MEDIANTE EL METODO DE AZUL DE PRISSIAN.

INTRODUCCION:
se determina generalmente por el método espectrofotométrico de azul de prussiam a 720
nm. Esta prueba se basa en la reducción de los iones Fe3+a Fe2+ por los poli fenoles
mostrando una coloración azul, formando el complejo ferrocianuro – ferroso.

MATERIALES Y METODOS
Equipos e Instrumentos:
Espectrofotómetro Uv – Vis, balanza analítica, agitador magnético, vaso de
precipitación, fiolas, micro pipetas, tips (1000 y 200 L) embutidos, papel filtro, tubo de
ensayo gradilla, cubetas de poliestireno para espectrofotométrico.
Reactivos:

FeCl3, K3Fe(CN)6, acido galic, HCl

(36.36;37%; 1.19 g/mL.

Solución A: 0.5 mM, FeCl3.6 H2O (270.3; 99.0%) en 0.01 N HCL

Solucion B: 0,5 mM K3Fe(CN)6 (329.25; 99.0%) en H2O destilada.

a. Preparación de los extractos acuosos.

Pesar 1 gramo de muestra y colocar 100 ml H2O destilada caliente a temperatura de ebullición,
agitar durante 5 minutos, filtrar y almacenar en refrigeración.

b. Curva de calibración.

1. Preparar una solución stock de 5 ml a 10 ml de acido galico.

2. Colocar en un tubo de ensayo 350 L de acido galico ( solución de trabajo de
5 a 10 ug/ml), adicionar 350 L de solución A, luego adicionar 350 L del
solución B. transcurrido 15 minutos transferir a las cubetas de poliestileno y
leer Abs. a 725 nm. El blanco se realiza empleando las mismas proporciones,
pero en lugar de soluciones de trabajo se usa agua destilada (los valores de
Abs. registrados en el espectrofotómetro calibrar a cero).
3. Mediante ARLn de las Abs Vs concentración de acido galico, obtener la
ecuación de la curva de calibración.
RESULTADOS Y DESCUSIONES.
CONCLUCIONES.
REFERENCIAS
Margraf, T, Karnopp, A,R, Rosso, N,D, & Granato, D, (2015) comparison between Folin –
Ciocalteu and Prussian Blue Assays to Estime The Total Phenolic Content of Juices and
Teas Using 96-well Microplates. Journal Of science, 80(11)