Guia de practica Nº 04

CUANTIFICACION DE POLIFENOLES TOTALES,

MEDIANTE EL METODO DE AZUL DE PRISSIAN.

INTRODUCCION:
El contenido de poli fenoles torales de producto alimenticios, se
determina generalmente por el método espectrofotométrico de azul de
prussiam a 720 nm. Esta prueba se basa en la reducción de los iones
Fe3+a Fe2+ por los poli fenoles mostrando una coloración azul,
formando el complejo ferrocianuro – ferroso.
MATERIALES Y METODOS
Equipos e Instrumentos:
Espectrofotómetro Uv – Vis, balanza analítica, agitador magnético,
vaso de precipitación, fiolas, micro pipetas, tips (1000 y 200 L)
embutidos, papel filtro, tubo de ensayo gradilla, cubetas de
poliestireno para espectrofotométrico.
Reactivos:
FeCl3, K3Fe(CN)6, ácido gálica, HCl
(36.36;37%; 1.19 g/mL.

Solución A: 0.5 mM, FeCl3.6 H2O (270.3; 99.0%) en 0.01 N HCL

Solución B: 0,5 mM K3Fe(CN)6 (329.25; 99.0%) en H2O destilada.

a. Preparación de los extractos acuosos.

Pesar 1 gramo de muestra y colocar 100 ml H2O destilada caliente a
temperatura de ebullición, agitar durante 5 minutos, filtrar y
almacenar en refrigeración.

b. Curva de calibración.

1. Preparar una solución stock de 5 ml a 10 ml de acido galico.

2. Colocar en un tubo de ensayo 350 L de acido galico (
solución de trabajo de 5 a 10 ug/ml), adicionar 350 L de
solución A, luego adicionar 350 L del solución B.
transcurrido 15 minutos transferir a las cubetas de
poliestileno y leer Abs. a 725 nm. El blanco se realiza
empleando las mismas proporciones, pero en lugar de
soluciones de trabajo se usa agua destilada (los valores de
Abs. registrados en el espectrofotómetro calibrar a cero).
3. Mediante ARLn de las Abs Vs concentración de acido galico,
obtener la ecuación de la curva de calibración.
RESULTADOS Y DESCUSIONES.
CONCLUCIONES.
REFERENCIAS
Margraf, T, Karnopp, A,R, Rosso, N,D, & Granato, D, (2015) comparison
between Folin – Ciocalteu and Prussian Blue Assays to Estime The
Total Phenolic Content of Juices and Teas Using 96-well Microplates.
Journal Of science, 80(11)