CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOLOGIA
UNIDAD ACADEMICA: PROGRAMA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
CURSO: LABORATORIO DE BIOLOGÍA
PRACTICA Nº 9: ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

1. OBJETIVOS
 Conocer que es una enzima y cómo éstas actúa en reacciones intracelulares.
 Identificar factores que afectan la actividad enzimática.
 Distinguir entre inhibición competitiva e inhibición no-competitiva.

2. CUESTIONARIO
ENZIMAS: ¿Qué son? ¿Cómo actúan? ¿Qué factores afectan a su actividad?
Buscar información sobre la enzima catalasa: ¿Qué reacción cataliza? ¿Dónde se encuentran?

FUNDAMENTO TEORICO
Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias
para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no fuera
por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido.

Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos que agilizan
una reacción que envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos. Las enzimas no se
consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se necesitan en grandes
cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un complejo enzimasustrato; esto
ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son muy
selectivas porque pocas moléculas pueden interactuar bien con este sitio (Figura 1).

Las reacciones químicas que se dan en los seres vivos no podrían tener lugar sin la presencia de los
enzimas. Estas macromoléculas, que generalmente son proteínas, catalizan las reacciones
bioquímicas, permitiendo que los sustratos se conviertan en los productos que necesita la célula.
Como todo catalizador, los enzimas no se consumen en las reacciones que catalizan, pero a
diferencia de otros catalizadores de naturaleza inorgánica, las reacciones que catalizan son muy
específicas: sólo interaccionan con determinados sustratos, y sólo facilitan el curso de determinadas
reacciones. Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa, necesaria
para descomponer el peróxido de hidrógeno, un compuesto tóxico, que se produce durante el
metabolismo celular.

Estructura y función de una enzima

Las enzimas son grandes proteínas que aceleran las reacciones químicas. En su estructura globular,
se entrelazan y se pliegan una o más cadenas polipeptídicas, que aportan un pequeño grupo de
aminoácidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la
reacción. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud.
Este hecho asegura que la enzima no participa en reacciones equivocadas. La enzima misma no se
ve afectada por la reacción. Cuando los productos se liberan, la enzima vuelve a unirse con un nuevo
sustrato.
Las enzimas reducen la energía de activación necesaria para llevar a cabo una reacción; es decir,
reducen la barrera de energía que hay que sobrepasar para que la reacción se lleve a cabo. Las
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enzimas trabajan óptimamente bajo condiciones específicas y ciertos cambios pueden alterar el
funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla. Algunas enzimas necesitan activadores
para cambiar su conformación de modo que pueda formarse el complejo enzima–sustrato. Estos
activadores se conocen como cofactores y pueden ser tan simples como iones metálicos. Los
cofactores orgánicos se conocen como coenzimas. Las enzimas pueden afectarse negativamente por
inhibidores que impidan la actividad enzimática. Estos inhibidores pueden afectar el sitio activo de dos
maneras: competitivamente, al bloquear el sitio activo, o no competitivamente, al pegarse en otro
lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma del sitio activo.

Figura 1. Reaccion con participacion de una enzima

3. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos
- Pipeta de 5 mL - Papa (catalaza) - Ácido clorhídrico o
-Tubos de ensayo - Hielo sulfúrico
- Cajas de Petri - Peróxido de hidrógeno
- Mechero al 5%
- Termómetro - Cloruro de mercurio
- Pinzas metálicas (metal pesado)
- Nitrato de palta o de
plomo al 1%
- Dióxido de Manganeso
(catalizador inorgánico)
- Hidróxido de sodio
(NaOH)

4. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
Para el presente laboratorio utilizaremos la catalasa (presente en la papa) como enzima en las
diferentes reacciones a estudiar.
Numere tubos de ensayo del 1 al 7 y coloque en ellos los siguientes materiales
• Tubo 1: 2 ml de agua destilada + un trozo de papa (0.2 cm).
• Tubo 2: 2 ml de Peróxido de hidrógeno + un trozo de papa.
• Tubo 3: En el tubo de ensayo coloque un trozo de papa y llévelo en un recipiente con hielo.
Constante que la temperatura permanezca a 4°C. Agregue 2 ml de peróxido de hidrógeno y observe
qué sucede. Saque el tubo del hielo y déjelo a temperatura ambiente.
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• Tubo 4: En el tubo de ensayo con 3 ml de agua coloque un trozo de papa y llévelo a baño maría a
100°C por 5 min. Retire el agua del tubo y agregue 2 ml de peróxido de hidrógeno.
• Tubo 5: Coloque en una caja de Petri un trozo de papa cubierto totalmente con ácido clorhídrico o
sulfúrico por un tiempo de 5 a 10 min. Luego retire el trozo de papa y llévelo a un tubo que contenga 2
ml de peróxido de hidrógeno.
• Tubo 6: Coloque en una caja de Petri un trozo de papa cubierto completamente con NaOH por un
tiempo de 5 a 10 min. Luego retire el trozo de papa y llévelo a un tubo que contenga 2 ml de peróxido
de hidrógeno.
• Tubo 7: Coloque en una caja de Petri un trozo de papa cubierto completamente con cloruro de
mercurio por un tiempo de 5 a 10 min. Luego retire el trozo de papa y llévelo a un tubo que contenga
5 ml de peróxido de hidrógeno.

Ahora repita el procedimiento anterior desde el tubo 2 remplazando el catalizador orgánico (Catalasa)
por el catalizador inorgánico (MnO2) y observe lo que sucede

5. RESULTADOS
Complete la siguiente tabla teniendo en cuenta el procedimiento realizado durante la práctica.

TUBO ENZIMA (CATALASA) CAT. INORG. (MnO2) OBSERVACIONES

6. BIBLIOGRAFIA
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LABORATORIO DE BIOLOGIA
AVERS, CHARLOTTE J. 1991. Biología Celular. Segunda edición. Grupo Editorial Iberoamericana
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Curtis, Barnes, Schnek, & Flores. (2006). Invitación a la Biología (Sexta ed.). Argentina: Medica
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Karp, G. (2009). Biologia Celular y Molecular (Quinta edición ed.). Mexico: The McGraw Hill
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Jürgen Bergmeyer and Marienne Grabl, 1984. Methods of Enzymatic Analysis, Third Edition, Verlag
Chemie.