TINCION DE PROTEINAS CON NITRATO DE PLATA.

Las soluciones deben prepararse frescas. Los recipientes a utilizar

deben estar limpios y el agua de las soluciones debe ser nanoQ.
No tacar el gel con los dedos, por lo que conviene sacar las
soluciones por aspiración.

Límite de detección de 2 a 5 ng. de proteína por banda.

1-MATERIALES:

-Solución de fijación:
Standart. Para300 ml.
12% de Acido acético. 36 ml.
50% de Etanol. 150 ml.
0.5 ml/lt.de formaldehído 37% 150 ul.

-Solución de lavado:
Standart. Para 400 ml.
Etanol al 50 %. 200 ml.

-Solución de tiosulfato:
Standart Para 100 ml.
Na 2 S 2 O 3 . 5 H2O a 0,2 g/lt. 0,02 gr.

-Solución de nitrato de Ag.

Standart Para 100 ml
2 gr./lt. de AgNO 3 0,2 gr.
0,75 ml./lt. de formolaldehido 37% 75 ul.

-Solución de revelado :
Standart Para 100 ml.
30 gr./lt. Na 2 CO 3 ( 3%) 3 gr.
20 ml./lt. de tiosulfato. 2 ml Sn. anterior
0,5 ml/ Lt. de formaldehído 37%. 50 ul.

-Solución de Conservación:
25 % de Etanol.
3% de glicerol.

2-PROCEDIMIENTO:
I. Mantener el gel en solución de fijación durante 1 hr.en agitación
lenta, o dejar O:N.en la misma solución.

II. Lavar tres veces en solución de lavado ( 5 min, 10 y 15 min.).

III. Enjuagar rápidamente con la solución de tiosulfato.

IV. Enjuagar rápido con agua nano Q. por tres veces.

V. Incubar durante 20 min. en la solución de nitrato de plata.

VI. Enjuagar otras 3 veces con agua.

VII. Revelar las proteínas en la solución de revelado, hasta

visualizar las bandas.

VIII. Incubar 5 min. en la solución de fijación restante y lavar con

la solucion de lavado. Finalmente colocar en la solución de
conservación.