Bioquímica General

I.- Introducción

Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que
se produzca una reacción determinada.
La presencia de enzimas dentro del cuerpo de los animales, permite que muchas
reacciones puedan llevarse a cabo bajo condiciones de temperatura constante, y un pH
con poca variación.
Existiendo en el cuerpo una gran cantidad de enzimas y de acorde a la práctica
detallaremos la enzima amilasa a continuación:
La amilasa es un enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos,
específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glagolítica.
Su función es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción amilosa
de la molécula de almidón. La cual desdoblando el almidón hasta alfa dextrinas, y luego
hasta maltosa, aunque predominan las alfa dextrinas, en cierto punto de la hidrolisis, se
producen eritrodextrinas llamas así porque se tiñen de rojo si se usa Lugol

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II.- Objetivos:

Demostrar la acción que ejerce la amilasa salival sobre el almidón, demostrando la

influencia del tiempo, temperatura y pH sobre la enzima.
Comprobar que sólo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan óptimamente
catalizando una reacción enzimática con su sustrato.

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III.- Marco Teórico

La actividad enzimática puede verse afectada por cualquier factor físico o químico que
altere su estructura tridimensional. Generalmente, las condiciones óptimas se encuentran
entre límites estrechos de temperatura, pH, concentración salina, etc. A medida que las
condiciones se alejan del punto óptimo, la actividad de la enzima empieza a decrecer y
en condiciones extremas, puede perder su estructura tridimensional y se dice que la
enzima es desnaturalizada. De acuerdo con las reacciones que catalizan. (REYNA.M
2004).

La transformación de almidones en compuestos más livianos como los azúcares se puede

lograr mediante la hidrólisis enzimática, dichos azúcares pueden ser aprovechados en la
producción de alcohol etílico para diferentes propósitos como la producción de bebidas
alcohólicas. El objetivo del trabajo es determinar la ecuación cinética para la hidrólisis
enzimática, la cual debe ser usada en el diseño de reactores para la fabricación en serie de
equipos de tal modo que su uso sea difundido ampliamente en el país. (REYES.P 2012).

La amilasa, denominada también sacarosa o ptialina, es un enzima hidrolasa que tiene la

función de catalizar la reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-Amilasa
al digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples, se produce
principalmente en las glándulas salivales(sobre todo en las glándulas parótidas) y en
el páncreas. Tiene actividad enzimática a un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se
inflama, como en la pancreatitis, aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su
nivel en sangre (amilasemia). Fue la primera enzima en ser identificada y aislada
por Anselme Payen en 1833, quien la bautizó en un principio con el nombre de "diastasa”.
Las reacciones de hidrólisis se producen cuando los compuestos orgánicos reaccionan
con el agua. Se caracterizan por la división de una molécula de agua en un grupo de
hidrógeno e hidróxido con uno o ambos de estos apegándose a un producto orgánico de
partida. La hidrólisis, por lo general, requiere el uso de un catalizador ácido o base y se
utiliza en la síntesis de muchos compuestos útiles. El término "hidrólisis" significa
literalmente dividir con agua; el proceso inverso, cuando el agua se forma en una
reacción, se llama condensación. (DOMINGUEZ.G 2013).

Las enzimas son proteínas que efectúan una acción catalítica, es decir, favorecen el que
se produzca una reacción determinada.
IV.- Materiales y Métodos

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Material por equipo:

4 vaso precipitado 4 Tubos de ensayo de 15 ml

1 pinza para tubo de ensayo 1 Mechero

1 gradilla

Material biológico (proporcionado por el alumno)

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Saliva

Reactivos:

Lugol Filym A y filym B

V.- Metodología

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1.1. Experimento 1: Obtención de muestra de saliva

PASO 1:

Colocar la pieza de gasa sobre el

vaso de precipitado.

PASO 2:

Adicionar la muestra de saliva. La

cual pasará a través de la gasa y
será decepcionada en el vaso de
precipitado.

PASO 3:

Complete los 10 ml de saliva.

Siempre teniendo en cuenta que
no se forme espuma.

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1.2. Preparar un baño María a una temperatura de 40 °C.

1 PASO 2 PASO 3 PASO 4 PASO

Coger un Adicionar Poner a Entibiar a
vaso de agua hervir. temperatura
precipitado destilada . de 40° C.
de 50 ml.

Procedimiento
Primer tuvo: almidón solo
Segundo tuvo: almidón más saliva más 3 gotas de Lugol
Tercer tuvo: almidón más saliva más 3 gotas de Lugol a temperatura ambiente
Cuarto tuvo : sacarosa más saliva más 3 gotas de Lugol

OBSERVACIONES:

almidón más saliva más 3 gotas de Lugol

Se decoloro rápido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto, se

realizó la actividad enzimática óptima y rápida.

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Procedimientos con los reactivos FEHLING A Y B

OBSERVACIONES:

SE OBSERVO QUE AL AÑADIRLE EL REACTIVO FEHLING MAS LA SACAROSA SALE

UN COLOR VERDE PETROLEO .

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VI.- Resultado

INTENSIDAD DEL ACTIVIDAD

TUBO HIDRÓLISIS
COLOR AZUL ENZIMÁTICA
1 Mayor No Inicial.
2 Ínfima Si Lenta
3 Pequeña Si Rápida
4 Ínfima Si Lenta

VII.-Discusión:

En esta práctica logramos identificar como una enzima actúa sobre el almidón, y nos
ayuda a entender mejor como es que otras enzimas actúan en todo el aparato digestivo.
La enzima de la amilasa va a hidrolizar al almidón rompiendo sus enlaces y en esta
práctica comprobamos que estos enlaces se rompieron y formaron glucosa.
Pudimos identificar cómo es que la amilasa actuó sobre el almidón, también la presencia
de éste y la de sus productos: la glucosa y maltosa.

VIII.- Conclusión:
La amilasa es la enzima secretada por las glándulas salivales y la amilasa pancreática
(parótidas, submaxilares y sublinguales) encargada de romper los enlaces del almidón,
formando glucosa y maltosa.
La ð-amilasa hidroliza al almidón en ð-maltosa; la enzima actúa primero solo sobre los
extremos no reductores.
La función de la amilasa consiste en degradar el almidón para formar azúcares simples.
las enzimas catalizadoras en ese caso la amilasa actúa sobre el polisacárido el almidón,
hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el almidón se termina por transformar en
unidades de glucosa.

IX.- Bibliografía

http://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=2581978

http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/schmid
th02/parte07/01.html

http://html.rincondelvago.com/la-digestion.html

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X.- Cuestionario:
1. ¿Qué son las Unidades (enzimáticas). Todas son iguales o varían con el tipo
de sustrato que usas?
se define como la cantidad de enzima que origina la transformación de 1.0 umol (10-
6
mol) de sustrato por minuto a 25°C, en condiciones óptimas de medida, la actividad
específica es el número de unidades del enzima por miligramo de proteína.
Constituye una medida de la pureza del enzima, que aumenta durante el proceso de su
purificación, y llega a ser actividad molecular o molar, que antiguamente se llamaba
número de recambio, es el número de moléculas de sustrato transformadas por minuto
por una sola molécula de enzima (o por un solo centro activo), cuando el enzima es el
factor limitante de la velocidad.
2.¿Cómo afecta el NaCl en la actividad de la amilasa?
En la presencia de NaCl la actividad enzimática de la ααamilasa aumenta ya que necesita
un tiempo menor al del control para lograr el efecto acromático. Se podría suponer que
Na+ o Cl" o ambos pueden afectar la acción enzimática de ααamilasa.
3. ¿En el reino vegetal, donde podemos encontrar amilasa?
La Celulosa al ser un polisacárido estructural formado por la polimerización de
monómeros de Beta-glucosa forma la estructura de los seres vivos (pared celular en
vegetales), únicamente hay una enzima llamada Celulosa que destruye las paredes
celulares para utilizarlas como combustible de energía.
4.¿Cuál es el pH en el cual la actividad de la amilasa es óptima?
El pH óptimo para que la amilasa realice su actividad enzimática, está dentro del rango
5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y pancreática. La amilasa fue
desnaturalizada por el medio ácido donde se encontraba.
5. Haga un esquema de la estructura de amilosa y de amilopectina

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6. Describir un método para determinar azúcares reductores.

El reactivo de Tollens

La prueba de Tollens, también conocida como prueba de espejo de plata, es una prueba
de laboratorio cualitativa que se usa para distinguir entre un aldehído y una cetona.
Explota el hecho de que los aldehídos se oxidan fácilmente, mientras que las cetonas no.

En la prueba de Tollens se utiliza una mezcla conocida como reactivo de Tollens, que es
una solución básica que contiene iones de plata coordinados con amoniaco.

Este reactivo no está disponible comercialmente debido a su corta vida útil, por lo que
debe ser preparado en el laboratorio cuando se vaya a emplear.

La preparación del reactivo implica dos pasos:

Paso 1: El nitrato de plata acuoso se mezcla con hidróxido de sodio acuoso.

Paso 2: Se agrega amoniaco acuoso gota a gota hasta que el óxido de plata precipitado se
disuelve por completo.

El reactivo de Tollens oxida los aldehídos que estén presentes en los azúcares reductores
correspondientes. La misma reacción implica la reducción de los iones de plata del
reactivo de Tollens, que los convierte en plata metálica. Si la prueba se lleva a cabo en un
tubo de ensayo limpio, se forma un precipitado plateado.

Así, un resultado positivo con el reactivo de Tollens se determina mediante la observación

de un “espejo de plata” en el interior del tubo de ensayo; este efecto espejo es
característico de esta reacción.

Importancia

Determinar la presencia de los azúcares reductores en distintas muestras es importante en

varios aspectos que incluyen la medicina y la gastronomía.

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