Universidad Nacional Autónoma de Honduras.

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia

Departamento de Control Químico Farmacéutico
Química Analítica V (CQ-425)

Guía de Electroforesis Capilar

1) Definición de electroforesis
Es un método de separación, definida como el movimiento o desplazamiento
diferencial de especies cargadas(iones), sustancias neutras o migración pasiva, por
atracción o repulsión en un campo eléctrico.

2) ¿Como se encuentra constituido el aparato para la electroforesis capilar?

R/ este aparato está constituido por:
 Fuente de poder(fp) de alto voltaje (20-30kv)
 Un capilar de silica ( de 25 a 75 µm de diámetro interno y de 100-200 µm de
diámetro extremo ).
 Electrodos de platino (ubicados dentro del recipiente que contiene el buffers).
 El carrousel (contiene los buffers y las muestras).
 Puede estar termostizado.

3) Mencione las técnicas electroforesis según la separación efectuada acorde a la

movilidad de los iones.
 Electroforesis capilar simple
 Electroforesis de zona
 Electroforesis capilar por isoelectroenfoque
 Isotocoforesis

4) Defina los métodos mas utilizados para la introducción de la muestra:

Inyección electrocinética: consiste en retirar del recipiente con la solución
amortiguadora uno de los extremos del capilar y el electrodo correspondiente para
introducirlos en otro recipiente donde se encuentra la muestra.
Inyección por presión o hidrodinámica: consiste en introducir de manera momentánea
uno de los extremos del capilar en un recipiente que contiene la muestra mediante la
aplicación de una diferencia de presión al introducirla en el capilar.

5) ¿Desventajas de la inyección por presión?

R/ esta técnica no diferencia entre iones mas o menos moviles en la introducción de
la muestra. *¨No puede utilizarse para capilares rellenos de gel.
6) Mencione los tipos de detectores que han sido desarrollados para la
electroforesis capilar
 Detectores de fluorescencia
 Detectores de electroquímica
 Detectores de conductividad
 Detectores ultravioletas
 Detectores UV-visible

7) ¿Qué es el flujo electrosmotico o electroendosmosis?

Este flujo es el fundamento de la electroforesis capilar, provoca el desplazamiento de
la solución amortiguadora por influencia del campo eléctrico, y no solo migración de
los analitos cargados. Es característico de algunos tipos de electroforesis que se
ionizan o adquieren cargas negativas.

8) Mencione otras técnicas electroforéticas

 cromatografía capilar
 Microelectroforesis
 Inmunoelectroforesis

9) ¿Como puede ser desarrolla la E.C. de acuerdo a la polaridad?

Puede ser desarrollada empleando polaridad (+) o (-), el valor del pH permite definir
el sentido de la migración a pH bajas muchas proteínas y péptidos son catiónicos y
migran hacia el cátodo negativo en el extremo del capilar, inversamente a pH elevados
muchas biomoléculas tienen una carga neta negativa y migran hacia el ánodo
positivamente cargado.

10) ¿Qué es la electroforesis capilar de zona (CZE)?

Tipo de electroforesis mas empleado. Se emplea un medio de soporte (capilar, gel o
papel); que permita la separación de cada componente en una zona pura.

11) Mencione algunas aplicaciones de la electroforesis capilar de zona.

 Se emplea para separar iones pequeños, cationes y aniones. (en el caso de los
aniones se suele invertir el flujo electrosmotico tratando las paredes del
capilar con una sal de alquilamonio -bromuro de cetil trimetilamonio-).
 Para la separación de moléculas siempre que sean iones o puedan producirlo.
Ejemplos: herbicidas sintéticos, plaguicidas, fármacos (ácido carboxílicos)
proteínas, aminoácidos e hidratos de carbono.

12) ¿Qué es la electroforesis capilar en Gel (PAGE)?

Técnica que se desarrolla para la separación de moléculas de gran tamaño y peso
molecular como proteínas o fragmentos de ADN; el capilar este relleno de una matriz
polimérica con estructura de gel poroso en cuyo interior se encuentra la solución
amortiguadora.
13) Mencione los tipos de gel utilizados en electroforesis capilar en Gel (PAGE)
 Polimero de poliacrilamida.
 PAGE-SDS (podecilsulfato-sodico).

14) Que es la isotacoforesis capilar (CITP)

Es la migración de los analitos cargados a la misma velocidad. Este tipo de
electroforesis emplea 2 soluciones amortiguadoras distintas entre las que se introduce
la muestra:
1) Solución amortiguadora que contiene iones con mayor movilidad que los iones
analito: solución frontal.
2) Solución amortiguadora que contiene iones de menos movilidad que los iones
analito: solución rezagada o terminal.

15) Propiedades que deben reunir el buffer empleado en electroforesis capilar:

1) Buena capacidad en el rango encontrado
2) Baja absorbancia en la longitud de onda empleada en la detección
3) Baja movilidad (baja concentración iónica).