UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADEMICA DE INGENIERA

AGROINDUSTRIAL

TITULO: CONSUMO DE GLUCOSA EN ANAEROBIOSIS Y

AEROBIOSIS POR Saccharomyces cerevisiae

CURSO: LABORATORIO DE BIOQUIMICA

DOCENTE: Castro Malabrigo, Victor Manuel

INTEGRANTES:

- Santillan Vargas, Deliana

- Zamudio Aranda, Rolando

2018
 COMPONENTES DE LA CADENA RESPIRATORIA
EFECTO INHIBIDORES
1.- Introducción:

La cadena respiratoria es un conjunto de proteínas transportadoras de

electrones en la membrana interna mitocondrial, con grupos prostéticos
capaces de aceptar y donar uno o dos electrones. Cada componente de la
cadena puede aceptar electrones del transportador precedente y transferirlos
al siguiente en una secuencia específica, hasta llegar al oxígeno y reducirlo a
agua. Este flujo electrónico permite a la ATP sintasa sintetizar ATP. (“Cadena
transportadora de electrones”, 1999)

Está formada por una serie de transportadores de electrones situados en

la cara interna de las crestas mitocondriales y que son capaces de transferir los
electrones procedentes de la oxidación del sustrato hasta el oxígeno molecular,
que se reducirá formándose agua.
Como resultado de esta transferencia de electrones, los transportadores se
oxidan y se reducen alternativamente, liberándose una energía que en algunos
casos es suficiente para fosforilar el ADP y formar una molécula de ATP. Se trata
de la fosforilación oxidativa que permite ir almacenando en enlaces ricos en
energía la energía contenida en las moléculas NADH2, FADH2, NADPH2, que se
liberan en la glucólisis y en el ciclo de Krebs y que será más tarde fácilmente
utilizada. Toda cadena respiratoria que comience por el NAD conduce a la
formación de 3 ATP mientras que si comienza por el FAD produce sólo 2 ATP. El
rendimiento energético del NADP es similar al del NAD, así como el del GTP lo
es al del ATP. (“Respiración celular”, 2014)

Las moléculas transportadoras de electrones de la cadena respiratoria

están agrupadas en cuatro grandes complejos supramoleculares situados en
la membrana mitocondrial interna:

 Complejo I o Complejo NADH óxido reductasa.

 Complejo II o Complejo Succinato Q reductasa.
 Complejo III o Complejo Q citocromo C óxido reductasa.
 Complejo IV o Complejo citocromo C-oxidasa.

2.- Objetivo:
- Demostrar el efecto de algunos inhibores sobre la cadena respiratorio con
el objetivo de identificar sus componentes, empleando para ello enzimas de
homogenizado hepáticos.
3.- Materiales:
Según el Protocolo de Práctica.

4.- Procedimiento:
A) Sistema de Incubación con el Sustrato Oxidable Succinato

Se necesitaron 6 tubos para este sistema:

Tubo 1:

- Añadimos 1,5 ml de Buffer fosfato de sodio 0,1 M , 1ml del indicador

2,6 diclorofenolindofenol y 0,2ml del sustrato succinato 0,1M.
Dejamos reposar a temperatura ambiente por 15 minutos para ver el
cambio de color del indicador.

Tubo 2:

- Añadimos 1,2ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M, 1ml del indicador 2,

6 diclorofenolindofenol y 0,5 ml del homogenizado hepático.
Dejamos reposar a temperatura ambiente por 15 minutos para ver el
cambio de color del indicador.

Tubo 3:

- Añadimos 1ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M, 1ml del indicador 2,6
diclorofenolindofenol, 0,2ml del sustrato succinato y 0,5ml del homog
enizado hepático.
Igualmente dejamos reposar a temperatura ambiente por 15 minutos
para ver el cambio de color del indicador.

Tubo 4,5 y 6:

- Añadimos 0,5ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M, 1ml del indicador 2,

6 diclorofenolindofenol, 0,2ml del sustrato succinato, 0,5 ml de los in
hibidores Malonato 0,1M, Cianuro de sodio 0,1M y Barbiturato de sodi
o 0,1M a cada tubo respectivamente y finalizamos agregándole 0,5 ml
de homogenizado hepático.
Dejamos reposar a temperatura ambiente por 15 minutos para ver el
cambio de color del indicador a causa de los inhibidores.
 B) Sistema de Incubación con el Sustrato indicador p-Fenilendiamina:

Se necesitaron 5 tubos para este sistema:

Tubo 1:
- Agregamos 2ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M y 0,5ml del sustrato i
ndicador p-Fenilendiamina 1% en KCL.
Dejamos reposar por 15 minutos a temperatura ambiente y analizar el
cambio de color del indicador.
Tubo 2:
- Agregamos 1,5ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M, 0,5ml del sustrato i
ndicador p-Fenilendiamina 1% en KCL y 0,5 ml del homogenizado hepáti
co.
Tubo 3,4 y 5:
- Añadimos 1ml de Buffer fosfato de sodio 0,1M, luego agregamos 0,5 m
l de los siguientes inhibidores a cada uno de los tubos respectivamente
: Cianuro de sodio 0,1M, Malonato 0,1M y Barbiturato de sodio 0,1M, ta
mbien agregamos 0,5ml del sustrato indicador p-Fenilendiamina 1% en
KCL y finalizando agregamos 0,5ml de homogenizado hepático.
Dejamos reposar por 15 minutos para ver el cambio de color.

5.- Resultados:

Fig.1 Color final de la muestra en tubos de

Fig.2 Color final de la muestra en tubos de
ensayo de Sustrato Oxidable Succinato.
ensayo del Sustrato indicador p-Fenilendiamina.
Tabla 1

Sistema con el Sustrato Oxidable Succinato

Caracteristicas Tubo1 Tubo2 Tubo3 Tubo4 Tubo 5 Tubo 6

Color Inicial Azul Azul Azul Azul Azul Azul

Azul Azul Incoloro Azul Incoloro Incoloro

Color Final

Oxido-reduccion No No Sí No Sí Sí
(Si/No)

Inhibición (Si/No) No No No Si No No

Tabla 2

Sistema con el sustrato indicador p-Fenilendiamina

Tubo1 Tubo2 Tubo3 Tubo4 Tubo 5

Color Inicial Incoloro Incoloro Incoloro Incoloro Incoloro

Incoloro Marrón Incoloro Marrón Marrón

Color Final

Oxido-reducción No Si No Si Si
(Si/No)

Inhibición (Si/No) No No Si No No

6.- Discusión:
A) Sistema de Incubación con el Sustrato Oxidable Succinato:
B) Sistema de Incubación con el Sustrato indicador p-Fenilendiamina:

7.- Conclusión:

8.- Referencias Bibliográficas:

- - Cadena transportadora de electrones (1999). Recuperado de
https://biologia-
geologia.com/biologia2/72223_cadena_transportadora_de_electrones.html

- Kevf Rafhael Diaz Muñoz (2014) Recuperado de: edoc.site/efecto-de-los-

inhibidores-en-la-cadena-respiratoria-pdf-free.html