámetro físico químico y

biológico. Los parámetros bacteriológicos tienen mayor importancia para dictámenes
higiénicos; es preciso hallar el número de gérmenes saprófilos o de coli y de bacterias
procedentes del intestino humano como indicadores de la contaminación.
Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes,

pertenecientes a las enterobacterias que fermentan lactosa con producción de gas y
ácido. Para determinar el número de estas bacterias se suele emplear medio selectivo de
endo.
Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

I.- OBJETIVOS
 Aprender a utilizar el Método NMP en el recuento de organismos coliformes.
 Conocer las técnicas de recuento en caldo como en agar de los organismos

coliformes.
 Determinar el número de bacterias coliformes fecales en agua y productos para

establecer si son aptos o no para consumo humano.
|
II.- GENERALIDADES:
Bacteria Coliforme:
Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente.

Estos M.O. con frecuencia difieren entre si en características pequeñas. Las bacterias
coliforme suelen encontrarse en el aparato intestinal del hombre y animal. E. Coli, rara
vez se encuentra fuera del intestino
Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la
lactosa y forman ácido y gas.
Son anaeróbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre

30 y 37 ºC, crecen a gran abundancias en medios corrientes, como caldo y agar.

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm

de diámetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde
metálico cuando se observan con luz refleja.
Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen
emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotécnica IMViC (Indol, Rojo
Metilo (R.M.), Borges – Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.
La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa

que el M.O. produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.
Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.
Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O

desde el punto de vista sanitario aunque muchos autores han tratado de diferenciar el
tipo fecal (e.coli) y el no fecal (A: aurogenes)
Análisis sanitario del H2O; El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de

H2O se basa en la capacidad de dicho M.O. para producir gas a partir de la lactosa.
RECUENTO DE COLIFORMES: METODO MÁS PROBALE
Éste método se basa en la presunción de que las bacterias se hallan normalmente

distribuidas en un medio líquido, es decir, que las muestras repetidas del mismo tamaño
de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo número de gérmenes como
promedio; naturalmente, algunas de las muestras pueden contener algunos gérmenes
más o menos.
La cifra media es el número más probable (Most Probable Number o MPN). S i el

número de gérmenes es grande, la diferencia entre las muestras serán pequeñas; todos
los resultados individuales estarán próximos a la media.
Si un líquido contiene 100 gérmenes por 100 ml, cada muestra de 10 mi debe
contener 10 gérmenes como promedio. Algunas contendrán más, tal vez una o dos
muestras puedan contener hasta 20 gérmenes; otras contendrán menos, pero es poco
probable encontrar muestras que no tengan gérmenes.

Ésta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos coliformes,

puede utilizarse case para toda clase de gérmenes en muestras líquidas si puede
observarse fácilmente el crecimiento, por ejemplo, si hay turbidez o producción de ácido.
III.- TECNICA (ICMSF 2000)

3.1 Material y aparatos
 Estufa de Incubación,
 35 - 37°C. Pipetas bacteriológicas de 1ml.
 Asa de inoculación
 Caldo lactosa bilis (2%) verde brillante, 10 mi en tubos de 150*15 mm,
conteniendo tubos de fermentación de Durham invertidos.
 Agua peptonada 0.1 %
 Caldo lactosa.
CALDO LACTOSA AGUA DE

PEPTONA AL O, 1%
TUBOS DURHAM INVERTIDOS ASA DE INOCULACION

3.2.- Procedimiento
 Preparación y dilución de los homogeneizados de alimentos (muestra a analizar).

 Pipetear 1 ml de cada una de las diluciones de la muestra en tubos de caldo lauril
sulfato triptosa o caldo lactosa, utilizando tres tubos por cada dilución.
 Incubar los tubos a 35 - 37 °C durante 24 y 48 horas.
 Pasadas las 24 primeras doras, anotar los tubos que muestren producción de gas.
Volver a la estufa los tubos negativos para su incubación durante 24 horas más.
 Pasadas las 48 horas, anotar los tubos que muestres producción de gas.
 Elegir la dilución más alta en la que sean positivos de formación de gas los tres
tubos y las dos diluciones superiores más próximas. Por ejemplo, si la dilución
más alta en la que aparecen los tres tubos positivos es la 1:100 y en la 1:1000 hay
un tubo positivo y en la 1:10 000 ninguno, el resultado se anotaría del siguiente
modo:
 Dilución 1:100=3, dilución 1:1000= 1 y dilución 1: 10000= 0.
Estos resultados corresponden en la tabla del NMP para series de tres tubos a un
NMP de 400.
 Confirmar que los tubos de caldo lauril sulfato triptosa o caldo lactosa
seleccionados en el paso anterior son positivos de organismos coliformes,
transfiriendo un asa de cada tubo a otro de caldo lactosa bilis (2%) verde brillante
o sembrando por estría en placas de agar eosina azul de metileno o de agar de
Endo. Incubar los tubos de confirmación 24 - 48 horas a 35-37°C y observar la
producción de gas. La formación de gas confirma la presencia de coliformes. La
formación en el agar eosina azul de metileno de colonias negras o con el centro
negro, o bien de colonias mucoides de color rosa-naranja confirma la presencia de
organismos coliformes. Mientras que en agar Endo las colonias de coliformes son
rojas y están rodeadas también de halos rojos.
 Anotar el número de tubos confirmados como positivos de organismos coliformes
en cada dilución.

IV. PROCEDIMIENTO PARA EL RECUENTO DE COLIFORMES

 Para obtener el NMP, proceder de la forma siguiente:
 Ver en cada una de las tres diluciones seleccionadas el número de tubos en los
que se confirmó la presencia de coliformes. Buscar en la tabla del NMP y anotar el
NMP que corresponda al número de tubos positivos de cada dilución.
 Así, si en el primer ejemplo todos los tubos positivos en las tres diluciones
seleccionadas resultasen confirmados de presencia de coliformes, los valores de
cada dilución serían 3, 1 y O, respectivamente.
 Para calcular el NMP de organismos coliformes por gramo de muestra, se

multiplica el valor que figura en la tabla por 10 (en el ejemplo anterior 40 * 10 =
400 gramo
V.- RESULTADOS Y DISCUSION

10-1 10-2 10-3 NMP /100ml

Tubos positivos a 37°C “10 presuntos colis“
Tubos positivos a 44°C “3 E. coli”
Número Más Probable de Coliformes (NMP)
En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente amarillo, le

agregamos 1 ml de la muestra agregada en los envase de 0,1 peptona y rotulada 10 -1;
10-2; 10-3.
Cada tubo tiene un tubo Durham invertido en su interior, si en el interior de este

tubo, después de 24 horas no hay formación de gas la prueba es negativa, pero si hubo
crecimiento de presunto coliforme, y efectivamente este fue el resultado obtenido,
presencia de gas en el interior del tubo Durham.
En la dilución 10-1 hubo presencia de gases en 2 tubos.
En la dilución 10-2 hubo presencia de gases en 1 tubo.
En la dilución 10-3 no hubo presencia de gases en ningún tubo.
Por lo que se llega a la conclusión de que en menor concentración de dilución es

menor la cantidad de microorganismos presentes en la muestra analizada
Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice, se considera tubo positivo en

la prueba presuntiva aquellas que presenten cualquier cantidad de gas en el tubo Durham
y / o Turbiedad después de 24 a 48 horas de incubación, cosa que también se observo
en nuestro os tubos a la hora de realizar la lectura.
Cabe destacar que la estimación del N.M.P., se basa en la presunción de que las
bacterias se hallan naturalmente distribuida en un medio líquido.
VI.- CONCLUSION
Estimación del Número más Probable (NMP):

 Se basan estos métodos en la presunción de que las bacterias se hallan

normalmente distribuidas en un medio líquido, esto es, en las muestras repetidas
del mismo tamaño de un mismo producto, debe esperarse contengan el mismo
número de gérmenes como promedio; naturalmente, algunas de las muestras
pueden contener algunos gérmenes mas o menos. La cifra media es el número
más probable (Most Probable Number o MPN).
 Esta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos

coliformes, empleando caldo de MacConkey, pero puede utilizarse casi para toda
clase de gérmenes en muestras líquidas si puede observarse fácilmente el
crecimiento, por ejemplo, si hay turbidez y producción de ácido. Ejemplos de ellos
son las levaduras y hongos en jugos y bebidas de frutas, clostridios en emulsiones
de alimentos, cadenas de esporos en suspensiones de harina.
 Esta prueba que se realizo en el 3° Laboratorio de Microbiología II es

presuntiva y para que sea confirmativa ;de esta misma practica se analizara con el
caldo lactosa bilis (2%)verde brilla brillante.
VII.- CUESTIONARIO
GRUPO I:
1. Definir: gérmenes, colonias típicas, homogeneizado, dilución

Germen, término genérico que se utiliza para designar de forma imprecisa cualquier
agente patógeno muy pequeño. El término se aplica a organismos productores de
enfermedades, como las bacterias, los protozoos y los hongos, y a agentes patógenos de
clasificación incierta, como las rickettsias y los virus.
El término germen comenzó a ser muy utilizado después del desarrollo, en el siglo
XIX, de la teoría del germen de la enfermedad. Desde entonces, los científicos
empezaron a emplear el nombre técnico específico de cada microorganismo.
2. ¿Para qué sirve y qué es el Agar Eosina Azul de metileno?
Es un Medio ligeramente selectivo para el aislamiento y diferenciación de

enterobacterias.

Es un medio diferencial que permite distinguir a simple vista dos o más tipos de
bacterias en función de su distinto comportamiento respecto de algún nutriente del medio.
Ese comportamiento diferencial se traduce normalmente en un viraje de color de una
sustancia indicadora presente en el medio.
En el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metabólicos de bacterias

producen cambios de color y precipitación de sales cuando producen ácidos por
fermentación de ciertas fuentes de carbono.
Forma de actuación
El contenido en lactosa y sacarosa hacen posible la distinción de Salmonelles y de
Shigellas lactosa-negativas y sacarosa-negativas, frente a la flora acompañante
lactosanegativa pero sacarosa-positiva (por ejemplo, Pr. vulgaris, Citrobacter, Aeromonos
hydrophila). Los gérmenes de acompañamiento indeseables, bacterias grampositivas
especialmente, resultan ampliamente inhibidos en su crecimiento, gracias a los
colorantes presentes en la formulación.
Composición (g/litro)
Peptona 10,0;
Hidrogenofosfato dipotásico 2,0;
Lactosa 5,0;
Sacarosa 5,0;
Eosina amarillenta 0,4;
Azul de metileno 0,07;
Agar-agar 13,5.
Preparación y conservación
Art. Num. 1.01347. Agar EMB (Agar Eosina-Azul de metileno-lactosa-sacarosa
(500 g) Utilizable hasta la fecha de caducidad cuando se almacena en lugar seco y
perfectamente cerrado entre +15 y +25º C. Proteger de la luz. Una vez abierto, el
contenido del frasco puede utilizarse hasta la fecha de caducidad siempre que se
almacene en lugar seco y perfectamente cerrado entre +15 y +25ºC.
Disolver 36 g/litro, esterilizar en autoclave (15 min. a 121 °C) y verter en placas.
pH: 7,1 ± 0,2 a 25 ºC.
Las placas son claras y de color rojizo pardo a violeta pardo

Agar EMB (Agar-Eosina-Azul de metileno-lactosa-sacarosa)

3. ¿Qué otros métodos de Recuento de microorganismos existen y como se
desarrollan cada uno de ellos?
Recuento de microorganismos viables totales. (Muestras líquidas u homogeneizadas).
Se trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el alimento.

Este número no guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo que no
puede usarse como índice de su presencia y sólo debe considerarse un indicador de las
características higiénicas generales del alimento.
Dependiendo de las características del medio utilizado (medio rico, medio limitado
en nutrientes para medida de la flora no láctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubación (mesófilos, psicrófilos) los microorganismos analizados serán
miembros de poblaciones diferentes. En general se investiga la presencia de
microorganismos aerobios o aerotolerantes (anaerobios facultativos); aunque, en ciertas
situaciones (alimentos envasados al vacío), puede ser de interés hacer recuentos de
anaerobios totales.
Se han desarrollado técnicas que hacen posible la automatización del proceso.
- Hay cuatro técnicas biológicas básicas técnicas de recuento de viables:
1.- Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).
2.- Determinación del número más probable.
3.- Métodos basados en la reducción de colorantes por viables.
4.- Contaje microscópico directo.
1.- Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del
alimento que se analiza. El resultado es función de una serie de factores como son el
método de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las características
del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie,
aunque hay que considerar que los cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa.

Cada bacteria viable formará una colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa
normal o por medio de un plaqueador en espiral que va depositando concentraciones
progresivamente más diluídas de la muestra.
2.- Filtros de membrana: utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son filtros
con un poro de 0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca
el filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado. La muestra puede haber sido
procesada para epifluorescencia previamente, lo que facilita el recuento (la
epifluorescencia se puede provocar con naranja de acridina que tiñe específicamente los
ácidos nucleicos).
3.- Microcolonias en DEFT: DEFT son las iniciales en ingñlés de Direct Epifluorescence
Filter Technique (técnica deepifluorescencia directa en filtro). En esta técnica las
bacterias se filtran para retenerlas en una membrana apropiada que posteriormente se
trata con un agente fluorescente (como la naranja de acridina) para teñir las células
bacterianas (se somete el filtrado a un tratamiento previo con detergentes para destruir
las células somáticas). La detección de los microorganismos ha de hacerse mediante
microscopía de fluorescencia o por cualquier otro método de medida de la
epifluorescencia. En ciertos casos, las membranas se incuban para producir colonias que
son más fácilmente dtectables.
4. Contaje de microcolonias al microscopio: Se añade un pequeño volumen de agar-

cultivo a un porta y se incuba para seguir la formación de microcolonias al microscopio.
5.- Gotitas de agar: Se hacen diluciones de la muestra (solución madre) y se depositan

gotitas de 10 ml en una placa Petri (gotitas de cultivo + agar). Se examina el crecimiento
de las colonias en las gotitas tras la incubación.
6.- Films secos (Petrifilm): Son películas deshidratadas de medios de cultivos generales
o selectivos en las que se deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el medio. Tras la
incubación se hace el recuento.
7.- Método del número más probable: Basado en series de diluciones y cálculo
estadístico del número de bacterias presentes en las diluciones más altas. Se puede
hacer con 3 ó 5 tubos. El método es popular aunque poco exacto.

8.- Métodos basados en la reducción de colorantes: Usando azul de metileno o

resazurina. Colorantes reducidos por las bacterias; al reducirse cambian de color y esto
es medible. Usado en medios líquidos (lácteos).
9.- Tubos rodantes: son tubos herméticamente cerrados en los que haciéndolos girar se
forma una fina capa de agua. Útiles para recuento de anaerobios.
10.- Contaje microscópico directo: Usando cámaras de cuenta, se coloca un volumen

determinado y se recuentan las bacterias.
Además de las técnicas de recuento basadas en la formación de colonias

observable (técnicas biológicas) hay una serie de procedimientos de recuento
basado en técnicas químicas, físicas e inmunológicas.
Métodos físicos para la detención de microorganismos.
A) Impedancia: Es la resistencia aparente presentada a la corriente alterna. En un cultivo

los microorganismos alteran los substratos cambiando su conductividad eléctrica y esto
varía la impedancia. El método se basa en detectar estos cambios y la cantidad de
microorganismos se expresa como función del tiempo que tarda el cultivo en alcanzar
unos valores de impedancia correspondientes a 106 - 107 células por ml-1. (IDT:
Imdepedance Detection Time). Es necesario que el medio de cultivo permita un
crecimiento homogéneo sin «escalones».
B) Microcalorimetría: Estudio de los pequeños cambios de calor producidos como

consecuencia del antabolismo de nutrientes. Los diferentes tipos de microorganismos
metabolizan los substratos de forma diferente y, por ello, se ha usado la microcalorimetría
para poder identificar las especies presentes en un alimento: usando un medio de cultivo
con una composición definida de azúcares pueden llegar a identificarse diferentes tipos
de bacterias lácticas mediante los termogramas de su metabolización de los azúcares
presentes en el medio.
C) Citometria de flujo: Método basado en hacer pasar una a una las células de una
suspensión por un sistema de detección; este sistema puede contener un detector capaz
de medir diferentes parámetros (diferentes tipos de fluorescencia, absobancia, dispersión
de luz, etc.) lo que permite identificar las bacterias durante su paso por el detector.
Métodos químicos de detección de microorganismos.

A) Nucleasa Termoestable: S. aureus produce una nucleasa termoestable con mayor

rapidez y en mayor cantidad que la enterotoxina responsable de la intoxicación. La
endonucleasa puede detectarse experimentalmente como un índice de la presencia de S.
aureus incluso en concentraciones demasiado bajas para que hayan producido unas
cantidades detectables de enterotoxina.
B) Lisado de Limulus: Usado para detección de endotoxinas (derivadas del

lipopolisacárido LPS de las bacterias Gram negativas). Se basa en la aglutinación de
extractos de amebocito de sangre de Limulus (cangrejo de mar) producido por cantidades
del orden de picogramos de LPS. Puede detectar 300 células de E. coli. El método
detecta células viables y no-viables. Es muy rápido.
C) Sondas de ácidos nucleicos: Sirven para identificar microorganismo desconocidos

por medio de Southern.
D) PCR: Método para detectar número extremadamente bajos de microorganismos con

una cierta rapidez basado de la producción de copias de genes específicos de un
microorganismo en cuestión.
E) Medida de ATP-: Se detecta la presencia de ATP usando luciferasa, aunque hay

algunos problemas experimentales que hacen que la técnica sea controvertida.
F) Radiometria: Medida de la transformación de un substrato con 14C en 14CO2: el

tiempo necesario para detectar el 14CO2 es inversamente proporcional a la cantidad de
microorganismos presente.
G) Substratos Fluoro y Cromogénicos: Se añaden como aditivos a los medios de

cultivos para facilitar y acelerar la detección de los microorganismos.
Métodos inmunológicos
Normalmente se usan antisueros que detectan flagelos (responsables de las formas

móviles de Salmonella y otras bacterias)
A) Anticuerpo fluorescentes: Se utiliza anticuerpo marcado con una molécula

fluorescente o un segundo anticuerpo que reconozca el primero. Se pueden usar
antisueros complejos en el primer anticuerpo y de esta forma detectar cualquier tipo de
Salmonella sin necesidad de aislarlas. El método también se ha usado para Clostridios

aunque su mayor aplicación ha sido en Salmonella donde es muy conveniente por la

sensibilidad y rapidez.
B) Serologia de enriquecimiento: En este procedimiento especialmente desarrollado

para la detección de Salmonella, el antisuero no se añade al alimento sino que se efectúa
un paso previo de enriquecimiento del cultivo y de selección para evitar falsos positivos.
C) Test 1 - 2 de Salmonella: Sistema con dos cámaras de agar blando. Una de las
cámaras (la de siembra) contiene un medio selectivo para Salmonella, las bacterias
móviles de este género atraviesan la cámara selectiva y pasan a la no selectiva pero
portadora de un anticuerpo específico por lo que se forma una banda de aglutinación
cuando entre Salmonella.
D) Radioinmunoensayo: se basa en el marcaje con un radioisótopo de un antígeno

determinado (toxina producida por una bactería patógena) y su posterior detección por
anticuerpos específicos fijados sobre un soporte sólido.
E) ELISA: El método es similar al radioinmunoensayo: el antígeno se fija en un soporte

sólido, se trata con el antisuero correspondiente y la interacción se detecta mediante una
actividad marcadora (peroxidesa) unida al anticuerpo en cuestión o a un segundo
anticuerpo de revelado.
El método se ha usado para detección de Salmonellas. Toxinas de S aureus,

micotoxinas, toxinas de C. botulinum, enterotoxinas de E. coli.
F) Difusión en gel: Método de Ouchterlony para detección de antígenos.

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Universidad Nacional Federico Villarreal

Laboratorio de Microbiología II – Recuento de Coliformes: Método del Número Más Probable

Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos,

Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parámetro físico químico y

Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes,

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

 Aprender a utilizar el Método NMP en el recuento de organismos coliformes.

 Conocer las técnicas de recuento en caldo como en agar de los organismos

 Determinar el número de bacterias coliformes fecales en agua y productos para

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfológica y fisiológicamente.

Son anaeróbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm

La reacción de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa

Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.

Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O

Análisis sanitario del H2O; El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de

RECUENTO DE COLIFORMES: METODO MÁS PROBALE

Éste método se basa en la presunción de que las bacterias se hallan normalmente

La cifra media es el número más probable (Most Probable Number o MPN). S i el

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

Ésta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos coliformes,

III.- TECNICA (ICMSF 2000)

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

3.1 Material y aparatos

CALDO LACTOSA AGUA DE

TUBOS DURHAM INVERTIDOS ASA DE INOCULACION

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

 Preparación y dilución de los homogeneizados de alimentos (muestra a analizar).

 Dilución 1:100=3, dilución 1:1000= 1 y dilución 1: 10000= 0.

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

IV. PROCEDIMIENTO PARA EL RECUENTO DE COLIFORMES

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

 Para obtener el NMP, proceder de la forma siguiente:

 Para calcular el NMP de organismos coliformes por gramo de muestra, se

V.- RESULTADOS Y DISCUSION

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

10-1 10-2 10-3 NMP /100ml

Número Más Probable de Coliformes (NMP)

En este experimento, agarramos 9 tubos con caldo nutriente amarillo, le

Cada tubo tiene un tubo Durham invertido en su interior, si en el interior de este

En la dilución 10-1 hubo presencia de gases en 2 tubos.

En la dilución 10-2 hubo presencia de gases en 1 tubo.

En la dilución 10-3 no hubo presencia de gases en ningún tubo.

Por lo que se llega a la conclusión de que en menor concentración de dilución es

Con respecto a N.M.P de coliforme COVENIN dice, se considera tubo positivo en

Estimación del Número más Probable (NMP):

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

 Se basan estos métodos en la presunción de que las bacterias se hallan

 Esta técnica se usa principalmente para la estimación de bacilos

 Esta prueba que se realizo en el 3° Laboratorio de Microbiología II es

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

2. ¿Para qué sirve y qué es el Agar Eosina Azul de metileno?

Es un Medio ligeramente selectivo para el aislamiento y diferenciación de

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

En el medio EMB (eosina-azul de metileno) ciertos tipos metabólicos de bacterias

Ing. Vanessa García Díaz Ingeniería Agroindustrial

Agar EMB (Agar-Eosina-Azul de metileno-lactosa-sacarosa)

Recuento de microorganismos viables totales. (Muestras líquidas u homogeneizadas).

Se trata de conocer el número total de microorganismos presentes en el alimento.

Se han desarrollado técnicas que hacen posible la automatización del proceso.

- Hay cuatro técnicas biológicas básicas técnicas de recuento de viables:

1.- Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).